Angiotenzinogeno promotorių variantai daro įtaką genų ekspresijai žmogaus inkstuose ir visceraliniame riebaliniame audinyje | žmogaus hipertenzijos žurnalas

Angiotenzinogeno promotorių variantai daro įtaką genų ekspresijai žmogaus inkstuose ir visceraliniame riebaliniame audinyje | žmogaus hipertenzijos žurnalas

Anonim

Anotacija

Žmogaus angiotenzinogeno (AGT) geno promotoriaus polimorfizmai (G – 217A; A – 20C; G – 6A) daro įtaką AGT transkripcijai in vitro ir buvo įtraukti į esminės hipertenzijos genetiką. Mes išanalizavome ryšį tarp AGT promotoriaus variantų ir AGT mRNR lygio žmogaus inkstuose ir visceraliniame riebaliniame audinyje (VAT) in vivo . Inkstų ir PVM mėginiai buvo paimti iš 35 pacientų iš eilės, kuriems buvo atlikta inkstų operacija. Kiekvieno paciento AGT geno promotorius buvo sekvenuotas, kad būtų galima nustatyti variantus. AGT geno ekspresija buvo tiriama realaus laiko PGR TaqMan tyrimu. Klinikiniai duomenys, gauti prieš operaciją, taip pat buvo įtraukti į statistinę analizę. Buvo nustatyti du nauji polimorfizmai –175 ir –163. Nors AGT raiška buvo žymiai didesnė PVM nei inkstuose, kai abu variantai buvo kartu, AGT raiška PVM buvo maždaug penkis kartus mažesnė ( P = 0, 033) nei laukinio haplotipo atveju. Ši žemesnė AGT išraiška PVM rodo, kad −175A ir −163A variantų artumas ir susiejimas gali destabilizuoti specifinių transkripcijos veiksnių jungimąsi su ūmios fazės reaguojančiu elementu 3. Tarp žinomų AGT promotoriaus variantų tik −20C SNP yra svarbus. poveikis specifiniam audinių diferencialiniam AGT ekspresijai tirtuose žmogaus audiniuose, sukeliantis 3, 8 karto padidėjusį AGT mRNR, lokalizuotą tik inksto medulyje ( P = 0, 038). Kiti žinomi polimorfizmai (G − 6A; G − 217A) nebuvo siejami su skirtingais AGT raiškos lygiais. Mūsų rezultatai patvirtina hipotezę, kad kai kurie žmogaus AGT promotoriaus variantai daro įtaką transkripciniam aktyvumui specifiniame žmogaus audinyje.

Įvadas

Renino ir angiotenzino sistema (RAS) vaidina lemiamą vaidmenį natrio apykaitoje ir kraujo spaudimo reguliavime; todėl RAS genai buvo nuodugniai ištirti kaip pagrindinės hipertenzijos kandidatai. Atrodo, kad svarbiausias RAS genas hipertenzijos genetikoje yra angiotenzinogeno (AGT) genas, angiotenzino II (AngII) pirmtakas ir kiti susiję vazoaktyvieji peptidai. 1, 2, 3

Ankstyvieji tyrimai sutelkė dėmesį į polimorfizmų kodavimą, o 235T AGT alelis buvo susijęs su AGT lygiu plazmoje ir hipertenzija. 1, 4 variantai AGT geno promotoriaus regione, pakeisdami specifinių transkripcijos veiksnių surišimą, gali pakeisti transkripcijos aktyvumą. −6A promotoriaus variantas yra susijęs su 235T variantu, kas rodo, kad padidėjęs AGT kiekis plazmoje 235T nešikliuose gali atsirasti dėl padidėjusio transkripcijos aktyvumo. 5 Nepaisant to, G – 6A SNP ryšys su kraujospūdžiu buvo nuginčytas 6 ir taip pat buvo apklaustas neseniai atliktoje metaanalizėje. 7

Atvirkščiai, −20 ir −217 promotorių SNP turi geresnį dokumentais pagrįstą poveikį AGT transkripcijai ir daugelyje tyrimų taip pat buvo siejami su hipertenzija. 8, 9 Iš tiesų, Dicksonas ir kt. 10 rodo, kad in vitro didžiausią įtaką turėjo −20 ir −217 SNP, padidindami AGT transkripciją ląstelių linijose, gautose iš žmogaus kepenų, žmogaus inkstų ir pelių adipocitų. Nepaisant to, konkrečių promotorių variantų reikšmė AGT geno ekspresijai in vivo žmogaus audiniuose, ypač inkstų ir riebaliniuose audiniuose, vis dar nėra aiški.

Pavyzdžiui, riebalinio audinio sintezuotas AGT ne tik padidina vietinę AngII koncentraciją, bet ir išleidžiamas į kraujotaką, sukeldamas sisteminio RAS aktyvumo sutrikimą, taigi prisideda prie padidėjusio kraujospūdžio pacientams, turintiems vidaus organų nutukimą. 11, 12 Pelių, turinčių transgeninį žmogaus AGT geną, modelis padidino AGT ekspresiją tik visceraliniame riebaliniame audinyje (PVM), įskaitant perirenalinį depą, po dietos sukelto nutukimo. 13

Dėl inkstų dėl padidėjusio AGT transkripcijos padidėjimo vietinėje AngII gamyboje gali atsirasti sisteminis poveikis dėl kiekybinės įtakos tubulinio natrio reabsorbcijai. Iš tiesų, intrarenalinė AGT mRNR ir baltymai buvo lokalizuoti daugiausia proksimalinėse kanalėlėse 14, 15, o didelis intratubulinio ir šlapimo AngII kiekis kyla iš vietoje susintetinto AGT. Be to, AngII vaidina svarbų vaidmenį net inksto medulyje, tiesiogiai kontroliuodamas nuo aldosterono priklausomą natrio epitelio kanalą kanalizacijos kanaluose14, kuris yra pagrindinis paskutinis žingsnis kontroliuojant natrį ir kraujospūdį.

Taigi genetinis AGT mRNR padidėjimas gali turėti labai svarbių padarinių net tada, kai jis yra ekspresuojamas tik konkrečiuose audiniuose. Todėl mes ištyrėme ryšį tarp AGT promotoriaus variantų ir AGT ekspresijos žmogaus inksto žievėje, inksto meduloje ir VAT, kad patikrintume, ar AGT promotoriaus variantai gali būti siejami su audiniams būdingu AGT ekspresijos lygiu žmonėms in vivo .

Metodai

Pacientų ir žmogaus audinių mėginiai

Tyrimo protokolą peržiūrėjo ir patvirtino mūsų vietos etikos komitetas, o iš visų pacientų buvo gautas rašytinis informuotas sutikimas. Tyrime dalyvavo 35 pacientai iš eilės, kuriems atlikta radikali nefrektomija dėl lokalios skaidraus ląstelės inkstų ląstelių karcinomos (be jokių lokalių ar metastazavusių vėžio plitimo požymių: T1 / T2, N0, M0) Ankonos universiteto Ospedali Riuniti universiteto ligoninėje, Italijoje. nuo 2006 m. vasario iki 2007 m. vasario mėn. Visi pacientai buvo baltaodžiai kaukaziečiai, kilę iš italų. Klinikiniai duomenys buvo renkami prieš operaciją, o visos moterys ( n = 9) buvo menopauzėje ir neturėjo hormonų pakeitimo. Tai padėjo sumažinti širdies ir kraujagyslių sistemos skirtumus ir padidinti tiriamos populiacijos homogeniškumą. Nei vienas iš jų sunkiai pažeidė inkstus (kreatinino kiekis plazmoje <1, 5 mg / 100 ml vyrams ir <1, 4 mg / 100 ml moterims). Tik vienas pacientas sirgo 2 tipo cukriniu diabetu (gydymas dietine terapija). Geriamieji vaistai buvo nutraukti likus ne mažiau kaip 12 h iki operacijos.

Iš visų pacientų buvo paimti perirenalinio riebalinio audinio, inksto žievės ir inksto medulės (iš nepažeistos pašalinto inksto dalies, ne mažiau kaip 3 cm atstumu nuo lokalizuotos intrakapsulinės karcinomos) mėginiai. Tada audinių mėginiai greitai užšaldomi skystame azote ir laikomi –80 ° C temperatūroje iki RNR ekstrahavimo.

Genotipų nustatymas

Norėdami įvertinti tinkamiausių žinomų žmogaus AGT promotoriaus variantų buvimą, išanalizavome AGT geno seką nuo –306 iki +36 („GenBank“ prisijungimo numeris NM_000029). Iš periferinių kraujo ląstelių DNR buvo išgauta naudojant „NucleoSpin“ kraujo rinkinį (MACHEREY – NAGEL GmbH & Co, Duren, Vokietija), naudojant rinkinio procedūrą.

Iš viso PGR buvo amplifikuota 40 ng genominės DNR (atitinkamai naudojant 5'-GTCACACCTAGGGAGATGCT-3 ′ ir 5′-CCTTCTGCTGTAGTACCCAGAAC-3 ′ kaip pirmyn ir atvirkštinį pradmenis). PGR produktai (342 bp) buvo išgryninti agarozės gelio elektroforeze ir išplauti naudojant QIAquick gelio ekstrahavimo rinkinį (Qiagen, Hilden, Vokietija). Ciklų sekos (96 ° C 10 s, 50 ° C 5 s, 60 ° C 4 min., 25 ciklai) buvo atliktos abiem sruogoms, naudojant DNR sekos rinkinį, „Big Dye Terminator“ ciklo sekvenavimo paruoštos reakcijos rinkinį (pritaikytas Biosistemos, Warrington, JK). Reakcijos buvo išgrynintos „DyeExTM Spin Kit“ („Qiagen“) ir atliktos automatizuotos kapiliarų sekos („ABI PRISM 310“ genetinis analizatorius, „Applied Biosystems“). Sekos buvo analizuojamos elektroferogramose, naudojant Sequencing Analysis 5.2 programinę įrangą (Applied Biosystems).

Genotipo analizė taip pat buvo atlikta 110 sveikų kaukazietiškų sveikų pacientų (vidutinis amžius 32, 3 ± 2, 4 metai), kurie buvo įdarbinti stebint gydytojo Ancona Hearth (AHDS) tyrimą, kurio protokolas buvo aprašytas anksčiau. Šis sveikų asmenų genotipas buvo atliktas siekiant paneigti hipotezę, kad kai kurie variantai gali būti ir (arba) dažnesni, ypač pacientams, sergantiems inkstų vėžiu.

Genų išraiška

Suminė RNR buvo išgauta iš audinių mėginių, homogenizavus guanidino tiocianato buferyje, ir CsCl gradientas modifikuotas, kaip buvo pranešta anksčiau. 17 RNR (1, 5 μg) buvo atvirkščiai perrašyta naudojant didelės talpos cDNR atvirkštinės transkripcijos rinkinius su RNazės inhibitoriumi (Applied Biosystems).

Žmogaus AGT realaus laiko genų ekspresijos analizė buvo atlikta TaqMan genų ekspresijos tyrimu (Hs00258938_m1; Applied Biosystems, Weiterstadt, Vokietija), naudojant ABI 7300 realaus laiko PGR (Applied Biosystems, Darmštatas, Vokietija), naudojant standartinį kreivės metodą. Pradinės suminės RNR skirtumai ir skirtingas cDNR sintezės efektyvumas tarp mėginių buvo normalizuoti naudojant GAPDH ekspresiją kaip namų tvarkymo kontrolinį geną. Kaip papildoma pusiau kiekybinė vidinė kontrolė, taip pat buvo amplifikuota 18S rRNR, kad rezultatai būtų normalizuoti dėl galimų GAPDH raiškos skirtumų. Rezultatai nesiskyrė nei normalizavus GAPDH, nei su 18S rRNR, o tada paveiksluose pateikti duomenys buvo normalizuoti GAPDH. Genų ekspresijos lygiai buvo analizuojami naudojant GENEX („Gene Expression Macro Software“, tiekiama „BioRad“, Hercules, CA, JAV) ir buvo nurodyti kaip savavališki vienetai (AU).

Statistinė analizė

Audinių AGT ekspresijos lygio skirtumai buvo įvertinti naudojant vienpusės dispersijos analizės (ANOVA) testą, po kurio sekė Bonferroni post-hoc t- testas. AGT geno ekspresijos palyginimui tarp AGT genotipų buvo naudojama kovariacijų (amžiaus, lyties, kūno masės indekso (KMI)) koregavimo dispersijos analizė. AGT promotoriaus variantų paplitimas tarp hipertenzinių ir normotenzinių medžiagų buvo įvertintas χ 2 testu. Kai kurie pacientai ( n = 12) buvo gydomi angiotenziną konvertuojančio fermento inhibitoriais (AKF) arba angiotenzino receptorių blokatoriais (ARB), kurie, bent jau teoriškai, gali turėti įtakos AGT ekspresijos lygiui, šių vaistų buvimas ar nebuvimas buvo įvestas kaip kitas kovariatas. Statistinė analizė buvo atlikta naudojant SPSS 13.0 statistinę programinę įrangą (SPSS Inc., Čikaga, IL, JAV), o P <0, 05 lygis buvo laikomas reikšmingu. Hardy – Weinbergo pusiausvyra (HWE) buvo apskaičiuota naudojant χ 2- testą.

Rezultatai

1 lentelėje pateiktos 35 iš eilės tirtų pacientų klinikinės charakteristikos.

Pilno dydžio lentelė

AGT variantų pasiskirstymas tarp mūsų pacientų pateiktas 2 lentelėje.

Pilno dydžio lentelė

Sekos analizė parodė, kad yra du nauji G → A SNP, esantys –175 ir –163 (1a ir b paveikslai). Taip pat išanalizavome 110 sveikų kaukaziečių (vidutinis amžius 32, 3 ± 2, 4 metų), nes apie šiuos SNP nebuvo pranešta anksčiau, taip pat tam, kad būtų galima atmesti dviejų naujų SNP buvimą tik pacientams, sergantiems inkstų karcinoma. Šiai sveikai populiacijai buvo nustatytas 7, 3% dažnis −163A heterozigotams ir 10, 9% −175A heterozigotams. Abiejų variantų atžvilgiu buvo laikomasi HWE (–175, P = 0, 55; –163, P = 0, 69).

Image

( a ) Proksimalinio žmogaus AGT geno promotoriaus nukleotidų seka (340 bp). Pabrėžimas rodo transkripcijos veiksnių rišimo vietas; Žvaigždutės žymi SNP. ( b ) AGT promotoriaus sekų, esančių heterozigotinėse sekose, elektroferograma esant –175 ir –163.

Visas dydis

Palyginus AGT geno išraiškos lygius žmogaus inkstų žievėje, inkstų medulėje ir PVM rodo, kad PVM yra svarbus AGT šaltinis. AGT išraiška buvo žymiai didesnė (maždaug penkis kartus) PVM nei inkstų žievėje ir medulyje (atitinkamai P = 0, 006 ir P = 0, 003), tuo tarpu žievė ir medulla išreiškė panašų AGT lygį (2 paveikslas).

Image

Lyginamoji AGT geno išraiška žmogaus inkstų žievėje (K-Cortex), inksto medulėje (K-Medulla) ir visceraliniame (perireniniame) riebaliniame audinyje (PVM) ( n = 35 mėginiai suporuoti). Duomenys pateikiami kaip vidutiniai 95% pasikliovimo intervalai. ** P <0, 001 PVM palyginus su K-Cortex ir PVM prieš K-Medulla.

Visas dydis

Tiriamiesiems, kuriems žinomas −20C variantas, AGT ekspresija buvo 3, 8 karto didesnė tik lokaliai inksto medulėje ( P = 0, 038), palyginti su –20A homozigotomis (3a pav.). Nebuvo nustatytas reikšmingas AGT mRNR lygis inkstų žievėje ir riebaliniame audinyje (3a pav.).

Image

AGT promotoriaus variantų įtaka AGT ekspresijos lygiams inkstų žievėje (K-Cortex), meduloje (K-Medulla) ir visceraliniame riebaliniame audinyje (VAT). ( a ) Pacientams, kuriems buvo −20C variantas, AGT išraiška buvo 3, 8 karto didesnė tik K-Medulla ( P = 0, 038). ( b, c ) Ne reikšmingas −6 ir −217 variantų poveikis AGT ekspresijai žmogaus inkstų ir riebaliniame audinyje. Duomenys pateikiami kaip vidurkiai ± se * P <0, 05.

Visas dydis

Kiti žinomi SNP (−6AG; −217GA) nebuvo siejami su reikšmingai skirtinga AGT ekspresija tiriamuose audiniuose (3b ir c pav.).

Kai nauji −175A ir −163A variantai buvo kartu su bendru haplotipu ( n = 16), jie buvo susieti su AGT išraiška PVM, kuri buvo maždaug penkis kartus mažesnė nei nustatyta laukinių haplotipų turinčių pacientų PVM ( P) = 0, 033; 4a pav.). Atliekant analizę atskirai kiekvienam naujam variantui, priešingai, reikšmingų AGT išraiškos pokyčių inkstuose ir riebaluose reikšmingų pokyčių nerasta (4b ir c pav.), Nors mažesnė AGT išraiška PVM rasta −175A arba −163A SNP. vežėjai.

Image

AGT promotoriaus variantų įtaka AGT ekspresijos lygiams inkstų žievėje (K-Cortex), meduloje (K-Medulla) ir visceraliniame riebaliniame audinyje (VAT). a ) Padidėjusi AGT išraiška (apie penkis kartus) tik PVM pacientams, kuriems nustatytas −163A / −175A haplotipas ( P = 0, 033). ( b, c ) Ne reikšmingas −163 ir −175 variantų poveikis AGT ekspresijai žmogaus inkstų ir riebaliniame audinyje. Duomenys pateikiami kaip vidurkiai ± se * P <0, 05.

Visas dydis

Antihipertenzinis gydymas AKF / ARB neturėjo reikšmingos įtakos AGT ekspresijai jokiame audinyje, palyginti su pacientais, kurie nevartoja vaistų (3 lentelė).

Pilno dydžio lentelė

Tarp hipertenzinių ir normotenzinių pacientų alelių ir genotipų pasiskirstymas reikšmingų skirtumų nenustatė, nors atrodė, kad –20C variantas padidina hipertenzija sergančių pacientų paplitimą ( P = 0, 071, 3 lentelė). Dėl žinomo didelio BP kintamumo, reikšmingų asociacijų trūkumą tikriausiai lemia palyginti mažas kiekvieno genotipo pacientų skaičius.

Diskusija

Šiame tyrime mes įvertinome žinomų ir naujų AGT promotoriaus variantų ryšį su AGT ekspresija žmogaus inkstuose ir riebaliniame audinyje, kurie yra nepaprastai svarbūs kaip sisteminis AGT šaltinis ir (arba) atsižvelgiant į vietinį AGT kilmės AngII poveikį. Mūsų rezultatai patvirtina hipotezę, kad žmogaus AGT promotoriaus variantai daro įtaką transkripcijos aktyvumui in vivo , tikriausiai pakeisdami transkripcijos veiksnių surišimą. Be to, tirtų SNP poveikis yra specifinis audiniams ir palaiko ląstelių tipui būdingą skirtingų promotorių variantų transkripcijos poveikį. Iš tikrųjų −20C variantas yra susijęs su daugiau nei tris kartus didesne AGT išraiška nei −20A variantas inksto meduloje, bet ne inksto žievėje ar VAT. Šis rezultatas sutinka su ankstesniu tyrimu, kuris parodė padidėjusį promotoriaus aktyvumą, kai konstrukte, kuris naudojamas promotoriaus polimorfizmų poveikiui žmogaus inksto ląstelių linijoje patikrinti, −20C varianto buvo. Padidėjusi AGT geno ekspresija žmogaus inkstų medulėse gali sukelti didesnį vietinį AGT ir AngII, todėl veikdama tiesiogiai net distalinius kanalėlius 15 padidina natrio reabsorbciją ir kraujospūdį. Gerai žinoma, kad vietoje gaminamas AngII specifiniuose inkstų skyriuose turi didelę reguliavimo įtaką inkstų hemodinamikai ir natrio reabsorbcijai. 19, 20 Naujausi tyrimai, apibūdinantys didesnę AngII koncentraciją konkrečiuose inkstų regionuose, rodo, kad egzistuoja selektyvus vietinis intrarenalinio AngII reguliavimas nepriklausomai nuo cirkuliuojančios AngII koncentracijos. 18

Mes taip pat nustatėme du naujus AGT promotoriaus variantus (−175A ir −163A), kurie, atrodytų, selektyviai sumažina AGT išraišką žmogaus PVM. Šie variantai nebuvo aprašyti išsamiame Nakajima ir kt. Darbuose . Galbūt dėl ​​to, kad jie sekvenavo visą afrikiečių, euraziečių ir rytų azijiečių, bet ne kaukaziečių AGT geną. Originaliame Jeunemaitre et al. , AGT promotoriaus variantui identifikuoti panaudojant vienos grandinės konformacinio polimorfizmo (SSCP) testą, AGT promotorius, apimantis –175 ir –163 regionus, nebuvo analizuotas dėl iš eilės einančių pradmenų, kurie sutapo šiame regione, projekto. 22 Šių dviejų naujų SNP artumas ir sąsajos leidžia manyti, kad jie veikiausiai destabilizuoja specifinių branduolinių veiksnių surišimą. Įdomu tai, kad −175 ir −163 variantai atitinka žinomą transkripcijos faktoriaus surišimo vietą (lokalizuotą nuo –173 iki –164), klasifikuojamą kaip ūmaus fazės reagavimo elementas (APRE). Shermanas ir Brasier 23 parodė, kad IL-6 padidina žmogaus AGT geno ekspresiją kepenų ląstelėse per transkripcijos veiksnių šeimos signalo keitiklį ir transkripcijos aktyvatorių (STAT) šeimą ir nustatė tris galimas STAT-3 surišimo vietas (hAPRE1 (278 - 269), hAPRE2 (246–237) ir hAPRE3 (171–162)), pagrįstą sekos homologija su STAT konsensuso surišimo vieta žmogaus AGT geno promotoriuje. Jain ir kt. 24 įrodė, kad regionas, kuriame yra APRE-3 vieta, yra aktyvuojamas apdorojant IL-6, ir pasiūlė, kad APRE-3 gali būti svarbus skatintojas. Taip pat svarbu pažymėti, kad APRE-3 vieta yra išsaugota tarp žiurkių ir žmogaus AGT genų, o tai rodo svarbų šios vietos vaidmenį transkripcijos reguliavime evoliucijos metu. Žemo laipsnio sisteminis uždegimas, kuris greičiausiai pasireiškė pacientams, sergantiems inkstų intrakapsuliniu vėžiu, galėjo sustiprinti AGT transkripciją, nes AGT yra ūminės fazės atsako baltymas. Šis faktorius tikriausiai padėjo rasti tokį didelį AGT išraiškos skirtumą esant –175A ir –163A variantams.

Mūsų tyrime kiti gerai žinomi promotoriaus variantai nebuvo susieti su inkstų ar VAT AGT mRNR lygiais in vivo . In vitro tyrimai parodė, kad ne tik −20, bet ir –217 SNP turi didelę įtaką AGT transkripcijai riebalinių ląstelių linijoje (3T3-L1). Nepaisant to, norint patvirtinti ir ankstesnius atradimus, ir galimą naujųjų žmogaus variantų, kuriuos nustatėme, vaidmenį, reikalingi transfekcijos tyrimai, naudojant žmogaus adipocitus. Nesusiejimas tarp G – 6A varianto ir kraujospūdžio ar širdies ir kraujagyslių fenotipo, apie kuriuos pranešėme anksčiau 6, dabar yra naujas galimas paaiškinimas remiantis šio darbo išvadomis. Be to, naujausia 26 818 pacientų metaanalizė patvirtino, kad nėra ryšio tarp G-6A varianto ir hipertenzijos. Nepaisant to, mes negalime atmesti galimybės, kad tiek −217, tiek –6 SNP gali turėti transkripcinį poveikį AGT ekspresijai kitose ląstelių rūšyse, tokiose kaip kepenų ląstelės ar neuronai.

Apibendrinant, mūsų rezultatai pirmą kartą labai patvirtina hipotezę, kad kai kurie žmogaus AGT promotoriaus variantai gali turėti polinkį į hipertenziją arba nuo jos apsaugoti, nes aiškiai ir audiniams būdingas AGT raiškos lygio pasikeitimas inkstuose ir riebaliniame audinyje. Be to, tiek AGT, tiek Ang II yra padidėjęs centrinis nutukimas. Įrodymai, kad adipocitai gali gaminti didelius AGT kiekius, patvirtino sampratą, kad padidėjęs adipozitas gali reikšmingai prisidėti prie netinkamai normalaus ar net padidėjusio plazmos renino aktyvumo. Pats 25, 26 Ang II per 1 tipo receptorius (AT1) buvo pasiūlytas kaip trofinis riebalinio audinio augimo ir vystymosi faktorius; Iš tiesų, Ang II stimuliuoja lipogenezę 28 ir pre-adipocitų diferenciaciją. 29

Reikėtų atsižvelgti į kai kuriuos šio tyrimo apribojimus. Pirma, nors šis tyrimas buvo sutelktas tik į ryšius tarp skirtingų AGT promotorių variantų (įskaitant naujus) ir AGT mRNR lygį skirtingose ​​žmogaus inkstų ir riebalinio audinio dalyse, kiekybinis AGT baltymo lygio šiuose audiniuose įvertinimas galėjo pagerinti rezultatus. Vakarų šalių duomenų trūkumas yra apribojimas. Nepaisant to, nors padidėjusi AGT mRNR nėra akivaizdžiai tokia pati kaip padidėjusi AGT baltymo ir AngII gamyba, paskelbti įrodymai rodo, kad AGT baltymo ir AngII gamyba yra vieninga audinių mRNR lygiui tiek inkstuose, tiek riebaliniame audinyje. 12, 13, 14 Antra, nauji variantai buvo retesni bendroje populiacijoje nei mūsų pacientuose, greičiausiai dėl atsitiktinumo, atsižvelgiant į santykinai nedidelį inkstų vėžiu sergančių pacientų, kuriuos galėjome įdarbinti, skaičių. Trečia, šie nauji variantai turėtų būti išbandyti tinkamoje žmogaus ląstelių sistemoje, kad būtų galima ištirti AGT transkripcijos greitį, taip pat siekiant atmesti galimybę, kad kiti susiję variantai buvo atsakingi už poveikį.

Apibendrinant galima pasakyti, kad AGT genas gausiai išreiškiamas žmogaus PVM ir, žemesniame lygyje, žmogaus inkstuose. Mūsų rezultatai rodo, kad kai kurie AGT promotoriaus variantai gali įtakoti AGT transkripcijos aktyvumą in vivo . Dėl –20C varianto gali padidėti natrio reabsorbcija, tuo tarpu nutukę pacientai, kuriems yra –175A ir –163A variantai, gali būti apsaugoti nuo padidėjusio riebalinių liaukų AGT padidėjimo, tai paaiškina, kodėl ne visiems nutukusiems pacientams padidėja kraujospūdis. Taip pat įmanoma, kad genetinė (nuo –175A ir nuo –163A priklausoma) „apsauga“ nuo per didelio riebalinio audinio AGT gali padėti išvengti su nutukimu susijusios hipertenzijos. Norint įvertinti naujų AGT SNP dažnį įvairiose populiacijose ir jų ryšį su kraujospūdžiu, taip pat postuliuotas nuo AngII priklausomas ir adipocitų sukeliamas metabolines antsvorio komplikacijas, reikalingi papildomi tyrimai.

Image

Interesų konfliktas

Autoriai teigia, kad interesų konflikto nėra.

Prisijungimai

„GenBank“ / EMBL / DDBJ

  • NM_000029