Ūmus mankštos sukeltas azoto oksido susidarymas padidina sveikų asmenų cirkuliuojančių endotelio pirmtakų ląstelių reguliavimą | žmogaus hipertenzijos žurnalas

Ūmus mankštos sukeltas azoto oksido susidarymas padidina sveikų asmenų cirkuliuojančių endotelio pirmtakų ląstelių reguliavimą | žmogaus hipertenzijos žurnalas

Anonim

Anotacija

Įrodyta, kad mankšta skatina cirkuliuojančių endotelio pirmtakų ląstelių (EPC) skaičių ir aktyvumą žmonėms, o tai prisideda prie endotelio funkcijos pagerėjimo ir širdies bei kraujagyslių homoeostazės palaikymo. Tačiau mechanizmas, lemiantis fizinio krūvio poveikį sveikų asmenų kraujyje cirkuliuojančiam EPC, nėra visiškai aiškus. Čia mes ištyrėme, ar ūmaus fizinio krūvio reguliavimas cirkuliuojančiuose EPC yra susijęs su azoto oksidu (NO), kraujagyslių endotelio augimo faktoriais (VEGF) ir granulocitų makrofagų kolonijas stimuliuojančiu faktoriu (GM-CSF), žinomu, kad moduliuotų sveikų asmenų kraujyje cirkuliuojančius EPC. Iš viso 16 sveikų savanorių vyrų buvo modifikuotas Bruce'o bėgimo tako ūmių pratimų protokolas. Buvo išmatuotas cirkuliuojančių EPC skaičius ir aktyvumas, taip pat NO-VEGF ir GM-CSF kiekis plazmoje ir kultūrinėje terpėje prieš ir po fizinių pratimų sveikiems asmenims. Cirkuliacinių EPC skaičius ir aktyvumas po ūmios mankštos buvo žymiai didesnis nei sveikų asmenų prieš mankštą. Tuo pačiu metu ūmi mankšta reikšmingai padidino sveikų asmenų NO kiekį plazmoje. Tarp padidėjusio NO lygio plazmoje ir padidėjusio cirkuliuojančių EPC yra reikšmingas tiesinis regresijos ryšys. Tačiau po ūmaus fizinio krūvio VEGF ir GM-CSF koncentracijos plazmoje pokyčių nebuvo. Kultūrinių EPC išskiriami NO-VEGF ir GM-CSF reagavo į ūmią mankštą. Šis tyrimas pirmą kartą įrodo, kad ūmaus fizinio krūvio sukelta NO gamyba prisideda prie sveikų asmenų kraujyje cirkuliuojančių EPC reguliavimo. Tai rodo, kad NO vaidina svarbų vaidmenį reguliuojant mankštinimąsi cirkuliuojančiais EPC.

Įvadas

Endotelio funkcijos vientisumas yra būtinas žmonių širdies ir kraujagyslių sveikatai palaikyti. 1, 2 sukaupti duomenys rodo, kad cirkuliuojančios endotelio progenitorinės ląstelės (EPC), gautos iš kaulų čiulpų, vaidina svarbų vaidmenį reguliuojant endotelio funkciją. 3, 4, 5, 6 Buvo pranešta, kad cirkuliuojantys EPC gali padidinti neovaskuliarizaciją, atitaisyti endotelio sužalojimus ir pagerinti endotelio funkciją. 3 Tačiau esant širdies ir kraujagyslių sistemos rizikos veiksniams, sutrinka cirkuliuojančių EPC skaičius ir aktyvumas, o tai sukelia endotelio disfunkcijos vystymąsi. 4, 5, 6, 7, 8, todėl padidėjęs cirkuliuojančių EPC skaičius ir aktyvumas pagerina endotelio funkciją. 9

Fizinis krūvis yra svarbus sveikų asmenų endotelio funkcijos gerinimo metodas, kuris skatina širdies ir kraujagyslių sveikatą bei apsaugo nuo kraujagyslių ligų. 10, 11, 12 Naujausi tyrimai parodė, kad pacientams, sergantiems koronarine širdies liga ir širdies bei kraujagyslių rizikos veiksniais, fiziniai pratimai gali efektyviai padidinti cirkuliuojančių EPC, kurie pagerina endotelio funkciją, skaičių. 13, 14, 15, 16, 17, 18 Be to, buvo pranešta, kad ūmus mankšta gali padidinti sveikų asmenų cirkuliuojančių EPC skaičių ir aktyvumą. 19 Taigi mankštos suaktyvinti cirkuliuojantys EPC gali būti nauja sąvoka, patvirtinanti teigiamą mankštos poveikį endotelio funkcijai.

Ankstesni tyrimai parodė, kad pacientams, sergantiems vainikinių arterijų liga, reguliarus mankštos sukeltas padidėjęs cirkuliuojančių EPC skaičius yra susijęs su padidėjusia azoto oksido (NO) gamyba 13, 14, o ūmios mankštos sukeltas padidėjęs cirkuliuojančių EPC skaičius - dėl miokardo išemijos. stimuliuojami kraujagyslių endotelio augimo faktoriai (VEGF). 16, 17 Gerai nustatyta, kad NO-VEGF ir granulocitų makrofagų kolonijas stimuliuojantis faktorius (GM-CSF) vaidina svarbų vaidmenį reguliuojant cirkuliuojančių EPC skaičių ir aktyvumą. 20, 21, 22, 23 NO ne tik moduliuoja EPC mobilizaciją iš kaulų čiulpų, bet ir skatina migracinį ir proliferacinį EPC aktyvumą. 20, 21 VEGF ir GM-CSF yra stiprūs citokinai, skirti mobilizuoti cirkuliuojančius EPC iš kaulų čiulpų. 22, 23 Taigi, mes hipoteze, kad ūmaus fizinio krūvio reguliavimas cirkuliuojančių EPC sveikiems asmenims taip pat gali būti susijęs su NO-VEGF ir GM-CSF. Norėdami išspręsti šią prielaidą, stebėjome ūmaus krūvio poveikį sveikų asmenų kraujyje cirkuliuojančių EPC skaičiui ir aktyvumui ir ištyrėme galimą NO-VEGF ir GM-CSF vaidmenį reguliuojant ūmią mankštą cirkuliuojančiuose EPC.

Metodai

Tyrimo protokolas

Mes priėmėme 16 sveikų, nerūkančių, vyrų savanorių (21–31 metų) iš laboratorijos darbuotojų ir mūsų ligoninės studentų. Tiriamieji neturėjo medicininės anamnezės, kraujagyslių rizikos veiksnių ar medicininio gydymo, prieš pradedant tyrimą jie užpildė fizinio aktyvumo klausimyną. Prieš šį tyrimą visiems savanoriams buvo atlikta fizinė apžiūra ir laboratoriniai tyrimai. Pagrindinės tiriamųjų klinikinės charakteristikos yra išvardytos 1 lentelėje. Visiems dalyviams buvo pavesta laikytis dietos, ribojamos nitritų ir (arba) nitratų, ir susilaikyti nuo didelių fizinių pratimų 48 valandas prieš imant mėginius plazmos nitratui. Pagal testavimo ir treniruotės normatyvus savanoriai patyrė modifikuotą Bruce'o bėgimo tako ūmių pratimų protokolą (5, 5 km h −1, 14% laipsnio, 10, 2 metabolinio ekvivalento (MET)), atitinkantį labai sunkaus intensyvumo pratimus 20–39 metų sveikiems žmonėms. Amerikos širdies asociacija). Pratimai buvo nutraukti, kai savanoriai patyrė didelį fizinį išsekimą. Mūsų tyrimo pratimų trukmė buvo 9, 6 ± 2, 2 min. Kraujas buvo paimtas gulimoje padėtyje prieš ir 30 minučių po ūmaus pratimo. Šio tyrimo protokolą patvirtino Sun Yat-Sen universiteto etikos komitetas ir buvo gautas visų asmenų rašytinis informuotas sutikimas.

Pilno dydžio lentelė

Srauto citometrijos analizė cirkuliuojančių EPC skaičiui įvertinti

EPC aptikimas buvo atliktas, kaip aprašyta anksčiau. 7, 8 Trumpai tariant, 100 μl periferinio kraujo buvo imunizuoti su monokloniniais antikūnais prieš žmogaus CD34 (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, JAV, PerCP konjuguotas) ir prieš žmogaus KDR (Sigma, St Louis, MO, JAV). per PE konjuguotą antrinį antikūną. Isotipams identiški antikūnai buvo naudojami kaip kontrolė (Becton Dickinson). Po inkubacijos ląstelės lizuojamos, plaunamos PBS ir fiksuojamos 4% paraformaldehide prieš analizuojant 60 000 įvykių, pašalinus šiukšles ir trombocitus. Norint įvertinti EPC matavimų pakartojamumą, iš dviejų atskirų kraujo mėginių du kartus buvo išmatuoti cirkuliuojantys EPC iš tų pačių asmenų ( n = 16), atskleidžiant labai glaudžią koreliaciją ( r = 0, 81, P <0, 01). Cirkuliacinių EPC skaičius buvo įvertintas pagal CD34 + KDR + ląstelių santykį 100 periferinio kraujo mononuklearinių ląstelių (PBMNC). 7, 8

Ląstelių kultūros tyrimas cirkuliuojančių EPC skaičiui įvertinti

Sveikų asmenų PBMNC buvo išskirti ir kultivuojami taip, kaip aprašyta anksčiau. 3, 17, 25 Norint įvertinti cirkuliuojančių EPC skaičių, prijungtos ląstelės buvo nudažytos 1, 1′-dioktadecil-3, 3, 3 ′, 3′-tetrametilindokarbocianino perchloratu pažymėtu acetiliniu MTL (DiI-acLDL, Molecular Probes, Eugene, OR, JAV) ir FITC pažymėtas „Ulex europeus agglutin“ (lektinas, Sigma), kaip aprašyta anksčiau. 8, 16 ląstelių, demonstruojančių dvigubai teigiamą fluorescenciją, buvo identifikuotos kaip EPC. 8, 16, 17 Kultūrinių EPC skaičius buvo įvertintas DiI-acLDL / lektino dvigubai teigiamomis ląstelėmis / × 200 ir rankiniu būdu suskaičiuoti dviejų nepriklausomų stebėtojų, aklų tyrimui. 7, 14, 17, 19

EPC migracijos tyrimas

EPC migracija buvo nustatyta naudojant modifikuotą Boydeno kamerą. 7, 26, 27 EPC buvo surinkti centrifuguojant, resuspenduoti 500 μl endotelinės bazinės terpės (EBM) ir suskaičiuoti. Tada į modifikuotos Boydeno kameros viršutinę kamerą buvo dedami 2 × 104 EPC. Kamera buvo dedama į 24 šulinėlių kultūros indą, kuriame yra EBM ir žmogaus rekombinantinis VEGF (50 ng ml −1 ). Po inkubacijos 24 valandas 37 ° C temperatūroje, apatinė filtro pusė buvo plaunama PBS ir pritvirtinta 2% paraformaldehidu. Kiekybiniam įvertinimui ląstelių branduoliai buvo nudažyti 4 ', 6-diamidino-2-fenilindoliu (DAPI). Į apatinę kamerą migruojančios ląstelės buvo rankiniu būdu suskaičiuotos į tris atsitiktinius mikroskopinius laukus.

EPC proliferacijos tyrimas

Po 7 dienų kultivavimo, EPC buvo suardomi 0, 25%. tripsino, tada kultivuojama terpėje, kurioje nėra serumo, 96 šulinėlių kultūros plokštelėje (200 μl / duobutėje). Po 24 h auginimo, EPC buvo papildyti 10 μl MTT (5 g l – 1, Fluka, Buchs, Šveicarija) ir inkubuojami dar 4 valandas. Tada supernatantas buvo pašalintas aspiracijos būdu ir EPC preparatas 10 minučių purtomas 200 μl dimetilsulfoksido, prieš tai matuojant OD reikšmę 490 nm.

NO-VEGF ir GM-CSF koncentracijos plazmoje matavimas

Nitritas, stabilus NO metabolitas, buvo apskaičiuotas Greiss metodu. Ląstelių kultūros supernatantuose buvo aptiktas nitritų (NO 2 - ) ir nitrato (NO 3 - ) susidarymas. Šis tyrimas nustatė bendrą NO remiantis fermentiniu NO 3 - į NO 2 - pavertimu nitrato reduktaze (Sigma) ir nitritų kaip azoto dažų produkto nustatymu Greisso reakcijoje. Rezultatai pateikiami kaip μmol NOx NO 3 - / NO 2 - viename terpės litre.

VEGF ir GM-CSF koncentracija plazmoje buvo matuojama labai jautriais ELISA tyrimais (R&D Systems, Wiesbaden, Vokietija) pagal gamintojo instrukcijas. Mėginiai buvo tikrinami serijiniu praskiedimu ir matavimai buvo atlikti bent dviem egzemplioriais. Kintamumas tarp tyrimų ir tarp testų buvo <10%. Matavimai buvo atlikti dviem egzemplioriais. Paaiškėjo labai tiesinė kalibravimo kreivė ( r 2 > 0, 99).

NO-VEGF ir GM-CSF sekrecijos matavimas dirbtiniuose EPC

Po identifikavimo kultivuoti EPC, gauti prieš ir po mankštos, 48 ​​valandas buvo keičiami į Dulbecco modifikaciją Eagle's Medium / 20% vaisiaus galvijų serumo (be papildomų augimo faktorių). Tada kondicionuotoje terpėje buvo tiriama NO-VEGF ir GM-CSF, kaip aprašyta anksčiau.

Statistinė analizė

Statistinė programinė įranga buvo SPSS V11.5 (SPSS Inc., Čikaga, IL, JAV). Skaitmeniniai duomenys buvo pateikti kaip vidurkis ± sd. Duomenys prieš ir po treniruotės buvo lyginti naudojant suporuotą t- testą. Norint ištirti ryšį tarp padidėjusio plazmos NO lygio ir skatinamų cirkuliuojančių EPC, reaguojant į ūmią mankštą, buvo naudojama vienoda tiesinė regresija. Vertė P <0, 05 buvo laikoma reikšminga.

Rezultatai

Mankštos poveikis cirkuliuojančių EPC skaičiui

1 paveiksle parodytas ūmaus krūvio poveikis sveikų asmenų kraujyje cirkuliuojančių EPC skaičiui. Charakterizuotas atliekant fluorescenciniu būdu aktyvuotų ląstelių rūšiavimo (FACS) analizę, periferiniame kraujyje cirkuliuojančių EPC reikšmingai padidėjo po ūmaus fizinio krūvio, palyginti su prieš mankštą (1a pav.). Norint įvertinti pratimo poveikį cirkuliuojančių EPC skaičiui papildomu metodu, cirkuliuojantys EPC buvo išskirti, kultivuoti ir kiekybiškai įvertinti naudojant DiLDL įsisavinimą ir dažymą lektinu. Rezultatai atskleidė, kad ūmus mankšta taip pat reikšmingai padidino auginamų EPC skaičių (1b ir c paveikslai).

Image

Mankštos poveikis cirkuliuojančių EPC lygiui. a ) Įvertinus FACS analizę, cirkuliuojančių EPC (dvigubai teigiamas CD34 ir KDR) lygis kraujo mėginiuose padidėjo po ūmaus fizinio krūvio. ( b ) Fazinio kontrasto fluorescenciniu mikroskopu įvertinti kultivuoti EPC (dvigubai teigiami DiI-MTL ir lektino atžvilgiu) padidėjo po ūmaus krūvio. c ) Tipinė lektino ir DiLDL teigiamų EPC, gautų iš periferinio kraujo, fluorescencinė mikroskopija po ūmaus fizinio krūvio. Duomenys pateikiami kaip vidutinis ± sd P <0, 05, palyginti su prieš pratimą.

Visas dydis

Pratimų poveikis EPC veiklai

2 paveiksle parodytas ūmaus krūvio poveikis sveikų asmenų EPC aktyvumui. EPC migracinis atsakas į VEGF gradientą žymiai padidėjo po ūmaus fizinio krūvio, palyginti su prieš fizinius pratimus sveikiems asmenims (2a pav.). Panašiai, ūmus mankšta taip pat žymiai pagerino sveikų asmenų EPC proliferacinį aktyvumą (2b paveikslas).

Image

Pratimų poveikis migruojančiai ir daugėjančiai kultūringų EPC veiklai. a ) Kultūrinių EPC migracinis aktyvumas žymiai pagerėjo po ūmaus fizinio krūvio. b ) ūmus mankšta skatina kultūrinių EPC proliferacinį aktyvumą. Duomenys pateikiami kaip vidutinis ± sd P <0, 05, palyginti su prieš pratimą.

Visas dydis

Mankštos poveikis plazmos NO-VEGF ir GM-CSF lygiams

3 paveiksle parodytas ūmaus krūvio poveikis sveikų asmenų NO-VEGF ir GM-CSF kiekiui plazmoje. Po ūmaus fizinio krūvio sveikų asmenų organizme NO lygis plazmoje žymiai padidėjo, o tai parodė, kad ūmus pratimas padidino NO gamybą plazmoje (3a pav.). Tačiau sveikų asmenų VEGF koncentracija plazmoje prieš ir po ūmaus fizinio krūvio nesiskyrė (3b pav.). Taip pat ūmus mankšta reikšmingai nepakeitė sveikų asmenų GM-CSF lygio plazmoje (3c paveikslas).

Image

Mankštos poveikis plazmos NO-VEGF ir GM-CSF lygiams. a ) Po ūmaus fizinio krūvio padidėjo NO kiekis plazmoje. ( b ir c ) Nebuvo rasta jokio reikšmingo skirtumo tarp VEGF lygio plazmoje prieš ir po ūmaus krūvio. Duomenys pateikiami kaip vidutinis ± sd P <0, 05, palyginti su prieš pratimą.

Visas dydis

Mankštos poveikis NO-VEGF ir GM-CSF sekrecijai dirbtiniuose EPC

Kaip parodyta 4 paveiksle, sveikų asmenų ūmaus krūvio metu šiek tiek buvo linkę į didesnį NO sekreciją, kai kultivuojami EPC, tačiau tai nebuvo statistiškai reikšminga (4a paveikslas). Sveikiems asmenims reikšmingo skirtumo tarp kultūrinių EPC VEGF sekrecijos prieš ir po mankštos nebuvo (4b pav.). Taip pat ūmus mankšta nepakeitė sveikų asmenų kultūrinių EPC GM-CSF sekrecijos (4c paveikslas).

Image

Mankštos poveikis NO-VEGF ir GM-CSF sekrecijai dirbtiniuose EPC. a ) Ūmus mankštinimas neturėjo įtakos NO sekrecijai, kurį sukelia kultūriniai EPC. ( b ir c ) Nebuvo rasta skirtumų VEGF ir GM-CSF sekrecijai auginamuose EPC prieš ir po ūmaus krūvio. Duomenys pateikiami kaip vidurkis ± sd * P <0, 05 prieš pratimą.

Visas dydis

Koreliacija tarp padidėjusio NO lygio plazmoje ir skatinamų cirkuliuojančių EPC

5 paveiksle parodytas tiesinio regresijos santykis tarp padidėjusio NO lygio plazmoje ir skatinamų cirkuliuojančių EPC, reaguojant į ūmų krūvį. Tarp padidėjusio NO lygio plazmoje ir cirkuliuojančių EPC bei išaugintų EPC padidėjimo buvo reikšmingas tiesinės regresijos ryšys, reaguojant į ūmią mankštą (5a ir b paveikslai). Panašiai buvo reikšmingas tiesinės regresijos ryšys tarp padidėjusio NO lygio plazmoje ir padidėjusio EPC migracijos aktyvumo bei EPC proliferacinio aktyvumo, reaguojant į ūmią mankštą (5c ir d paveikslai).

Image

Linijinis regresijos ryšys tarp padidėjusio NO lygio plazmoje ir paskatintų cirkuliuojančių EPC, reaguojant į ūmią mankštą. ( a ) Tarp padidėjusio NO lygio plazmoje ir cirkuliuojančio EPC padidėjimo yra reikšmingas tiesinis regresijos ryšys. b ) tarp padidėjusio NO lygio plazmoje ir išaugintų EPC padidėjimo yra reikšmingas tiesinis regresijos ryšys. c ) tarp padidėjusio NO lygio plazmoje ir padidėjusio EPC migracijos aktyvumo yra reikšmingas tiesinis regresijos ryšys. d ) tarp padidėjusio NO lygio plazmoje ir padidėjusio EPC proliferacinio aktyvumo yra reikšmingas tiesinis regresijos ryšys.

Visas dydis

Diskusija

Šio tyrimo rezultatai rodo, kad ūmi mankšta ne tik padidina cirkuliuojančių EPC skaičių ir aktyvumą, bet ir padidina NO lygį sveikiems asmenims. Tarp padidėjusio NO lygio plazmoje ir skatinamų cirkuliuojančių EPC yra reikšmingas tiesinės regresijos ryšys, reaguojant į ūmią mankštą. Todėl mūsų tyrimas pirmą kartą įrodo, kad cirkuliuojančių EPC reguliavimas atliekant ūmią mankštą bent iš dalies yra susijęs su padidėjusia NO gamyba sveikiems asmenims, o tai patvirtina esminį NO vaidmenį reguliuojant mankštą cirkuliuojančių EPC.

Gerai žinoma, kad fiziniai pratimai gali turėti teigiamą poveikį širdies ir kraujagyslių sistemai, nes pagerina endotelio funkciją. 10 Naujausi tyrimai pateikė duomenų, kad fizinis krūvis gali padidinti cirkuliuojančių EPC skaičių ir aktyvumą tiek sveikiems asmenims, tiek pacientams, sergantiems koronarine širdies liga, o tai prisideda prie geresnės endotelio funkcijos ir širdies ir kraujagyslių homoeostazės palaikymo. 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, tačiau mechanizmas, kuriuo grindžiamas sveikų asmenų mankštinimasis dėl cirkuliuojančių EPC, nėra labai aiškus. Kaip aprašyta anksčiau, NO-VEGF ir GM-CSF vaidina svarbų vaidmenį reguliuojant cirkuliuojančių EPC skaičių ir aktyvumą. 20, 21, 22, 23 Todėl mes sukėlėme hipotezę, kad sveikų asmenų mankštinimosi cirkuliuojančių EPC reguliavimas gali būti susijęs su NO-VEGF ir GM-CSF. Norėdami išspręsti šią prielaidą, pirmiausia pastebėjome ūmaus krūvio poveikį cirkuliuojančių EPC skaičiui ir aktyvumui. Mes nustatėme, kad sveikų asmenų kraujyje padidėjo cirkuliuojančių EPC lygis po ūmaus fizinio krūvio, palyginti su prieš mankštą, o tai rodo, kad ūmi mankšta gali žymiai padidinti sveikų asmenų EPC mobilizaciją. Panašiai ir ūmi mankšta skatino kultūrinių EPC proliferacinę ir migracinę veiklą sveikiems asmenims. Šios išvados atitinka ankstesnį tyrimą 19, kuriame teigiama, kad ūmus mankšta gali padidinti sveikų asmenų kraujyje cirkuliuojančių EPC skaičių ir aktyvumą.

Norėdami ištirti galimą NO-VEGF ir GM-CSF vaidmenį atliekant pratimų sukeltus padidėjusius cirkuliuojančius EPC, mes nustatėme NO-VEGF ir GM-CSF lygį plazmoje ir kultūrinėje terpėje prieš ir po mankštos sveikiems asmenims. Po ūmaus fizinio krūvio sveikiems asmenims, palyginti su prieš mankštą, žymiai padidėjo NO gamyba plazmoje, o tai lygiagrečiai cirkuliuojančių EPC padidėjimui reaguojant į ūmią mankštą. Be to, yra reikšmingas tiesinės regresijos ryšys tarp padidėjusio NO lygio plazmoje ir padidėjusio cirkuliuojančių EPC skaičiaus ar aktyvumo, reaguojant į sveikų asmenų ūminį krūvį. Todėl šis tyrimas rodo, kad ūmaus fizinio krūvio sukelta plazmos NO gamyba prisideda prie cirkuliuojančių EPC skaičiaus ir aktyvumo padidėjimo. Tačiau reikšmingų VEGF koncentracijos kraujo plazmoje pokyčių sveikiems asmenims, reaguojant į ūmią mankštą, nepastebėta, panašiai kaip ankstesnėse ataskaitose. 28 Kadangi išemija yra pagrindinis VEGF indukcijos mobilizuojančių cirkuliuojančių EPC veiksnys, 13, 22, rezultatai rodo, kad išemija neatsako už ūmaus fizinio krūvio sukeltą padidėjusį cirkuliuojančių EPC sveikiems asmenims. Panašiai GM-CSF kiekis plazmoje taip pat nepakito po ūmaus fizinių pratimų sveikiems asmenims, palyginti su prieš mankštą, ir tai rodo, kad ūmaus krūvio reguliuojamų EPC mobilizavimas greičiausiai nėra susijęs su padidėjusiu GM-CSF kiekiu plazmoje. Be to, nenustatyta, kad po ūmaus fizinio krūvio padidėtų NO-VEGF ir GM-CSF sekrecija. Tai rodo, kad ūmaus fizinio krūvio sukeltas padidėjęs cirkuliuojantis EPC nepriklauso nuo NO-VEGF ir GM-CSF išsiskyrimo.

Ankstesniuose tyrimuose galima teigti, kad mechanizmai, kuriais grindžiamas ūmios mankštos sukeltas plazmos NO gamyba, prisidedantys prie cirkuliuojančio EPC reguliacijos. Pirmiausia, ūmi mankšta gali sukelti endotelio šlyties stresą, kuris padidina iš endotelio išgaunamo azoto oksido sintazės (eNOS) aktyvumą, nes padidėja tarpląstelinė Ca 2+ koncentracija ir (arba) eNOS fosforilėja, ir stimuliuoja iš eNOS gaunamo NO išsiskyrimą. 29, 30, 31, 32 Antra, eNOS išvestas NO gali skatinti cirkuliuojančių EPC mobilizaciją, proliferaciją ir migraciją, o tai padidina cirkuliuojančių EPC skaičių ir aktyvumą. 7, 20, 21, 33 Buvo pranešta, kad eNOS išmušimo pelių ir laukinio tipo pelių, gydomų NO-sintazės inhibitoriaus L-arginino metilo esteriu, gyvūnų modelyje buvo slopinamas mankštos skatinamas padidėjęs EPC skaičius. 14 Taigi, remiantis dabartinėmis išvadomis ir ankstesniais tyrimais, pagrįstai galima pritarti teiginiui, kad ūmaus fizinio krūvio sukelta padidėjusi NO gamyba plazmoje prisideda prie sveikų asmenų kraujyje cirkuliuojančių EPC reguliavimo.

Apibendrinant, mūsų tyrimas pirmą kartą įrodo, kad ūmaus fizinio krūvio sukelta NO gamyba padidina sveikų asmenų cirkuliuojančių EPC skaičių ir aktyvumą, o tai rodo, kad NO vaidina svarbų vaidmenį reguliuojant ūmią mankštą cirkuliuojančiuose EPC.

Image