Lėtinis neutralios keramidazės aktyvavimas apsaugo β ląsteles nuo citokinų sukeltos apoptozės acta pharmaologica sinica

Lėtinis neutralios keramidazės aktyvavimas apsaugo β ląsteles nuo citokinų sukeltos apoptozės acta pharmaologica sinica

Anonim

Anotacija

Tikslas:

Ištirti neutralios keramidazės (N-CDazės) aktyvumą ir ekspresiją insuliną išskiriančioje ląstelių linijoje INS-1 ir jos vaidmenį ląstelių reakcijoje į citokinus.

Metodai:

Norint aptikti N-CDazės aktyvumą ir ekspresiją INS-1 ląstelėse, apdorotose citokinų mišiniu (5 ng / ml interleukino-1β, 10 ng / ml TNF-α), buvo atlikta HPLC, Western blotting ir kiekybinė realaus laiko PGR. ir 50 ng / ml-interferono). N-CDazės ekspresija ir aktyvumas INS-1 ląstelėse buvo specialiai slopinamas naudojant N-CDazės-siRNR transfekciją. INS-1 ląstelių apoptozės vertinimui buvo naudojama aneksino V fluoresceino izotiocianatų / propidium jodidų srauto citometrija.

Rezultatai:

INS-1 ląstelės pasižymėjo tam tikru baziniu N-CDazės aktyvumu, o citokinai sukėlė N-CDazės aktyvavimo vėlavimą nuo laiko. Pirmiausia N-CDazės aktyvacija buvo aptinkama praėjus 8 valandoms po stimuliacijos. Jis pasiekė maksimumą 16 val. Ir išliko padidėjęs 24 val. Citokinai taip pat padidino NR-CDazės mRNR ir baltymo ekspresiją INS-1 ląstelėse. Be to, kai N-CDazės aktyvumą slopino RNR interferencija, citokinų sukelta apoptozė INS-1 ląstelėse pastebimai padidėjo.

Išvada:

N-CDazės kelias yra aktyvus INS-1 ląstelėse, o lėtinis N-CDazės aktyvavimas yra susijęs su β ląstelių patologiniu atsaku į citokinus, galimai užtikrindamas apsaugą nuo citokinų toksiškumo.