Palyginus žmogaus 19q13 chromosomą ir 7-osios pelės chromosomos sinteninę sritį, nustatyta, kad žmoguje nėra 11,6 mb, turinčio keturias su pelių kalcio jutikliais susijusias receptorius: atitikimas šeimai gerybinei 3 tipo hipokalciurinei hiperkalcemijai | europos žmogaus genetikos žurnalas

Palyginus žmogaus 19q13 chromosomą ir 7-osios pelės chromosomos sinteninę sritį, nustatyta, kad žmoguje nėra 11,6 mb, turinčio keturias su pelių kalcio jutikliais susijusias receptorius: atitikimas šeimai gerybinei 3 tipo hipokalciurinei hiperkalcemijai | europos žmogaus genetikos žurnalas

Anonim

Anotacija

Šeimos gerybinė hipokalciurinė hiperkalcemija (FBHH) yra genetiškai nevienalytis sutrikimas, susidedantis iš trijų nurodytų tipų - FBHH1, FBHH2 ir FBHH3, kurių chromosomų vietos yra atitinkamai 3q21, 1, 19p ir 19q13. FBHH1 sukelia kalcio jutiklį reguliuojančio receptoriaus (CaSR) mutacijos, tačiau FBHH2 ir FBHH3 pokyčiai nežinomi. FBHH3, taip pat vadinamas Oklahomos variantu (FBHH Ok ), buvo nubrėžtas 12cM intervalu, briaunojamas D19S908 ir D19S866. Norėdami patikslinti FBHH3 vietą, atlikome sąsajų tyrimus naudodami 24 polimorfinius lokusus. Mūsų rezultatai nustato ryšį tarp FBHH3 ir 17 šių lokusų ir rodo, kad FBHH3 yra 4, 1 Mb srityje, kuriai centromeriškai pridedama D19S112, o telomeriškai - rs245111, kurioje sintetinėje srityje pelės 7 chromosomoje yra keturios su Casr susijusios sekos ( Gprc2a). -rss ). Tačiau šių Gprc2a-rs žmogaus homologų nerasta, o palyginus 22, 0 Mb žmogaus ir 39, 3 Mb pelenų sintetinius regionus, nustatyta dviejų segmentų, kurie buvo apversti 11, 6 Mb praradimu iš genomo, kuriame buvo keturi Gprc2a, evoliucinis išsaugojimas. -rss . Taigi FBHH3 negalima priskirti prie Gprc2a-rss anomalijų. Dvylikos kitų genų, išreikštų prieskydiniuose ir (arba) inkstuose, DNR sekos analizė nenustatė jokių anomalijų, tai parodo, kad šie genai greičiausiai nebus FBHH3 priežastis. Šio tyrimo rezultatai patikslino FBHH3 vietą žemėlapyje, o tai palengvins kito CaSR ar kalcio homeostazės tarpininko nustatymą.

Įvadas

Šeimyninė gerybinė hipokalciurinė hiperkalcemija (FBHH), dar vadinama šeimine hipokalciurine hiperkalcemija (FHH) arba šeimynine gerybine hiperkalcemija (FBH), yra paveldimas mineralinės homeostazės sutrikimas, perduodamas kaip autosominis dominuojantis bruožas, turintis didelę skvarbumo laipsnį. 1, 2 FBHH yra būdingas biochemiškai dėl to, kad visą gyvenimą padidėja kalcio koncentracija serume, ir tai yra susijusi su netinkamai mažu kalcio išsiskyrimu su šlapimu ir normaliu ar šiek tiek padidėjusiu cirkuliuojančio prieskydinio hormono (PTH) kiekiu. Paprastai pasireiškia 1, 2 hipermagnezemija. FBHH sergantys asmenys paprastai yra besimptomiai ir sutrikimas laikomas gerybiniu. Tačiau kai kuriems suaugusiesiems pasireiškia chondrokalcinozė 3 ir pankreatitas 4, o kai kurie vaikai kenčia nuo sunkaus naujagimių hiperparatiroidizmo (NSHPT), kuris yra gyvybei pavojingas sutrikimas, susijęs su sunkia hiperkalcemija, hipotonija, kaulų demineralizacija, lūžiais ir kvėpavimo sutrikimais. 1, 5 FBHH ir NSHPT daugelyje šeimų sukelia geno, koduojančio kalcio jutiklį receptorių (CaSR), esančio 3q21.1 chromosomoje, funkcijų praradimas. 5, 6, 7 FBHH individai yra heterozigotiniai dėl CaSR mutacijų, o NSHPT pacientai gali būti arba homozigotiniai, arba heterozigotiniai dėl CaSR mutacijų, arba turi de novo heterozigotines CaSR mutacijas. 1, 5

Žmogaus CaSR yra 1078 aminorūgščių ląstelių paviršiaus baltymas, ekspresuojamas daugiausia prieskydiniuose ir inkstuose, kur leidžia reguliuoti PTH sekreciją ir inksto kalcio reabsorbciją, atitinkančią vyraujančią tarpląstelinio kalcio ([Ca 2+ ] o ) koncentraciją. 1 CaSR yra G baltymų jungiamųjų receptorių (GPCR) šeimos, priklausančios metabotropiniams glutamato receptoriams, V2R vomeronazinio feromono receptoriams, TAS1R skonio receptoriams, γ- amino sviesto rūgšties (GABA-B), C šeimos narys. GPRC6A retųjų receptorių. 8 Kai liga jungiasi su ligandu, gauta iš Cq / 11 baltymų priklausoma fosfolipazės C (PLC) veikla, sukelianti inozitolio 1, 4, 5-trifosfato (IP 3 ) kaupimąsi ir greitą kalcio jonų išsiskyrimą iš ląstelių. parduotuvių ([Ca 2+ ] i ), po kurių eina [Ca 2+ ] 0 . Šie tarpląsteliniai reiškiniai mažina PTH sekrecijos iš prieskydinės liaukos ląstelių ir inkstų kanalėlių kalcio reabsorbcijos sumažėjimą. Taigi, CaSR vaidina pagrindinį vaidmenį reguliuojant [Ca 2+ ] 0 homeostazę, kai inaktyvinančios mutacijos sukelia hipokalciurinę hiperkalcemiją, o aktyvinančios mutacijos - priešingas hiperkalciurijos pasireiškimus ir hipokalcemiją. 1, 2, 10, 11 Be to, CaSR aktyvinimas per G i -baltymą stimuliuoja tarpląsteliniu signalu reguliuojamą kinazę (ERK) 1/2 ir mitogeno aktyvuoto baltymo (MAP) kinazės kaskadą. Šie keliai gali turėti įtakos paratonidinių ląstelių dauginimuisi ir yra įdomu pastebėti, kad kai kurios CaSR inaktyvinančios mutacijos gali būti susijusios su pirminiu hiperparatiroidizmu. 13 Tačiau maždaug dviem trečdaliams FBHH sergančių pacientų buvo prarastos funkcijos mutacijos, susijusios su 3234 bp koduojančiu CaSR genu. Taigi paaiškėja, kad FBHH sergantiems pacientams gali atsirasti kitų mutacijų, susijusių su nekoduojančiais CSA regionais, arba mutacijų, susijusių su kitais kalcio reguliavimo receptoriais ir tarpininkais.

Identifikuojant du kitus FBHH lokusus ne 3q21.1 chromosomoje, nurodomas genetinis heterogeniškumas ir patvirtinama galimybė, kad kalcio homeostazėje gali būti papildomų CaSR arba antrųjų pasiuntinių. Vienas iš šių FBHH lokusų buvo susietas su 19p, 15 chromosoma, o kitas, kuris buvo identifikuotas giminingoje iš Oklahomos ir kuris yra vadinamas Oklahomos variantu (FBHH Ok ), 16 buvo priskirtas prie 19q13 chromosomos. 17 Šie trys genetiškai skirtingi FBHH tipai buvo priskiriami 1 FBHH tipui (FBHH1, Mendelio paveldėjimas žmoguje (MIM) Nr. 145980), FBHH2 (MIM% 145981) ir FBHH3 (MIM% 600740), jų chromosomų vieta buvo 3q21. .1, 19p ir 19q13. 6, 15, 17 FBHH2 ir FBHH3 genai liko identifikuoti, ir, siekdami šio tikslo, mes anksčiau nubrėžėme FBHH3 (ty FBHH Ok ) apytiksliai 12 cM intervalui, centromeruotu D19S908 ir telomeriškai D19S866, chromosomai. 19q13. 17 Šis intervalas yra maždaug 4, 9 Mb ir jame yra 179 genai. 17 Norėdami nustatyti genetinį defektą, sukeliantį FBHH3, mes atlikome tris būdus: pirmiausia siekėme dar labiau apibrėžti kritinį chromosomų intervalą 19q13, naudodami 24 polimorfinius žymenis (17 mikrosatellitinių tandemų pakartojimų ir 7 vieno nukleotido polimorfizmai, SNP); antra, mes ištyrėme kritinį intervalą ir jo sinteninę sritį pelių 7 chromosomoje kandidatams į genus; ir trečia, mes ištyrėme DNR sekos anomalijas dvylikoje genų kandidatų iš kritinio intervalo, kurie taip pat buvo išreikšti paratiroiduose ir (arba) inkstuose.

medžiagos ir metodai

Pacientų

Buvo tiriami keturiasdešimt narių iš penkių kartų iš anksčiau praneštų 16, 17, 18 FBHH Ok giminaičių. Šių šeimos narių biocheminis FBHH fenotipas buvo nustatytas 16, dokumentuojant hiperkalcemiją, susijusią su mažu santykiu (30 metų amžiaus (II.2, II.4, II.6, II.9 ir III.6, 1 paveikslas)). Trys> 40 metų suaugusieji (II.4, II.9 ir III.3) taip pat parodė osteomaliacijos požymius. Asmuo, vartojantis prieštraukulinius vaistus, galinčius pakeisti Ca 2+ homeostazę, vyras (IV.4) anksčiau apibūdino 16 kaip kenčiantiems nuo hipoparatiroidizmo dėl hipokalcemijos ir penki asmenys, kurie buvo normalokalcemiški nepaveiktų tėvų vaikai, buvo pašalinti iš jungties tyrimo; buvo nustatyti asmenų (IV.4) haplotipai, tačiau jie nebuvo įtraukti į analizę FBHH3 lokuse. Taigi 34 šeimos narius iš penkių kartų, įtrauktų į FBHH3 lokuso genetinę analizę, sudarė 19 paveiktų narių, 13 nepaveiktų narių ir 2 nepažeisti sutuoktiniai (1 paveikslas). Informuotas sutikimas buvo gautas naudojant protokolus, kuriuos patvirtino vietos ir nacionaliniai etikos peržiūros komitetai.

Image

Šeimos atskyrimo dėl FBHH Ok ir 19q13 chromosomos lokusų kilmė. Kilmė buvo sutrumpinta, o skaičiai, identifikuojantys asmenis, buvo pakeisti iš pradinių aprašų 16, 18, nurodant tuos šeimos narius, kurie davė informacijos FBHH Ok lokalizavimui. Be to, įtraukiami paveikti asmenys IV.16 ir V.1, kurie tapo prieinami tyrimui nuo ankstesnio pranešimo 17 . Kvadratai nurodo vyrus, o apskritimai - moteris. Neištemti simboliai nurodo nepaveiktus asmenis, o pajuodę simboliai nurodo paveiktus asmenis. Išbrėžtas kvadratas rodo asmenį (IV.4), turintį idiopatinį hipoparatiroidizmą, kuris nebuvo įtrauktas į jungties analizę. Tėviški haplotipai yra kairėje, o motinos haplotipai - dešinėje. Sumažinti haplotipai yra skliaustuose. FBHH OK atsiskiria nuo haplotipo [3, 5, 3, 3, 7, 6, 3, 4, 5, 3, 3, 6, 3, 1], apibrėžto lokusų, išvardytų kairėje nuo atskirų asmenų haplotipų. I.1 (pvz., 16 paveiktų asmenų, II.4, II.6, II.9, III.6, III.9, III.13, III.17, III.18, IV.8, IV. 10, IV.11, IV.13, IV.14, IV.15, IV.16 ir V.1). Juodosios juostos nurodo paveiktus haplotipus, o neuždengtos juostos nurodo nepaveiktus haplotipus. Tarp IIB, III.3 ir III.4 asmenų buvo stebimi rekombinantai (pažymėti žvaigždute - * ) tarp FBHH Ok ir išvardytų lokusų. III.4 skyriuje užfiksuota haplotipo sritis rodo, kad tikslios rekombinantų ribos nebuvo įmanoma nustatyti, nes motina II.2 buvo homozigotinė susijusiuose lokusuose (D19S745 ir D19S412). Regionas, kuriame yra FBHH Ok genas, nurodomas tarp strėlių.

Visas dydis

Genetiniai žymekliai

Leukocitų DNR buvo gauta iš veninio kraujo mėginių, atliktų standartiniais metodais iš penkios kartos FBHH Ok giminaičių 35 narių (19 paveiktų ir 16 nepaveiktų) (1 paveikslas). Polimorfizmai 17 mikrosatellitinių tandemų kartojimų buvo aptikti, kaip aprašyta anksčiau, 17, 18, naudojant bet kokius fluorescenciškai paženklintus pradmenis (DM, D19S112, D19S745, gaat-p8371, D19S412, D19S219, D19S606, D19S902, D19S879 ir D19Saci9). ATP 32 ) galutinai paženklinti pradmenys (vietiniams SULT2A1 (sulfotransferazių šeima, citozolinis, 2A, dehidroepiandrosteronas (DHEA), pirmenybė teikiantis 1 nariui), GYS1 (glikogeno sintazė 1), HRC (histidiną turtingas kalcį rišantis baltymas), Rras, D19S317, D19S246 ir KLK1 (kallikreinas 1)). 19, 20, 21, 22, 23 Septyni SNP (rs17660300, rs10411262, rs12611226, rs12463216, rs11667229, rs24511 ir rs3097342) buvo aptikti PGR ir restrikcijos endonukleazių analize asmenų pogrupyje, kaip pranešta anksčiau. 24 iš 24 polimorfinių lokusų eiliškumas ir genetiniai atstumai buvo išvesti iš paskelbtų genetinių žemėlapių 19, 20, 21, o lokacijų eiliškumas buvo 19cen - D19S219 - DM - D19S112 - D19S745 - rs17660300 - D19S412 - rs10411262 - D19S606 - SULT2A1 - D19S902 - rs12611226 - rs12463216 - GYS1 - rs11667229 - D19S879 - HRC - D19S604 - Rras - rs245111 - rs3097342 - D19S317 - D19S246 - KLK1 - gaatp8371 - 19qter.

Ryšio analizė

Šio ir anksčiau pranešto tyrimo 17 duomenys buvo sujungti jungčių tyrimams. Paveikti asmenys IV.16 ir VI (1 paveikslas) buvo neseniai nustatyti ir apie juos anksčiau nebuvo pranešta. 17 įprastų dviejų taškų LOD balų buvo apskaičiuoti naudojant LINKAGE kompiuterines programas, 17, 18, FBHH Ok dažnis ir skvarba buvo atitinkamai atitinkamai 10–4 ir 90%, 17, 18 ir šių verčių kitimas neturėjo reikšmingo poveikio. apie sąsajų analizės rezultatus.

DNR sekos analizė

DNR iš FBHH Ok paveikto nario ir nepaveikto nesusijusio individo buvo naudojama su genui specifiškais pradmenimis (informacija pateikiama pagal užklausą) PGR amplifikacijai, kaip aprašyta. 17 PGR produktų DNR sekos buvo nustatytos naudojant anksčiau aprašytus metodus. 17 Atliekant atvirkštinę transkriptazės PGR (RT-PGR), naudojant genų specifinius pradmenis, buvo pašalinti bet kokie sujungimo anomalijos, naudojant bendrą RNR, ekstrahuotą iš Epstein-Barr viruso transformuotos limfoblastoido ląstelių linijos iš vieno paveikto ir nesusijusio normalaus individo, kaip aprašyta anksčiau. . 25

Lyginamoji genomo analizė

Buvo ieškoma Nacionalinio biotechnologijų informacijos centro 23 ir Ensembl bioinformatikos duomenų bazių. Atlikta duomenų bazės paieška su nukleotidų seka, naudojant BLAST algoritmą. Atlikta lyginamoji FBHH3 kandidato srities žmogaus 19q13 chromosomoje ir sinteninio regiono 7 pelės chromosomoje genomo analizė.

Rezultatai

Keturiolika iš 17 polimorfinių mikrosatellito žymenų, kurių eiliškumas 12 cM srityje 19q13 chromosomoje yra 19 cen - D19S219 - DM - D19S112 - D19S745 - D19S412 - D19S606 - D19S902 - D19S879 - HRC - D19S604 - Rras. - „gaatp 8371 - 19qter“, 19, 20, 21 pasirodė esąs informatyvus FBHH Ok šeimoje. Nustatytas ryšys tarp FBHH Ok ir 10 iš 14 polimorfinių lokusų (1 lentelė) iš 19q13 chromosomos, kai didžiausias LOD balas yra 6, 92, esant 0% rekombinacijai, stebimas tarp D19S606 ir FBHH Ok . Šie rezultatai patvirtina ankstesnę „FBHH Ok“ lokalizaciją šiame regione. 17 Atskirų rekombinantų analizė (1 paveikslas) padėjo patikslinti regioną, kuriame yra FBHH Ok lokusas. 1 paveiksle pavaizduoti 46 nariai (44 išgyvenę ir 2 mirę) iš 5 kartų, turintys duomenis iš 14 chromosomos 19q13 mikrosatellito polimorfinių lokusų. Mirusio tėvo I.1 haplotipas buvo nustatytas ištyrus jo keturis nukentėjusius vaikus (II.2, II.4, II.6 ir II.9) ir vieną nepaveiktą sūnų (II.7). Jo paveikta dukra II.2 paveldėjo rekombinantinį haplotipą, nustatantį FBHH Ok centromerą iki D19S317, ir tai dar kartą patvirtina panašūs rekombinantai jos paveiktoje dukroje III.3. Paveiktas sūnus III.4 paveldėjo rekombinantinį haplotipą, nustatantį FBHH Ok telomerinį D19S112. Kombinuoti rekombinantų stebėjimai, aprašyti II.2, III.3 ir III.4, nustato FBHH Ok per <10 cM intervalą, centromeruotą D19S112, o telomeriškai - D19S317. Tolesnė analizė naudojant septynis SNP, esančius šiame kritiniame regione 11 pagrindinių šeimos narių (2 pav.), Atskleidė rekombinantus II.2, III.3 ir III.4 individams, kurie padėjo FBHH Ok centromerus susieti su rs245111. Taigi FBHH3 buvo suskirstytas į intervalą, kurį centromeriškai brėžė D19S112, o telomeriškai - rs245111. Buvo nustatyta, kad šis intervalas yra 4, 1 Mb ir turi 135 baltymus koduojančius genus ir 24 numatomus genus. 21, 22, 23 Ši žmogaus 19q13 sritis yra sintetinė 7 pelės chromosomos sričiai, kurioje yra keturi GPCR, kurie buvo vadinami su Casr susijusiomis sekomis, nes jie turi> 30% tapatumo ir> 50% homologijos aminorūgščių lygyje į žmogaus CaSR. Šios keturios su Casr susijusios sekos, 26 dar žinomos kaip Gprc2a-rs1 , Gprc2a-rs2 , Gprc2a-rs3 ir Gprc2a-rs5 , priklauso GPCR genų C šeimai ir koduoja spėjamus vomeronasalinius feromonų receptorius. Remiantis dideliu tapatumu ir homologija su žmogaus CaSR, jie atspindėjo labai tikėtinus genus kandidatus į FBHH3. Tačiau bioinformatine (BLAST) žmogaus 19q13 srities analize nebuvo nustatyta nei žmogaus, nei primato, Gprc2a-rs genų homologai, todėl buvo užkirstas kelias jų MBH mutacijos analizei. Šių Gprc2a-rs genų nebuvimo žmogaus organizme pagrindas buvo atliktas palyginus žmogaus chromosomos 19q13 ir sintetinių sričių, esančių pelės 7 chromosomoje, analizę. Tai parodė, kad nors abu regionai turėjo artimas homologijas, jie taip pat turėjo keletą skirtumų: (3 pav.). Pirmiausia žmogaus chromosomos 19q13 centromerinė ir telomerinė orientacija buvo pakeista 7 pelės chromosomoje, kaip aprašyta anksčiau. 28 Be to, žmogaus genome nebuvo 11, 6 Mb srities 7 pelės chromosomoje, kurioje yra 35 pelių genai, įskaitant keturis Gprc2a-rs (3 paveikslas). Pelėse šis 11, 6 Mb regionas yra 39, 3 Mb segmente, kuriame kitaip evoliuciniu požiūriu yra išsaugotas centrinis 25, 1 Mb, esantis tarp Lig1 ir Pop4 genų, ir telomerinis 2, 6 Mb, esantis tarp genų Siglec5 ir Emp3 . Tačiau žmogaus pelės 25, 1 Mb centromerinės ir 2, 6 Mb telomerinės porcijos yra apverstos. Taigi, žmogaus sinteninė sritis yra 22, 0 Mb ir yra tarp POP4 ir SIGLEC5 genų (3 pav.). Šiame 22, 0 Mb regione yra 4, 1 Mb FBHH3 kandidato intervalas.

Pilno dydžio lentelė

Image

11 šeimos narių, atskirtų FBHH Ok, ir 19q13 SNP lokusų chromosomų giminė. Simboliai ir identifikavimo kodai pagal generaciją ir vietą giminėje yra aprašyti 1 paveiksle. Tėvų haplotipai yra kairėje, o motinos haplotipai yra dešinėje. Sumažinti haplotipai yra skliaustuose. FBHH OK atsiskiria su haplotipu [T, C, G, T, T, C, G]; pvz., keturiems paveiktiems asmenims I.1, II3, II.4 ir II.5). Juodosios juostos nurodo paveiktus haplotipus, o neuždengtos juostos nurodo nepaveiktus haplotipus. Tarp IIB ir III.3 asmenų buvo stebimi rekombinantai (pažymėti žvaigždute - * ) tarp FBHH Ok ir išvardytų lokusų.

Visas dydis

Image

FBHH3 kandidato intervalo palyginimas su žmogaus chromosoma 19q13.3 su sinteninėmis sritimis pelės chromosomoje 7. Horizontalios kietos linijos žymi sintetinius regionus tarp dviejų rūšių. Horizontalios punktyrinės linijos žymi nesintetines sritis. Vertikalios rodyklės rodo žymeklių, esančių FBHH3 kandidato regione, vietą. Parodytos (pažymėtos žvaigždute) FBHH3 kandidatų genų chromosomos ir jų pelių homologai. Taip pat nurodomi genai chromosomų lūžio taškuose (†).

Visas dydis

Keturių Gprc2a-rs genų nebuvimas žmogaus 19q13 regione paskatino ieškoti kitų FBHH3 genų kandidatų. Dvylika iš jų buvo atrinkta atsižvelgiant į jų inkstų ir (arba) prieskydinių liaukų ekspresiją, taip pat žinomą ar tikėtiną įtaką GPCR tarpininkaujamo signalo perdavimui (2 lentelė), kad būtų galima nustatyti prioritetinę DNR sekos analizę. Šie 12 genų užkodavo taip: su PTH susijęs baltymas, žinomas kaip PTH2; 29 - prostaciklino GPCR, žinomo kaip PTGIR; 30 - G baltymo γ -subvienetas, žinomas kaip GNG8; epitelio membranos baltymas, žinomas kaip EMP3, padidinęs ekspresiją prieskydinių liaukų adenomose; 31 - lipidų kinazė, žinoma kaip SPHK2, kuri slopina ląstelių augimą ir yra aktyvuota ERK1 / 2 fosforilinant; 32 - Gq / 11 -baltymo stimuliuotas antrosios ląstelės vidinis nešiklis, žinomas kaip TULP2; 33 baltymas, žinomas kaip NUCB1, kuris jungiasi su G-proteinu ir palaiko Ca 2+ kaupimo baseiną golgiuose; Baltymas, žinomas kaip HRC ir kuris turi pagrindinį vaidmenį sergant sarkoplazminiu retikuliniu Ca 2+ ciklu; 35 numanomas citozolinis Ca 2+ surišantis baltymas, žinomas kaip RCN3; 36 - guanino nukleotidų mainų faktorius, žinomas kaip CYTH2, turintis reikšmės CaSR sukeltai citoskeleto pertvarkai chemotaksės metu; 37 ir GTPazę, žinomą kaip R-RAS, kuri aktyvuojama cikliniu AMP ir signalizuoja per branduolio faktorių - KB, kad moduliuotų ląstelių augimą. 38 Šių 12 genų, koduojančių FBHH Ok, ir nesusijusių normalių asmenų, koduojančio regiono ir intronų bei egzono ribų DNR sekos analizė nenustatė jokių anomalijų. Be to, RT-PGR pašalino bet kokius susiuvimo anomalijas, tuo parodydama, kad šie genai greičiausiai nebuvo atsakingi už FBHH Ok .

Pilno dydžio lentelė

Diskusija

Mūsų lokalizavimas FBHH3 gene į <10 cM sritį tarp D19S112 ir rs245111 skatina šio kalcio homeostazės reguliatoriaus paiešką. <10 cM intervalas, kuriame yra FBHH3, yra 4, 1 Mbp ir jame yra 159 genai. 21, 22, 23 Šis didelis genų skaičius atitinka 19 chromosomą, kurios genų tankis yra didesnis nei bet kurios kitos žmogaus chromosomos. 21 FBHH3 genas galbūt koduoja kitą CaSR arba tarpininką CaSR kelyje. Ataskaitoje apie keturis Gprc2a-rs, esančius pelės sinteniniame regione 7, 26 chromosomoje, teigiama, kad tai buvo tikėtini FBHH3 genai. Tačiau atlikus BLAST analizę apie žmogaus 4, 1 Mb kritinę sritį paaiškėjo, kad joje nebuvo nė vieno iš šių keturių Gprc2a-rs . Šių keturių Gprc2a-rs nebuvimas žmogaus 19q13 chromosomoje buvo paaiškintas lyginamąja žmogaus ir pelės sinteninių sričių genomo analize. Tai atskleidė, kad FBHH3 kandidato intervalas 19q13 chromosomoje yra regione, kuriame evoliucijos metu buvo atliktos chromosomų pertvarkos po primatų ir graužikų rūšių skirtumų. Iš 39, 3 Mb pelės srities žmogaus iš viso buvo išsaugota 27, 7 Mb, apimanti 2, 6 Mb telomerinį ir 25, 1 Mb centromerinį regioną (3 pav.). Tačiau pelės, 11, 6 Mb, srityje žmogaus nebuvo, o šiame regione buvo keturi Gprc2a-rs genai kartu su 31 kitu genu, kurių nėra žmoguje. Be to, yra žinoma, kad žmogaus 19 chromosomos didžiausias lūžio taško tankis, palyginti su kitomis žmogaus chromosomomis, 39 ir ryškus graužikų molekulių skirtumas gali paaiškinti su Casru susijusių sekų praradimą iš žmogaus genomo evoliucijos metu. Gprc2a-rs genų nebuvimas kritiniame FBHH3 intervale leido mums apsvarstyti galimą kitų mediatorių įsitraukimą į CaSR kelią. CaSR kelias, kuris prasideda nuo ligandų jungimosi per CaSR, apima nuo G-baltymų priklausomą PLC aktyvumo stimuliavimą, kuris sukelia IP 3 kaupimąsi ir greitą [Ca 2+ ] i išsiskyrimą iš viduląstelinių atsargų, po kurio eina [Ca 2+ ] o . Tarpininkai tarp CaSR aktyvacijos, [Ca 2+ ] i padidėjimo ir fiziologinio atsako, kai sumažėja PTH sekrecija iš prieskydinių ląstelių ir sumažėja inkstų kanalėlių kalcio reabsorbcija, yra susiję su GTP jungiančiais baltymais. ir kalcį surišantys baltymai, kurie gali būti nuo kalcio priklausomi fermentai arba nuo kalcio priklausomi moduliuojantys baltymai, ir ciklinio AMP bei MAP kinazės kaskados pokyčiai. Duomenų bazėse atlikus 4, 1 Mb intervalo, kuriame yra FBHH3, 19q13 chromosomoje, nustatyta 12 FBHH3 genų kandidatų, kurie buvo laikomi GPCR tarpininkaujamo signalo perdavimo elementais ir kurie taip pat buvo išreikšti inkstuose ir (arba) prieskydinių liaukų tarpe (2 lentelė). DNR sekos anomalijų nebuvimas FBHH3 turinčiam asmeniui parodė, kad šie 12 genų greičiausiai nedalyvaus šio sutrikimo etiologijoje. Taigi reikia apsvarstyti ir panašiai išanalizuoti kitus genus kandidatus.

Apibendrinant galima pasakyti, kad mūsų rezultatai, nustatę FBHH3 <10 cM regione, kurio dydis yra 4, 1 Mbp, žmogaus chromosomoje 19q13, 21, 22, 23, dar labiau nubrėžė šio kalcio homeostazės sutrikimo intervalą. Be to, atlikdami lyginamąją analizę parodėme, kad evoliucijos metu šiame regione buvo atlikti sudėtingi pertvarkymai, apimantys dviejų konservuotų regionų inversiją ir 11, 6 Mb srities, kurioje yra 35 pelių genai, įskaitant keturis Gprc2a-rs genus, trynimą .

Informacija apie elektroninę duomenų bazę

Šiame straipsnyje pateikiami duomenų prieigos numeriai ir URL yra šie: Žmogaus genomo žemėlapių peržiūros priemonė, „36.3“ versija: //www.ncbi.nlm.nih.gov/mapview/(GenBank, //www.ncbi.nlm.nih.gov/ Internetas / „GenBank“ (žmogaus 19 chromosomos žemėlapiui); ENTREZ SNP duomenų bazė: //www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?db=snp; „ENTREZ UniSTS“ duomenų bazė //www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?db=unists; BLAST: //blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi; Internetinis mendelių paveldėjimas žmoguje (OMIM), //www.ncbi.nlm.nih.gov/omim (skirtas FBH (MIM Nr. 145980), FBH1 (MIM Nr. 145980), FBH2 (MIM% 145981), FBH3 (MIM % 600740).