Biogeografija ir kolodarijų (radiolarijų) įvairovė pasauliniame vandenyne | nežinomas žurnalas

Biogeografija ir kolodarijų (radiolarijų) įvairovė pasauliniame vandenyne | nežinomas žurnalas

Anonim

Dalykai

  • Biologinė įvairovė
  • Mikrobų biookeanografija

Anotacija

Kolodarijos yra heterotrofiniai jūriniai protistai, egzistuojantys kaip didelės kolonijos, sudarytos iš šimtų ląstelių, arba kaip didelės vienetinės ląstelės. Visos aprašytos rūšys iki šiol turi tarpląstelinius mikrodumblius kaip fotoimbiontus. Nors naujausi aplinkos įvairovės tyrimai, pagrįsti molekuliniais metodais, parodė, kad jų indėlis į planktonines bendrijas ir jų paplitimas yra visame pasaulyje, vis dar suprantame jų įvairovę ir biogeografiją. Čia mes įvertinome 18S ribosomų DNR (rDNR) geno kopijas vienoje kolodaro ląstelėje atskirai (5770 ± 1960 mažo subvieneto (SSU) rDNR kopijos) ir kolonijinius mėginius (37 474 ± ​​17 799 SSU rDNR kopijos kiekvienai atskirai ląstelei kolonijoje). naudojant vieno pavyzdžio kiekybinę PGR. Tuomet ištyrėme Tara vandenyno ekspedicijos metabolizmo kodeksavimo metodu atliktą Collodaria aplinkos įvairovę fototinėje zonoje ir nustatėme, kad dvi kolodarų šeimos Collosphaeridae ir Sphaerozoidae labiausiai prisidėjo prie kolodarinės įvairovės ir apėmė daugiausia kosmopolitinius taksonus. Nors biogeografiniai modeliai kiekviename nagrinėjamame biogeocheminiame biome buvo homogeniški, mes pastebėjome, kad pakrančių biomai buvo mažiau skirtingi nei vandenynų biomai ir dominavo Sphaerozoidae, o atviruose vandenynuose dominavo Collosphaeridae. Ryškūs ryšiai su šešiais aplinkos kintamaisiais rodo, kad kolodarų įvairovei įtakos turi vandenyno provincijų trofinė būklė ir ji padidėja link oligotrofinių regionų.

Įvadas

Radioalandai yra skeleto pavidalo jūriniai heterotrofiniai protistai, priklausantys eukariotų prieglobsčio Retarijai, kuri yra įtraukta į supergrupę „Rhizaria“ (Nikolajevas ir kt., 2004; Adl ir kt., 2005; Moreira ir kt., 2007). Radiolarija apima> 700 egzistuojančių rūšių, suskirstytų į penkias nusistovėjusias tvarkas, tarp kurių Acantharijoje yra skeletas, pagamintas iš stroncio sulfato, o Taksopodijoje, Collodaria, Nassellaria ir Spumellaria - skeletas, pagamintas iš opalino silicio dioksido (Suzuki ir Not, 2015). Kadangi šiuo metu neįmanoma jų išlaikyti gyvų kultūroje, dauguma mūsų žinių apie radiolarius yra kilę iš paleontologinių tyrimų (Wever ir kt., 2002), o mažiau žinoma apie jų faktinę įvairovę ir ekologiją šiuolaikiniuose vandenynuose (Suzuki ir Not, 2015; Caronas, 2016).

Tarp radiologų Collodaria yra mažai ištirta grupė tiek paleontologinių, tiek biologinių tyrimų srityje. Kiekvieną kolodarinę koloniją sudaro šimtai tūkstančių kolodarinių ląstelių, įterptų į želatininę matricą, o pavienius egzempliorius sudaro viena ląstelė. Kolodaro kolonijų dydis svyruoja nuo kelių mikrometrų iki didžiausio užregistruoto trijų metrų dydžio (kolonijiniam egzemplioriui; Swanberg ir Harbison, 1979). Kai kurioms kolodarinėms rūšims yra silikatuotos struktūros (arba kaip adatos pavidalo spiralės, arba griaučiai), o kitoms paprastai nėra mineralinių struktūrų (plika kolodarija; Biard ir kt., 2015). Nors mūsų žinios apie jų gyvenimo ciklą vis dar yra ribotos, keletą kartų buvo pranešta apie mažų (2–10 μm) flagellate ląstelių (reprodukcinių spiečių) išsiskyrimą (Anderson, 1983). Taip pat labai mažai žinoma apie „Collodaria“ šėrimo elgseną, o visose iki šiol praneštose rūšyse yra daugybė simbiotinių mikrodumblių (fotoimbiontų), dažniausiai identifikuojamų kaip dinoflagellate Brandtodinium nutricula (Hollande and Enjumet, 1953; Probert et al., 2014). . Skirtingų kolodarinių rūšių taksonominis apibrėžimas yra sudėtingas dėl riboto morfologinių kriterijų skaičiaus (Brandt, 1885; Haeckel, 1887). Tačiau neseniai integruotas morfomolekulinis požiūris leido geriau suprasti Collodaria įvairovę ir aiškiai išskyrė 3 monofiletines šeimas (Collosphaeridae, Collophidiidae ir Sphaerozoidae) iš Collodaria ir 20 klodų, jungiančių vienišas ir kolonijines rūšis (Biard et al., 2015).

Kol kas tik keliuose tyrimuose aprašytas geografinis kolodarinių taksonų pasiskirstymas visame pasaulio vandenyne ir pranešta, kad Kolodarija visame pasaulyje yra pasiskirsčiusi daugybėje jūrų aplinkos (Pavshtiks ir Pan'kova, 1966; Strelkov ir Reshetnyak, 1971; Swanberg, 1979). Pageidautina, kad jie gyventų artimame oligotrofinių vandenų paviršiuje, kur jų gali būti gausu, nuo 30 iki išskirtinai 20 000 kolonijų, kurių m – 3 yra (Khmeleva, 1967; Caron ir Swanberg, 1990; Dennett ir kt., 2002). Neseniai atlikti kolodarų gausos in situ vertinimai parodė, kad Collodaria buvo pagrindinė rizikingo biomasės dalis ir sudaro didelę viso pasaulio anglies atsargų dalį viršutiniuose 100 m vandenynų (Biard et al., 2016). Nors naujausi tyrimai atskleidė „Collodaria“ svarbą jūrų ekosistemose (Biard ir kt., 2016; Guidi ir kt., 2016), mūsų supratimas apie kolodarų biologinę įvairovę, jos mastą ir pasiskirstymą vis dar yra labai ribotas.

Per pastarąjį dešimtmetį aplinkos molekulinės įvairovės tyrimai, pagrįsti 18S ribosominės RNR (rRNR) genu, reguliariai išryškino didelę įvairovę ir santykinai svarbų radioaktyviųjų gyventojų indėlį į planktonines bendrijas jūrų ekosistemose (Countway et al., 2007; Not et al.). 2007; Edgcomb ir kt., 2011), o ypač - „Collodaria“ - nuo fotologinių sluoksnių iki vandenynų bathypelagic regionų (de Vargas ir kt., 2015; Pernice ir kt., 2015). Panašūs molekuliniai metodai, taikomi atliekant nuosėdų gaudyklių surinktų protistų bendruomenių analizę, taip pat išryškino svarbų „Collodaria“ indėlį dalelių eksporte į gilųjį vandenyną (Amacher et al., 2009; Fontanez et al., 2015). Vis dėlto šiems tyrimams paprastai trūko taksonominės skiriamosios galios, nes nebuvo galima patikimos 18S rDNR duomenų bazės, pagal kurią būtų galima išsamiai priskirti Kolodariją, ir nebuvo atsižvelgiama į kolodarinio rDNR kopijos skaičiaus kiekvienoje ląstelėje, kuris yra kintamasis tarp jūrų protistų, dydį. et al., 2005; Godhe ir kt., 2008).

Šiame tyrime mes ištyrėme pasaulinę Collodaria biogeografiją įvairiose jūrų ekosistemose, iš kurių buvo imtasi ekspedicijos Tara vandenynuose (Pesant et al., 2015). Mes taip pat ištyrėme ryšius tarp kolodarinės įvairovės pasiskirstymo įvairiose biogeocheminėse biomose ir 15 aplinkos kintamųjų rinkinio.

medžiagos ir metodai

Realaus laiko kiekybinė PGR (qPCR) analizė - vieno bandinio kolodarietis

Kolonijiniai ir vieniši kolodariniai egzemplioriai buvo surinkti Villefranche-sur-Mer įlankoje (Prancūzija, 43 ° 41′10 ″ šiaurės platumos, 7 ° 18′50 ″ rytų ilgio), naudojant „Regent Net“ (akies dydis 680 μm) arba rankinį tinklą. (Papildomas S1 paveikslas) paviršiniams ir vertikaliesiems (0–75 m) tinklo vilkikams. Kiekvienas mėginys buvo išskirtas mikropipete, išvalytas į 0, 2 μm filtruotą jūros vandenį ir pavaizduotas žiūroniniu mikroskopu. Kiekvieno mėginio DNR buvo išgauta naudojant „MasterPure Complete DNA Purification Kit“ (Epicenter, Le Perray, Prancūzija) pagal gamintojo instrukcijas. 18S rRNR genas buvo amplifikuotas ir sekvenuotas naudojant pradmenų S32col / V9R rinkinį, kaip aprašyta anksčiau (Biard et al., 2015). Visos sekos buvo patalpintos „GenBank“ duomenų bazėje registracijos numeriais KY263810, KY263812 – KY263827. Remiantis morfologine ir molekuline tapatybe, remiantis naujausia Collodaria klasifikacija (Biard ir kt., 2015), buvo nustatytos dvi kolonijinės rūšys: Sphaerozoum fuscum ir Collozoum pelagicum bei viena vieniša rūšis Procyttarium primordialis .

Norėdami išvengti grobio ar mikrodumblių fotoimbiontų užteršimo eukariotu, mes sukūrėme du kolodarui būdingus pradmenis - Col-961-1 F (5′-CARCTAGGGTTTTGGCAAAT-3 ′) ir Col-1075 R (5′-CACATCTTGTGGTGCCCTT-3 ′). Gruntai buvo suprojektuoti ir optimizuoti naudojant 38 Sphaerozoidae 18S rDNR sekų atskaitos taškus ir naudojant PrimaClade (Gadberry ir kt., 2005) bei OligoAnalyzer 3.1 programinę įrangą (Integrated DNA Technologies, Leuven, Belgija). Naujai suprojektuotų pradmenų specifiškumas buvo įvertintas PGR metodu, naudojant genominę DNR iš Acantharia, Nassellaria, Spumellaria ir kolodaro fotosimbionto Brandtodinium nutricula . PGR buvo atlikta, kaip aprašyta anksčiau (Biard ir kt., 2015).

Mes panaudojome „Col-961-1 F / Col-1075 R“ pradmenis, nustatytus PGR, kad amplifikuotume Collozoum inerme (registracijos Nr. KR058247) 114 bp fragmentą, kad būtų naudojamas kaip standartas qPCR tyrimams. Amplikonas buvo klonuotas į Escherichia coli . Plazmidės DNR buvo ekstrahuota naudojant „NucleoSpin Plasmid (NoLid)“ rinkinį (Macherey-Nagel, Hœrdt, Prancūzija), o naujai sukonstruotos plazmidės buvo linearizuotos naudojant NotI fermentą. Linearizuotos plazmidės buvo ištirtos elektroforezės būdu 1% agarozės gelyje ir išmatuota koncentracija naudojant „Qubit“ fluorometrą („Fischer Scientific“, Illkirchas, Prancūzija). Standartų egzempliorių skaičius buvo apskaičiuotas taip, kaip aprašyta anksčiau (Zhu et al., 2005). Standartinėms kreivėms gauti buvo naudojami nuoseklūs 10 kartų praskiedimai (10 −1 –10 −6 ).

Visos reakcijos buvo atliktos techninėmis kopijomis su „LightCycler 480 Real-Time PCR System“ (Roche, Boulogne-Billancourt, Prancūzija), naudojant „LightCycler 480 SYBR Green I Master Kit“ (Roche). Reakcijos buvo atliktos denatūravus 5 minutes 95 ° C temperatūroje, po to atlikus 45 denatūravimo ciklus 95 ° C temperatūroje 10 s, atkaitinant 60 ° C temperatūroje 15 s ir prailginant 72 ° C temperatūroje 15 s. Duomenys buvo nuskaityti pratęsimo metu. Kiekvieno bandymo pabaigoje buvo pridėta lydymosi kreivės analizė, siekiant užtikrinti specifinį amplifikavimą.

Metakodavimo pavyzdžių gavimas ir apdorojimas

Collodaria aplinkos įvairovė buvo ištirta 653 mėginiuose (įskaitant 4 dydžio frakcijas, 0, 8–5, 5–20, 20–180 ir 180–2 000 μm), surinktus paviršiaus ir chlorofilo maksimumo (DCM) gylyje esant 113 mėginių ėmimo stotys Tara vandenyno ekspedicijos metu (papildomas paveikslas S2; Pesant ir kt., 2015). Išsamūs šiame tyrime naudojamų pavyzdžių aprašymai ir jų aplinkos kontekstas skelbiami atviroje prieigoje PANGEA (Biard ir kt., 2017). Iš V9-18S rDNR metabolitų (iš Tara vandenynų ekspedicijos (2009–2012 m.; Paskelbti atviroje prieigoje PANGEA (de Vargas ir kt., 2017a, b) ir Europos branduolinių medžiagų archyve, kurio prisijungimo prie projekto numeris PRJEB6610)) buvo išgauti kiekvienas mėginys ir apdorotas anksčiau aprašytu bioinformatikos vamzdynu (de Vargas ir kt., 2015). Trumpai tariant, dujotiekį sudarė: (1) kokybės tikrinimas, (2) filtravimas (metabolinių kodų, esančių <2 mėginiuose ir su <3 rodmenimis) pašalinta) ir (3) suskirstymas į veikiančius taksonominius vienetus (OTU) naudojant „Swarm“ programinę įrangą (Mahé et al., 2014). Šiai analizei mes apsvarstėme tik tuos OTU, kurių sekos yra two1 000 mažiausiai dviejuose skirtinguose mėginiuose. Dėl šios ribos buvo pašalinta 3% visų į pradinius duomenų rinkinius įtrauktų sekų, o 99% unikalių kolodarinių OTU buvo pašalinta. Iš to OTU buvo paskirta, palyginti su Protist Ribosomal Reference (PR2) duomenų baze (Guillou et. al., 2013), modifikuotas įtraukiant o f naujos kolodarinės pamatinės sekos (Biard ir kt., 2015). OTU, turinčioms ginčytiną priskyrimą (pvz., Kelios atitiktys su skirtinga atskaitos seka arba mažu atitikimo balu), buvo klasifikuojamos kaip neapibrėžtos. Galutinai pašalinome mėginių ėmimo stotis, kuriose yra <2 mėginių, kad būtų homogenizuotas galutinis duomenų rinkinys.

Norėdami nustatyti tinkamiausią tapatybės slenkstį, kad galėtumėte išanalizuoti kolodaro biologinę įvairovę, apskaičiavome viso ilgio 18S rRNR geno ir jo hipervariacinių V4 ir V9 sričių (papildomas S3 pav.) Tapatumo reikšmes poromis , naudodamos sekadencialumo funkciją, įdiegtą bio3d pakete („Grant“). et al., 2006). Šiai analizei naudotas etaloninis derinimas sudarė 81 kolodarinės 18S rDNR sekas, kurias galima rasti „GenBank“ duomenų bazėje, atspindinčias išsamiausius iki šiol sudarytus kolodarinius duomenis. Taigi šiame tyrime mes apsvarstėme tik kolodarinius OTU, kurių tapatumas atskaitos seka yra apie 80%.

Duomenų analizė

Visos žemiau aprašytos duomenų analizės ir statistiniai duomenys buvo atlikti naudojant R 3.2.0. („R Core Team“, 2015) ir „ggplot2“ (Wickham, 2009), „Hmisc 3.16-0“ („Harrell“, 2015) ir veganiškų „2.3-0“ (Oksanen ir kt., 2015) paketai, taip pat pritaikyti scenarijai. Kiekvienoje mėginių ėmimo stotyje mes neradome reikšmingų OTU sudėties skirtumų tarp keturių skirtingų dydžių frakcijų ir dviejų gylių, todėl sujungėme visas sekas iš skirtingų mėginių, surinktų toje pačioje mėginių ėmimo stotyje, kad atliktume statistinę OTU sudėties ir turtingumo analizę.

Norėdami ištirti jų ryšį su kolodaro biologine įvairove, sukūrėme aplinkos duomenų rinkinį, sudarytą iš 15 aplinkos kintamųjų, kuriuos galima rasti internetu PANGEA (Biard ir kt., 2017) ir užfiksuoti paviršiuje bei DCM. Kiekvienoje mėginių ėmimo vietoje apskaičiavome vidutinę aplinkos kintamųjų, užregistruotų tarp paviršinio vandens ir DCM, vertę. Kolodarų įvairovė (čia išreikšta OTU turtingumu), kaip ir kiti aplinkos kintamieji, buvo normalizuota log-transformacija ir apskaičiavome Pearsono koreliacijos koeficientą tarp kintamųjų porų. Dėl padidėjusios I tipo klaidos rizikos, kai vienu metu atliekami keli reikšmingumo testai (Legendre ir Legendre, 2012), koreliacijos koeficientų reikšmingumui patikrinti panaudojome nuoseklųjį Bonferroni koregavimą (Rice, 1989).

Rezultatai

18S rRNR genų kopijų skaičiaus nustatymas kolonijinėse ir vienišose Kolodarijose

Mes išmatuojome 18S rRNR geno kopijų skaičių iš dviejų kolonijinių ir vienos vienišos kolodarinių rūšių (1 lentelė). Apskritai, normalizavus kolonijoje rastų ląstelių skaičių (tai yra apskaičiuota pagal koloniją sudarančių centrinių kapsulių skaičių), kolonijinių bandinių kopijų buvo apie septynis kartus daugiau nei pavienių egzempliorių, 37 474 ± ​​17 799 (vidurkis ± sem). ir atitinkamai 5770 ± 1960 m. Sphaerozoum punctatum (26 189 ± 4849) rDNR kopijų skaičius tarp dviejų skirtingų kolonijinių rūšių buvo mažesnis nei C. pelagicum (45 534 ± 6767). Tada mes palyginome kolodarinio 18S rRNR geno kopijų skaičiavimus su ankstesniais plataus spektro jūrinių protistų skaičiavimais, gautais iš literatūros (papildoma S1 lentelė). RDNR kopijų skaičius reikšmingai koreliavo su ląstelės ilgiu (F = 163, R2 adj = 0, 69, P <0, 001; 1 paveikslas). Nors visi kolonijiniai egzemplioriai atitiko bendrą modelį, pavienių egzempliorių ( P. primordialis ) rDNR kopijų skaičius yra palyginti mažas, palyginti su jų dideliu ląstelių dydžiu.

Pilno dydžio lentelė

Image

Koreliacija tarp rDNR kopijos skaičiaus vienoje ląstelėje, įvertinto kiekybine PGR, ir ląstelės ilgio tarp eukariotinių jūrų protistų, įskaitant tris skirtingas kolodarines rūšis (užpildytus apskritimus). Išsamūs matavimai pateikti papildomoje S1 lentelėje.

Visas dydis

Kolodarijos biogeografija pasauliniame vandenyne

Išfiltravus, iš viso 147 078 627 kokybės patikrintų V9 rDNR genų sekų buvo priskirtos Rhizaria ir toliau sugrupuotos 517 OTU. Iš šių sekų Collodaria iš viso sudarė 133 301 730 sekas ir 230 OTU. Remdamiesi santykiniu sekų gausumu, mes apskaičiavome, kad „Collodaria“ vidutiniškai sudarė 82% visų rhizarinių sekų ir mažiausiai 64% rhizarų OTU, atsižvelgiant į tai, kad šiame tyrime taikėme griežtą ribą, neįtraukdami retų OTU (2 pav.). Collodaria buvo dominuojanti giminystė Rhizarijoje visuose biomuose, išskyrus Antarktidos biomą, kur trijose mėginių ėmimo vietose visiškai nebuvo Collodaria. Apskritai, kolodarinio indėlio į rizizės seką variacijos labai gerai atitiko jų indėlį į rizarinių OTU, išskyrus keletą mėginių ėmimo stočių (pvz., 43 stotis Indijos vandenyne), kur kolodaro indėlis į rhizarinių OTU buvo mažesnis nei jų indėlis į rizariją. sekos.

Image

„Collodaria“ indėlis į „Rhizaria“ liniją per Tara vandenyno ekspedicijos mėginių ėmimo stotis. Viršutinė plokštė: Collodaria indėlis į bendrą Rhizaria sekų skaičių. Apatinė plokštė: „Collodaria“ indėlis į bendrą Rhizaria OTU skaičių. Raudonos linijos rodo vidutinį kiekvieno duomenų rinkinio įnašą. Įnašai yra geografiškai suskirstyti pagal Longhurst's Biogeochemical Biomes pagal (Longhurst, 2010). Spalvotą šio paveikslėlio versiją galite rasti ISME žurnale internete.

Visas dydis

Kolodarinio OTU sodrumo platumos variacijos atskleidė kupros formos ryšį, kurio centras yra tarp 10 ir 30 ° pietų platumos, ir parodo didesnę įvairovę žemose platumose (3a paveikslas). Be to, kolodarinis turtingumas labai skyrėsi tarp skirtingų biogeocheminių biomų ir tarp jų, pasiekdamas aukščiausią vidutinę vertę (40 OTU) Atlanto prekybos vėjo biome (šeštadienis; 3b paveikslas). Viduržemio jūra (Med) buvo mažiausiai įvairi biomas, vidutinis sodrumas - 12 OTU. Apskritai pakrančių biomai (tai yra, Med – Ico – Pco – Aco) turėjo žymiai mažesnį OTU turtingumą (vidurkis = 17, 26, sd = 13, 28), palyginti su atvirų vandenynų biomomis (tai yra, Ind – Pac – Nat – Sat – Skruzdėlynas) (vidurkis = 30, 29, sd = 15, 05), t (93) = 4, 48, P <0, 001. Kiekviename iš trijų vandenynų baseinų, Indijos vandenyno, Ramiojo vandenyno ir Atlanto vandenyno (šiaurės ir pietų), mes palyginome OTU turtingumą tarp pakrančių ir vandenynų biomų (3b paveikslas). Nors stebėjome nedidelį statistinį skirtumą (atitinkamai P <0, 05 ir P <0, 01) tarp Ramiojo vandenyno ir Atlanto vandenynų pakrančių ir vandenynų mėginių ėmimo stočių, Indijos vandenyne reikšmingo skirtumo nepastebėjome.

Image

Kolodaro įvairovės kitimas vandenynų baseinuose ir platumose. a ) Kolodarinio OTU turtingumo platumas. Lieso regresija su polinomu suderinta buvo apskaičiuota siekiant parodyti platumos modelį. Blyškių spalvų srityje tendencija rodo 0, 95 pasikliovimo intervalą. ( b ) OTU turtingumo kitimas Longhursto biomuose. Kiekvienos biomos imties dydis ( n ) nurodomas išilgai x ašies. Punktyrinė linija parodo bendrą vidutinį OTU sodrumą ( S = 24). P vertė (NS: P > 0, 05, * P <0, 05, ** P <0, 01) atliekant Welch testą rodo reikšmingą OTU turtingumo sumažėjimą tarp pakrančių ir vandenynų biomų. Spalvotą šio paveikslėlio versiją galite rasti ISME žurnale internete.

Visas dydis

Koliodarijai priskirtų OTU aplinkos įvairovė apėmė visas šiuo metu pripažintas kolodarų šeimas. 89 OTU, kuriems neaiškios priskyrimo procedūros, naudojamos visam duomenų rinkiniui, metu, naudodamiesi NCBI BLASTN įrankiu, nustatėme artimiausią aplinkos ir kultūrinę atitiktį ir priskyrėme jas Collophidiidae (41 OTU), Sphaerozoidae (37) ir Collosphaeridae (11). ) pagal sukurtą kolodarinių duomenų bazę (papildoma lentelė S2; Biard ir kt., 2015). Nagrinėjant visus OTU kartu, Collosphaeridae (Clade A) buvo gausiausia sekų šeima, sudaranti vidutiniškai 63, 41% visų kolodarinių sekų (4a paveikslas). Nors Sphaerozoidae (Clade C) buvo mažiau gausus (31, 46% visų sekų), tai buvo pati įvairiausia šeima, apimanti beveik pusę visų kolodarinių OTU (109 OTU), tuo tarpu kolosfaeridai surinko tik 72 OTU (4a paveikslas). Trečiojoje šeimoje, Collophidiidae (Clade B), bendras santykinis paplitimas buvo mažas (5, 13%) ir ji buvo gana įvairi (49 OTU; 4a pav.). Iš trijų šeimų dar išsiskyrėme 13 klotų, iš kurių gausiausia yra A4, B1 ir C7, o A5, B1 ir C7 - iš įvairių šeimų (4a paveikslas). Apskritai klade A4 buvo gausiausias su 21, 59% visų kolodarinių sekų.

Image

Kolodarijos įvairovė. a ) Skirtingų klodų indėlis į bendrą kolodaro OTU (aukštis = OTU skaičius) ir bendrą kolodaro sekos skaičių (spindulys =% indėlio) b ) Kiekvieno kolodaro V9 rDNA OTU užimtumas ir erdvinis tolygumas, nustatytas visose stotyse, iš kurių imami mėginiai . Maža erdvinio lygumo vertė rodo, kad OTM metabolitų skaičius nėra tolygiai paskirstomas mėginių ėmimo stotyse, kur yra OTU, ir atvirkščiai. Kiekvienas apskritimas žymi vieną iš kolodarinio V9 rDNR OTU, jo dydis yra proporcingas visam skaitymo gausumui. Dešimt gausiausių OTU ženklinami pagal jų rangą ir taksonominę klado priklausomybę. Spalvotą šio paveikslėlio versiją galite rasti ISME žurnale internete.

Visas dydis

Mes pastebėjome, kad gausiausi OTU buvo plačiai paplitę mėginių ėmimo vietose (4b paveikslas) ir kad kiekviena iš 15 gausiausių buvo paskirstyta mažiausiai 32 mėginių ėmimo vietose iš viso 95 (tai yra 34%). Keletas kitų „retų“ OTU atsirado nedaugelyje mėginių ėmimo vietų, paprastai stebimų dviejose ar trijose mėginių ėmimo vietose.

Geografinis skirtingų kolodarinių šeimų ir kloadų pasiskirstymas devyniuose skirtinguose biogeocheminiuose regionuose parodė gana homogenišką pasiskirstymą: kiekvienoje mėginių ėmimo vietoje vyrauja keli klodai (vienas ar du) (5 paveikslas). Vidutiniškai Collosphaeridae pasirodė dominuojanti (65–76%) atvirų vandenynų vandenyse (tai yra, Indė, Pac, Nat, Sat ir Ant), o mes pastebėjome gana aiškų Sphaerozoidae vyravimą (45–66%). pakrančių biomai (ty Ico, Pco ir Aco), išskyrus Viduržemio jūrą (Med), kurioje vyrauja Collosphaeridae (77%; 5 pav.). Collophidiidae buvo reti ir sudarė <10% visų kolodarų sekų visuose biomuose, išskyrus keletą mėginių ėmimo stočių (pavyzdžiui, 132 ir 139, tiek Ramiojo vandenyno prekybos vėjo biome), kur jų indėlis yra žymiai didesnis (5 paveikslas). ). Kiekvienoje biomoje pasiskirstymo pavyzdžiai buvo gana vienodi visose mėginių ėmimo vietose, išskyrus Viduržemio jūrą, kur vykstant iš atsitiktinio baseino (mėginių ėmimo stotys 5–12) į rytietišką baseiną (17–30), klado sudėtis aiškiai pasikeitė. Sphaerozoidae vyrauja vakarinėje jūros dalyje (48% kolodarinių sekų) ir rytinėje dalyje yra pakeista Collosphaeridae (84% kolodaro sekų) (6 paveikslas). Nors abiejuose baseinuose kolodaro įvairovė buvo nedidelė, didesnė įvairovė buvo pastebėta trijose mėginių ėmimo vietose (pavyzdžiui, 9, 11 ir 23). Ši didesnė kolodarų įvairovė nuosekliai pasireiškė tolygiau pasiejant dviejų pagrindinių kolodarinių šeimų indėlį (santykis Collosphaeridae / Sphaerozoidae; 6 pav.).

Image

Santykinis rDNR metabolitų skaičius, priskirtas skirtingoms anksčiau apibrėžtoms kolodarų šeimoms ir kladėms (Biard ir kt., 2015) bei Tara vandenyno ekspedicijos mėginių ėmimo stotyse. Santykinis įnašas yra geografiškai suskirstytas pagal Longhurst's Biomes (Longhurst, 2010). Kiekvieno biomo dešiniajame skydelyje parodytas vidutinis skirtingų kolodarinių šeimų indėlis ir penki gausiausi klodai pažymėti pagal priklausymą. Išsamios skaitinės vertės pateiktos papildomoje S3 lentelėje.

Visas dydis

Image

Kolordarijos įvairovės modelis Viduržemio jūroje. Viršutinis skydelis: mėginių ėmimo vietų vieta. Vidurinis skydas: santykinis Collosphaeridae ir Sphaerozoidae gausos santykis (užpildytais juodais apskritimais) (didelė santykio vertė, reiškianti Collosphaeridae dominavimą, mažas santykis, Sphaerozoidae dominavimas) ir (su apverstu trikampiu) kolodarijos santykis. įvairovė (išreikšta OTU turtingumu). Apatinė skydinė dalis: santykinis rDNR metabolitų kiekis mėginių ėmimo vietose.

Visas dydis

Tada mes ištyrėme kolodaro įvairovės pokyčius, susijusius su aplinkos kintamųjų rinkiniu, prieinamu nagrinėjamiems mėginiams (papildoma S4 lentelė). Nesvarbu, ar buvo atsižvelgta į 16 rinkinių, ar į 3 duomenų rinkinyje pavaizduotas šeimas, jų ryšys su aplinkos kintamaisiais nebuvo statistiškai reikšmingas, tačiau stebėjome didėjančias ar mažėjančias daugelio skirtingų kintamųjų tendencijas (papildomas paveikslas S4). Vietoj taksonominių grupių, vertindami loginiu būdu transformuoto kolodaro OTU turtingumą, nustatėme reikšmingus ryšius su šešiais aplinkos kintamaisiais, batimetrija (tai yra dugno gylis), atstumu iki kranto, mišraus sluoksnio gyliu, atsitraukimu atgal. dalelių koeficientas, silicio dioksido koncentracija ir DCM (7 paveikslas ir papildoma S4 lentelė). Kiekvienos ėminių ėmimo stoties Pearsono koreliacijos koeficientas tarp kolodarinės įvairovės ir batimetrijos buvo didžiausias, r (93) = 0, 5456, P <0, 001 (7a paveikslas) ir paaiškino 29% viso kolodaro įvairovės kitimo. Nors duomenys apie sklypus buvo gana išsklaidyti, OTU turtingumas pastebimai padidėjo naudojant šiuos rąstais transformuotus kintamuosius: atstumas iki kranto, r (92) = 0, 4706, P <0, 001 (7b paveikslas), mišraus gylis sluoksnis, r (90) = 0, 4360, P <0, 001 (7c paveikslas), silicio dioksido koncentracija, r (86) = 0, 3223, P <0, 01 (7e paveikslas), o DCM gylis, r (79) = 0, 2973, P <0, 01 (7f pav.). OTU turtingumas pastebimai sumažėjo, kai logiškai transformuotas dalelių grįžtamasis koeficientas yra kietųjų dalelių organinės anglies pakaitalas, r (80) = - 0, 3933, P <0, 001 (7d paveikslas).

Image

Koreliacijos tarp kolodarinės įvairovės (OTU turtingumo logo) ir vidutinių aplinkos kintamųjų Tara vandenyno mėginių ėmimo stotyse (rodomos tiesinės regresijos linijos). Kiekviena mėginių ėmimo vieta (taškas) yra spalvota pagal vieną iš Longhursto biomų. a ) Ryšys su batimetrija (m). b ) santykis su atstumo iki kranto žurnalu (km). c ) Ryšys su MLD žurnalu (m). d ) Santykis su kietųjų dalelių atkūrimo koeficiento žurnalu, 470 nm (bbp470) (l m −1 ). e ) Santykis su silicio dioksido koncentracijos žurnalu (μmol m −1 ). f ) Santykis su DCM žurnalu (m).

Visas dydis

Diskusija

Kiekybiškai įvertinti rDNR kopijų skaičių

Naudodami specialiai sukurtus qPCR pradmenis, mes nustatėme 18S rRNR geno kopijų skaičių 17 kolodaro mėginių, apimančių tris skirtingas rūšis (1 lentelė). 7 kartus didesnis 18S rRNR geno kopijų skaičius, pastebėtas tarp kolonijinių, palyginti su pavieniais mėginiais, galėtų būti paaiškinamas tuo, kad yra keli branduoliai, apskaičiuoti nuo 4 iki 100 branduolių kolonijose kolonijose (Suzuki ir kt., 2009), o vieniši. pavyzdžiai paprastai turi vieną branduolį (Huth, 1913; Anderson, 1976; Suzuki ir kt., 2009). Negalima atmesti ir kitų hipotezių, tokių kaip dviejų formų ploidiškumo skirtumas, kai vienišasis yra haploidinė kolonijinių egzempliorių stadija (Biard ir kt., 2015).

RDNR kopijų skaičius, svertinis pagal centrinių kapsulių skaičių (tai yra faktinis ląstelių skaičius), parodė pasiskirstymą, atitinkantį kitų jūrų protistų skaičių (1 paveikslas) ir panašus, palyginti su Foraminifera (5000–40 000 18S rRNR). genų kopijos; Weber ir Pawlowski, 2013), artimiausias jų giminaitis palyginti bendrą jūrų protistų rDNR kopijų kiekį (papildoma S1 lentelė). Mūsų rezultatai patvirtina ir tinka anksčiau aprašytą koreliaciją tarp jūrų protistų rDNR kopijų dydžio ir skaičiaus (Zhu et al., 2005; Godhe et al., 2008). Nagrinėdamas visą egzempliorių (tai yra, visą koloniją), kolonijinis kolodarietis parodė aukščiausią rDNR kopijos numerį, kokį tik kada nors užfiksavo bet kuriame jūrų protistre. Iš 12 čia aprašytų kolonijinių pavyzdžių didžiausias rDNR kopijų skaičius (11 300 000 rDNR kopijų) užfiksuotas C. pelagicum kolonijoje, kurios matmenys 8 × 2 mm 2 (~ 14 mm 2 ). Toks didelis kiekis yra panašus į rDNR kopijų skaičių, apskaičiuotą daugialąsteliniame vėžiagyvių kopapode Mesocyclops edax (papildomas paveikslas S5; Wyngaard ir kt., 1995). Kadangi kolonijinis kolodarianas dažnai būna didesnis nei keli centimetrai, iki kelių metrų (Swanberg ir Harbison, 1979), mes manome, kad 400 × 2 mm 2 cilindrinė kolonija (tai yra 2512 mm 2, kolonijos dydis nurodytas Swanberg ir Harbison (1979), kurių centrinis kapsulės tankis yra 9, 12 kapsulės mm – 2 (Dennett ir kt., 2002), galėjo turėti beveik milijardą rDNR kopijų. Šios aukštos vertės parodo, kad sunku kiekybiškai įvertinti tikrąją Collodaria gausos reikšmę, išvestą iš metabolinio kodavimo tyrimų, nes jos gali pervertinti jų svarbą, atsižvelgiant į tai, kaip rūpestingai buvo imami mėginiai. Kolonijinės kolonijos, susidedančios iš planktono tinklo arba filtravimo procedūrų metu, lengvai suskaidomos, o DNR parašas kartu su dideliu rDNR kopijų kiekiu gali sklisti į mažesnio dydžio frakcijas (pavyzdžiui, 0, 8–5 μm), kur didelė įvairovė ir indėlis. Kolodarija buvo pranešta keletą kartų (Not et al., 2007; Sauvadet et al., 2010; Edgcomb et al., 2011; Massana, 2011). Nors mes negalime atmesti ląstelių lūžio įtakos skleidžiant kolodaro DNR, tai, kad Kolodarinės OTU sudėties skirtumai tarp keturių dydžio frakcijų, surinktų Tara vandenyno ekspedicijos metu, taip pat galėjo atsirasti dėl skirtingų kolodaro gyvenimo etapų ( pavyzdys, dauginantys voratinkliai: Anderson, 1983), kurie taip pat galėtų reprezentuoti kolodarinę DNR ir mažose frakcijose.

Tobulinamas duomenų rinkinio tikslumas

Duomenų, gautų atliekant metabolinio kodavimo įvairovės tyrimus, interpretacija priklauso nuo daugelio metodinių ir analitinių procesų, tokių kaip PGR artefaktai ir sekos nustatymo klaidos, kurios, kaip žinoma, padidina įvairovės įvertinimus (Kunin ir kt., 2010; Lee ir kt., 2012), kokybės kontrolė. sukurtų sekų (Huse ir kt., 2010; Quince ir kt., 2011) procedūros ir intragenominis polimorfizmas, neseniai įrodytas keliuose rizizuojančiuose taksonuose (tai yra, Foraminifera, Acantharia), įskaitant Nassellaria, artimiausią giminingą Collodaria molekulinėje dalyje. filogenijos (Pillet ir kt., 2012; Decelle ir kt., 2014). Naudodami tarpspecifinius kintamumo įvertinimus tarp kolodarinių šeimų (papildomas paveikslas S3) ir konservatyvų gausos slenkstį 1000 sekų, mes apibrėžėme iš viso 230 OTU. Mūsų vertinimai, pagrįsti pasauline apklausa, yra 26 kartus mažesni nei ankstesni įvertinimai (tai yra ~ 6000 OTU) mėginių ėmimo stočių pogrupyje iš tos pačios Tara vandenyno ekspedicijos (de Vargas ir kt., 2015), tačiau dvigubai daugiau nei iki šiol aprašytų egzistuojančių kolodarinių rūšių skaičius (tai yra 95 rūšys; dr. N Suzuki, asmeninis bendravimas). Be to, reikės papildomų pastangų, kad būtų išsamiai įvertinta faktinė kolodarinė įvairovė, pavyzdžiui, reikalavimas nustatyti taksonams būdingą sekų gausos apibrėžimą arba klasterių slenksčių naudojimas siekiant apriboti galimus įvairovės pervertinimus iš aplinkos tyrimų analizės (Brown et al., 2015). . Kolordarijos atveju, nustatant trijų rūšių (dviejų kolonijinių ir vienos vienišų) 18S rRNR genų kopijų skaičiaus qPCR vertinimus, atsirado skirtumas tarp vienatvės ir kolonijinės formos (1 lentelė) - dviejų formų, kurių šiuo metu negalima atskirti remiantis 18S ir 28S rRNR taksonominė geno žymeklio skiriamoji geba (Biard ir kt., 2015). Šiuo atžvilgiu centrinės kapsulės gausos ir sekos gausos įverčiai bus neobjektyvūs, kol mes sugebėsime atskirti vienatvę nuo kolonijinių formų pagal molekulinį parašą, kurią potencialiai būtų galima išspręsti naudojant įvairesnį žymeklį, pavyzdžiui, mitochondrijų genų žymeklį (Leray et al. 2013).

Įžvalga apie kolorado biologinę įvairovę ir ekologiją

Taksonominis 230 OTU priskyrimas remiantis naujausia morfomolekuline atskaitos sistema Koljadarijai (Biard ir kt., 2015) neatskleidė naujų linijų, kurias atspindi aplinkos seka tik šeimos lygmeniu. Taikant tikslesnį taksonominį skiriamąjį gebą, keli dominuojantys OTU, daugiausia priskirti Collosphaeridae ir Sphaerozoidae, buvo nuolat dominuojantys skirtingose ​​mėginių ėmimo vietose, o tai rodo, kad, be Collophidiidae, visa Collodaria yra kosmopolitiniai organizmai (4b ir 5 pav.). Šie pastebėjimai atitinka ankstesnį kolodarinio biologinės įvairovės pasiskirstymo, įvertinto iš skirtingų vietų, tyrimą, išplaukiančią, kad kolodaro rūšis galima suskirstyti į tris grupes: (1) plačiai paplitusios rūšys, paprastai priklausančios Collosphaeridae kladėms A4, A5 ir A6 arba Sphaerozoidae kladai C7., (2) atogrąžų paplitimo rūšys, tokios kaip A3, B1 ar C9 klotos, apribotos paviršiniais vandenimis, ir (3) naikina rūšis, kurių nėra jokiose egzistuojančiose morfomolekulinėse duomenų bazėse (Strelkov ir Reshetnyak, 1971; Biard ir kt., 2015). ). Pirmai kategorijai priskiriamos klosės buvo nuolatos pastebimos kaip gausiausios skirtingose ​​esamo duomenų rinkinio mėginių ėmimo vietose (4b ir 5 paveikslai). Neradome rimtų įrodymų, rodančių endeminių klodų buvimą, nors užfiksavome keletą „retų“ OTU, esančių keliose mėginių ėmimo vietose (4b paveikslas). Nepaisant plataus geografinio aprėpties, dauguma stočių, iš kurių buvo paimti mėginiai, buvo atogrąžų ir vidutinio klimato zonose, kuriose buvo tik kelios pakrantės sąlygos ir ribotas polinių mėginių ėmimo stočių skaičius (papildomas S2 paveikslas). Šiuo atžvilgiu negalime atmesti galimybės, kad mūsų atrankoje galėjo būti praleista daugybė ekologinių nišų, kuriose galėjo būti rasta papildomų kolodarinių taksonų.

Collophidiidae šeima su unikalia gentimi Collophidium (Biard ir kt., 2015) buvo gana retai sutinkama mūsų tyrime ištirtose mėginių ėmimo vietose (4a ir 5 paveikslai), kurios visos buvo apribotos sekliais vandenynų fototakų sluoksniais (4a ir 5 pav.). Pesantas ir kt., 2015). Ši mėginių ėmimo strategija galėjo nustatyti šališkumą prieš šią šeimą, nes aplinkos sekų priskyrimas, dažniausiai gautas iš ankstesnių klonų bibliotekų tyrimų, parodė, kad Collophidiidae buvo nuolat dominuojanti kolodarų šeima giluminių vandenų mėginiuose (Biard ir kt., 2015). Šį pastebėjimą patvirtino neseniai atliktas tyrimas, kurio metu iš visame pasaulyje įsigytų giliavandenių mėginių (3000–4000 m) buvo išgauta nemaža dalis Collophidium genčiai priskirtų metabolitų ( Pernice ir kt., 2015). Toliau tyrinėdami šią giliai gyvenančią kolodarų bendruomenę, galime pakeisti mūsų supratimą apie Kolodarijos ekologiją ir įvairovę pasauliniame vandenyne.

Pastebėtas kolodaro turtingumo sumažėjimas aukštų platumų link (3a pav.) Atitinka ne tik ankstesnes analizes (Strelkov ir Reshetnyak, 1971), bet ir kitas radioaktyviųjų spindulių (Boltovskoy et al., 2010) ar kitų jūros organizmų, tokių kaip: kaip tintinnidai ar elniasparniai (Dolan ir kt., 2006; Rombouts ir kt., 2009). Nagrinėdami biogeocheminius regionus, kuriuos apibrėžė Longhurstas (2010), mes nuosekliai stebėjome didesnį sekų, priskirtų Sphaerozoidae (rūšims, kurioms dažniausiai nesusidaro silicizuota struktūra; Biard ir kt., 2015), indėlį nedidelės įvairovės pakrančių biomose, tuo tarpu Collosphaeridae (skeleto nešantys taksonai). ; Biard ir kt., 2015) buvo dominuojantys kolodarai įvairesnių atvirų vandenynų biomuose (3b ir 5 paveikslai). Panašiai kaip mūsų stebėjimai, daugybė paviršiaus nuosėdų įrašų rodo, kad Collosphaeridae gali būti aptinkama atvirų vandenynų vandenyse (Boltovskoy et al., 2010), tačiau trūkstant fosilijų įrašų apie spyglių guolį ir plikajai Kolodarijai neleidžiama tiksliai patikrinti šio pasiskirstymo. modelis.

Kolodarinės įvairovės ir aplinkos kintamųjų sąsajos

Išbandžius ryšius tarp kolodarinio OTU turtingumo kiekviename klade ar šeimoje su turimais 14 aplinkos kintamaisiais, reikšmingų tiesinių koreliacijų nepateikta (papildomas S4 paveikslas), tačiau reikšmingi ryšiai rasti, kai vietoj to vertinamas bendras kolodaro OTU turtingumas (7 paveikslas). ). Stebimi didėjančios ar mažėjančios įvairovės modeliai leidžia manyti, kad visose trijose šeimose (išskyrus Collophidiidae atstovus, kurių reprezentatyvumas yra nepakankamas) rodomi tie patys kintamųjų kintamumai ir kad nė vienas reikšmingas kintamumas nepaveikė vienos šeimos.

Apskritai, tiek batimetrija, tiek atstumas nuo kiekvienos ėminių ėmimo stoties kranto parodė aukščiausią koreliaciją su OTU turtingumu (7a ir b paveikslai), rodančiais, kad kolodarų įvairovė greičiausiai padidės labiau vandenyno sąlygomis, kaip buvo siūloma anksčiau (pav. 3b; Swanberg, 1979). Mes taip pat nustatėme teigiamą koreliaciją tarp vandens stulpelio stratifikacijos (apskaičiuotos pagal mišraus sluoksnio gylį), ir tai rodo, kad kolodarinė įvairovė padidėja giliau stratifikuojant vandenyną (7c paveikslas). Nors mišraus sluoksnio gylis (MLD) sezonų metu kinta, giliau stratifikuojamas žiemą, o seklus MLD - vasarą, jo mastas atogrąžų regionuose laikui bėgant yra gana stabilus, o gilus MLD (De Boyer Montégut et al., 2004). Šiame tyrime didžioji mėginių dalis buvo surinkta atogrąžų regionuose (papildomas S2 paveikslas), turint gilų MLD, ir tai rodo vis didesnę įvairovę link tropinių ir oligotrofinių regionų, kuriuose, kaip žinoma, yra daugiau Kolodarijos (Dennett ir kt., 2002; Biard ir kt.) ., 2016). Tokį modelį palaikė reikšmingas įvairovės padidėjimas, mažėjant kietosioms organinėms anglims ir didėjant DCM. Nerasta reikšmingo ryšio tarp OTU turtingumo ir jūros temperatūros (papildoma S4 lentelė), tuo tarpu anksčiau buvo teigiama, kad kolodarų įvairovė gali padidėti šiltesnių vandenų link (Strelkovas ir Reshetnyak, 1971). Tačiau mūsų mėginių ėmimo aprėptis pateikė tik siaurą temperatūros diapazoną (tarpkvartilinis diapazonas = 7 ° C, nuo 18 iki 25 ° C), todėl temperatūros reikšmė galėjo būti ribota paaiškinant stebėtus įvairovės modelius.

Nors silicio dioksido koncentracija mėginių ėmimo stotyse buvo gana maža ir būdinga atogrąžų vandenims, bendra teigiama koreliacija tarp silicio dioksido koncentracijos ir kolodaro įvairovės (7e pav.) Buvo netikėta, nes daugumoje Kolodarijų sumažėjo silicizuotų struktūrų (stuburų ar griaučių) arba net trūko šių struktūrų. (Biard ir kt., 2015). Be to, nors mes galėjome tikėtis plikagalvių Sphaerozoidae (pvz., Collozoum spp.) Dominavimo mažo silicio dioksido koncentracijos vandenyse, OTU sudėties analizė tokio dominavimo neatskleidė, o veikiau pasiūlė, kad trijų kolodarinių šeimų įvairovė padidėjo. didėjanti silicio dioksido koncentracija (papildomas S4 paveikslas). Nors radioaktyviųjų griaučių masės sumažėjimas, mažėjant silicio dioksido kiekiui paviršiniuose vandenyse, anksčiau buvo pasiūlytas analizuojant jūrinius nuosėdas iš Cenozoikos (tai yra <60 milijonų metų; Lazarus et al., 2009), vis dėlto dabartinis modelis gali Nurodykite, kad didėjant silicio dioksido koncentracijai, galima susidurti su didele morfologine įvairove, visų pirma, su silikatu kolodariniu (tai yra, spygliais ir skeletu laikančiomis rūšimis).

Šiame tyrime pastebėtas kosmopolitinis kolodarinių šeimų ir klodų pasiskirstymas pateikia įžvalgą apie Kolodarijos ekologiją ir rodo, kad šie protistai prisitaikė prie įvairių aplinkos sąlygų. Nors mes atkūrėme šešis reikšmingus ryšius su skirtingais aplinkos parametrais, gali būti svarstomi kiti procesai, kad būtų galima visiškai suprasti kolodarinės įvairovės pasiskirstymą, pavyzdžiui, laikinųjų skalių įtaką, nes įrodyta, kad jie gali turėti įtakos planktono įvairovei (Rombouts et al., 2010; Egge ir kt., 2015), arba apimantys tokius biotinius kintamuosius kaip grobis (Shurin, 2001) arba fotosimbiozė (Biard ir kt., 2016), kurie, kaip žinoma, turi įtakos planktono bendrijų pasiskirstymui.

Prisijungimai

„GenBank“ / EMBL / DDBJ

  • KY263810
  • KY263812
  • KY263827

Papildoma informacija

„Word“ dokumentai

  1. 1.

    Papildoma S1 lentelė

  2. 2.

    Papildoma S2 lentelė

  3. 3.

    Papildoma S3 lentelė

  4. 4.

    Papildoma S4 lentelė

Vaizdo failai

  1. 1.

    Papildomas S1 paveikslas

  2. 2.

    Papildomas S2 paveikslas

  3. 3.

    Papildomas S3 paveikslas

  4. 4.

    Papildomas S4 paveikslas

  5. 5.

    Papildomas S5 paveikslas

    Papildoma informacija pridedama prie šio dokumento „ISME Journal“ svetainėje (//www.nature.com/ismej)