Dokozaheksaeno rūgšties poveikis didelio laidumo ca2 + suaktyvintiems k + ir nuo įtampos priklausomiems k + kanalams žiurkių vainikinių arterijų lygiųjų raumenų ląstelėse | acta pharmaologica sinica

Dokozaheksaeno rūgšties poveikis didelio laidumo ca2 + suaktyvintiems k + ir nuo įtampos priklausomiems k + kanalams žiurkių vainikinių arterijų lygiųjų raumenų ląstelėse | acta pharmaologica sinica

Anonim

Anotacija

Tikslas:

Ištirti dokozaheksaeno rūgšties (DHA) poveikį didelio laidumo Ca 2+ aktyvuotiems K + (BK Ca ) kanalams ir nuo įtampos priklausomiems K + (K V ) kanalams žiurkių vainikinių arterijų lygiųjų raumenų ląstelėse (CASMC).

Metodai:

Žiurkių CASMC buvo išskirtos fermento skaidymo metodu. BK Ca ir K V srovės atskiruose CASMC buvo užfiksuotos patch-clamp metodu visos ląstelės konfigūracijoje kambario temperatūroje. DHA poveikis BK Ca ir K V kanalams buvo stebimas, kai jis buvo naudojamas esant 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 ir 80 μmol / L.

Rezultatai:

Kai DHA koncentracija buvo didesnė kaip 10 μmol / L, BK Ca srovės padidėjo priklausomai nuo dozės. Esant bandymo potencialui +80 mV, 6, 1% ± 0, 3%, 76, 5% ± 3, 8%, 120, 6% ± 5, 5%, 248, 0% ± 12, 3%, 348, 7% ± 17, 3%, 374, 2% ± 18, 7%, 432, 2% ± 21, 6%. ir 443, 1% ± 22, 1% BK Ca srovių buvo padidintos atitinkamai esant minėtoms koncentracijoms. Pusiau efektyvi DHA koncentracija (EC50) BK Ca srovėse buvo 37, 53 ± 1, 65 μmol / L. Kai DHA koncentracija buvo didesnė kaip 20 μmol / L, didėjančios DHA koncentracijos K V sroves palaipsniui blokavo. Esant bandymo potencialui +50 mV, 0, 40% ± 0, 02%, 1, 37% ± 0, 06%, 11, 80% ± 0, 59%, 26, 50% ± 1, 75%, 56, 50% ± 2, 89%, 73, 30% ± 3, 66%, 79, 70% ± 3, 94%. ir 78, 1% ± 3, 91% K V srovių buvo užblokuotos atitinkamai esant skirtingoms aukščiau nurodytoms koncentracijoms. DHA EC 50 K V srovėse buvo 44, 20 ± 0, 63 μmol / L.

Išvada:

DHA gali suaktyvinti BK Ca kanalus ir blokuoti K V kanalus žiurkių CASMC, o BK Ca kanalų DHA EC50 yra mažesnė nei K V kanalų; šie radiniai rodo, kad DHA vazorelaksacinis poveikis kraujagyslių lygiųjų raumenų ląstelėms daugiausia susijęs su jo aktyvuotais BK Ca kanalais.

Įvadas

ω-3 polinesočiosios riebalų rūgštys (ω-3 PUFA) daugiausia susideda iš dokozaheksaeno rūgšties (DHA) ir eikozapentaeno rūgšties (EPA). Pastaruoju metu daugiau dėmesio buvo skiriama teigiamam ω-3 PUFA poveikiui mažinant širdies ir kraujagyslių ligų riziką, ypač kalbant apie kraujagyslių išsiplėtimą, vainikinių arterijų kraujotakos gerinimą, antiaritmiją, ligų prevenciją, kraujospūdžio sumažėjimą ir kt. parametrai 1, 2 . Tačiau dauguma aukščiau paminėtų tyrimų buvo atlikti klinikinėje praktikoje, o molekuliniai mechanizmai, kuriais grindžiamas ω-3 PUFA kardioprotekcinis poveikis, nėra visiškai suprantami. Tyrimai parodė, kad dietiniu DHA gydomoms žiurkėms, kurios serga savaime hipertenzija, sumažėja kraujospūdis ir sumažėja angiotenzino II sukeliamas kraujagyslių susiaurėjimas. Tačiau joniniai mechanizmai, sukeliantys šį poveikį, išlieka prieštaringi 3, 4 .

Buvo pranešta, kad kraujagyslių lygiųjų raumenų ląstelėse (VSMC) yra bent keturi kalio kanalų tipai: kalcio suaktyvintas kalio kanalas (K Ca ), nuo įtampos priklausomas kalio kanalas (K V ), ATP jautrus kalis. kanalas (K ATP ) ir vidinis lygintuvo kalio kanalas (K ir ). Šie kanalai vaidina svarbų vaidmenį atliekant ląstelių membranų repolarizaciją, palaikomojo potencialo palaikymą, ląstelių jaudrumą, koreguojant VSMC susitraukimus ir relaksaciją. Kanalai taip pat turi didelę įtaką kraujagyslių tonusui. K V kanalai yra plačiai paplitę VSMC, ir jie reguliuoja VSMC susitraukimus ir atsipalaidavimą per poveikį membranos potencialui ir įtampos nustatytą Ca 2+ kanalų aktyvumą 5 . „BK Ca“ kanalų gausiausia VSMC. Dėl didelio laidumo ir didelio tankio VSMC BK Ca kanalai yra labai svarbūs kontroliuojant ramybės membranos potencialą ir kraujagyslių tonusą 6, 7, 8 . Buvo pranešta, kad arachidono rūgšties (AA) kelias ir citochromo P450 (CYP450) metabolizmo DHA metabolizatorius yra stiprūs kraujagysles plečiantys vaistai, tiesiogiai aktyvuojantys BK Ca kanalus žiurkės CASMC 9 . Svarbiausia, kad BK Ca kanalas buvo jautresnis n-3 eposidui nei n-6 eposidui. Taigi žinoma, kad CYP450 DHA metabolitai yra kol kas pripažinti stipriausi kraujagyslių BK Ca kanalų aktyvatoriai ir kraujagysles plečiantys vaistai. Taip pat įrodyta, kad DHA poveikis K v kanalams yra prieštaringas įvairių rūšių ląstelėse, įskaitant skilvelių miocitus, neuronus ir kraujagyslių lygiųjų raumenų ląsteles (VSMC) 10, 11 . Šiame tyrime mes ištyrėme, ar DHA turėjo tiesioginį poveikį BK Ca kanalams ar kitiems kraujagyslių K + kanalams. Mes ištyrėme DHA poveikį BK Ca kanalams ir nuo įtampos priklausomiems K + (K V ) kanalams iš šviežiai išskirtų žiurkių CASMC, naudodamiesi visos ląstelės patch-clamp įrašais, kad ištirtume DHA sukeltos kraujagyslių išsiplėtimo mechanizmą.

medžiagos ir metodai

Pagrindiniai eksperimentiniai instrumentai

Prie tų instrumentų buvo „MultiClamp 700B“ pleistrinis spaustuko stiprintuvas („Axon Instruments“, JAV), D / A ir A / D keitikliai („DigiData 1322“, „Axon Instruments“, JAV), „Pclamp9.0“ pulso programinė įranga („Axon Instruments“, JAV), MP-285 motorizuotas mikromanipuliatorius. („Sutter Instruments“, JAV), IX71 apverstą mikroskopą („Olympus“, Japonija), „SA-OLY / 2“ ir „DH-35“ indų šildytuvą („Warner Instruments“, JAV) ir „P-97“ mikropipetės traukiklį („Sutter Instruments“, JAV).

Reagentai, tirpalai ir vaistai

Tripsino inhibitorius (II-S tipas) buvo iš Sigma-Aldrich; papaino ir ditiotreitolio buvo iš „Biosharp“ (Korėja); kolagenazė buvo iš Worthington Biochemicals. Buferiniame tirpale buvo (, 0 mmol / l) 145, 0 NaCl, 4, 0 KCl, 0, 05 CaCl2, 1, 0 MgCl2, 10, 0 HEPES ir 10, 0 gliukozės, sureguliuotos iki pH 7, 2 NaOH. Norint užregistruoti BK Ca sroves, pipetės tirpale (mmol / l) buvo 140 KCl, 0, 5 MgCl2, 5, 0 Na2 ATP, 0, 5 Na2 GTP, 10 HEPES ir 1, 0 EGTA, esant pH 7, 2. Buvo pridėta CaCl2, kad gautų 1, 0 μmol / l laisvo Ca 2+, o išorinis tirpalas buvo buferinis tirpalas. K V srovei registruoti pipetės tirpale (mmol / l) buvo 110 KCl, 30 KOH, 10 HEPES, 10 EGTA, 1 MgCl2, 1 CaCl2, 3 Na2 ATP ir 0, 5 GTP, sureguliuotas iki pH. 7.2 su KOH. Siekiant sumažinti K ATP kanalų aktyvumą, buvo naudojama aukšta ATP koncentracija (3, 0 mmol / L). Laisvas [Ca 2+ ] buvo 20 nmol / L, apskaičiuotas naudojant „Maxchelator“ programą; išoriniame tirpale buvo (mmol / l) 134 NaCl, 6 KCl, 1 MgCl2, 0, 1 CaCl2, 10 HEPES ir 10 gliukozės, sureguliuota iki 7, 4 pH NaOH. Siekiant sumažinti BK Ca kanalų aktyvumą, išoriniai Ca 2+ lygiai buvo sumažinti iki 100 nmol / L, kad būtų sumažintas Ca 2+ antplūdis. Intraceliulinis Ca 2+ buferinis tirpalas buvo žemas (20 nmol / l), naudojant EGTA. DHA buvo ištirpintas absoliučiame etanolyje kaip 50 mmol / l pradinis tirpalas, apsaugotas nuo šviesos ir laikomas -20 ° C temperatūroje. Eksperimento dieną šių pradinių tirpalų porcijos buvo dedamos į vonios tirpalą, kad būtų gautos norimos galutinės koncentracijos.

CVSMC izoliacija

Sveikų abiejų lyčių „Sprague-Dawley“ žiurkės, kurių amžius 8–12 savaičių ir sveria maždaug 200 g, buvo pateiktos iš Soochow universiteto (Suzhou, Kinija) eksperimentinių gyvūnų centro. Visi tyrimai atitiko laboratorinių gyvūnų priežiūros ir naudojimo vadovą, kurį išleido KLR Nacionalinis sveikatos departamentas. Gyvūnai buvo anestezuojami pentobarbitaliniu natrio tirpalu į pilvaplėvės ertmę (50 mg / kg, ip), širdis buvo greitai pašalinta iš krūtinės ląstos ir supilta į buferinį tirpalą. Mažų arterijų CVSMC buvo išskirtos, kaip aprašyta anksčiau, 12, 13 . Trumpai tariant, po išskyrimo mikroskopu, antrinės ir tretinės vainikinių arterijų šakos buvo inkubuojamos 37 ° C temperatūroje 10 minučių 1, 0 ml buferiniame tirpale, kuriame yra 0, 1% galvijų serumo albumino. Iš pradžių indai fermentuojami 10 minučių 37 ° C temperatūroje suardomi 1, 0 ml šviežio buferinio tirpalo, kuriame yra 1, 5 mg papaino ir 1, 0 mg ditiotreitolio. Indai dar 10 minučių suardomi 37 ° C temperatūroje 1, 0 ml šviežio buferinio tirpalo, kuriame yra 1, 0 mg kolagenazės ir 1, 0 mg tripsino inhibitoriaus. Siekiant pašalinti egzogeninius fermentus, kiekvienas indas tris kartus perpilamas į 1, 0 ml šviežio buferinio tirpalo ir švelniai sutrinamas su ugnimi nušlifuoto stiklo pipete iki visiško atsiribojimo. Gauta lygiųjų raumenų ląstelių suspensija buvo laikoma 4 ° C temperatūroje ir panaudota per 8 valandas.

BK Ca ir K V srovės įrašymo ir kanalo kinetiniai parametrai

BK Ca ir K V srovės atskiruose CVSMC buvo užfiksuotos naudojant „patch-clamp“ metodą pagal anksčiau aprašytą metodą 14, 15, 16 . Trumpai tariant, atskiri CVSMC buvo dedami į 1, 0 ml kamerą apversto mikroskopo scenoje ir perfuzuojami išoriniu tirpalu. Pipečių pipetėms gaminti buvo naudojami borosilikatinio stiklo kapiliarai. Užpildžius vidiniu tirpalu, kiekvieno elektrodo smaigalio varža buvo nuo 4 iki 10 MΩ, o tipinė sandariklio varža buvo didesnė kaip 10 GΩ. BK Ca srovės buvo registruojamos naudojant „MultiClamp 700B“ patch spaustuko stiprintuvą. Įtampos gnybtų impulsai buvo generuojami per „IBM“ suderinamą kompiuterį, prijungtą prie „DigiData 1322 D / A“ ir „A / D“ keitiklio. Duomenų kaupimas ir analizė buvo atlikti naudojant „pCLAMP9.0“ programinę įrangą. DHA įvairių koncentracijų (10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 ir 80 μmol / L) koncentracijų BK Ca srovėms buvo matuojamas iškviečiant BK Ca sroves esant 1 μmol / l citoplazmos neturinčiai Ca. 2+ . Atsakymai buvo matuojami nuo –60 mV laikymo potencialo iki +80 mV bandymo potencialo, esant 10 mV žingsniui 400 ms, ir jie buvo kartojami 10 sekundžių intervalais. Siekiant pašalinti K V srovės užterštumą, išoriniame tirpale buvo 3 mmol / L 4-AP, K v kanalų blokatorius. K V srovės buvo generuojamos palaipsniui 10 mV depoliarizuojančiais impulsais (trukmė - 400 ms, 10 s intervalai) nuo laikymo potencialo nuo –60 mV iki +50 mV ląstelėse, dializuojamose 100 nmol / L jonizuotu Ca 2+ . Buvo išmatuotas DHA poveikis K V kanalo srovėms aukščiau išvardytose koncentracijose. Be to, išoriniame tirpale buvo 100 nmol / l iberiotoksino (IBTX), BK Ca kanalų blokatoriaus, kuris blokavo BK Ca kanalo veiklą. Srovės buvo normalizuotos pagal ląstelių talpą ir išreikštos pA / pF. Visi eksperimentai buvo atlikti kambario temperatūroje (21–23 ° C).

Statistinė analizė

Nuolatiniai kintamieji išreiškiami kaip vidurkis ± standartinis nuokrypis. Statistinei analizei buvo naudojamas SPSS11.5 (Čikaga, Ilinojus, JAV). Palyginimai tarp grupių buvo atlikti analizuojant dispersijos (ANOVA) su mažiausiai reikšmingu skirtumų kontrastu. Atskirų grupių kontroliniai ir vaisto duomenys buvo lyginami, naudojant porinius bandymus. P <0, 05 buvo laikomas reikšmingu. EC 50 apskaičiuoti buvo naudojama „OriginPro7.5“ programinė įranga („OriginLab“, JAV).

Rezultatai

DHA poveikis BK Ca srovėms

(1) Poveikis BK Ca srovėms ir smailėms srovėms: esant bandymo potencialui +80 mV, stabili didžiausia srovė buvo 513, 5 ± 101.96 pA, o srovės tankis - 48.9 ± 2.45 pA / pF ( n = 10). Kai DHA buvo naudojama 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 ir 80 μmol / L, BK Ca srovė padidėjo 6, 1% ± 0, 3%, 76, 5% ± 3, 8%, 120, 6% ± 5, 5%, 248, 0%. Pastebėta atitinkamai ± 12, 3%, 348, 7% ± 17, 3%, 374, 2% ± 18, 7%, 432, 2% ± 21, 6% ir 443, 1% ± 22, 1% ( P <0, 05, n = 10). 1 paveiksle parodyti srovės pėdsakai, kuriuos sukelia depoliarizacija nuo –60 mV laikymo potencialo (HP) iki +80 mV bandymo potencialo esant skirtingoms DHA koncentracijoms. BK Ca srovės EC50, apskaičiuota pagal kreivę, atitinkančią srovių koncentraciją ir procentinį padidėjimą, buvo 37, 53 ± 1, 65 μmol / L (2 paveikslas). (2) Poveikis BK Ca srovės srovės įtampos ( I - V ) kreivėms: Kai DHA buvo naudojama esant 20, 40, 60 ir 80 μmol / L, BK Ca srovės ir tankiai pamažu didėjo didėjant DHA koncentracijai. I - V kreivės pasislinko aukštyn (3 paveikslas).

Image

BK Ca srovių padidėjimas esant skirtingoms DHA koncentracijoms. A, B, C, D ir E yra DHA atitinkamai 0, 20, 40, 60 ir 80 μmol / L. Išoriniame tirpale buvo 4-AP 3 mmol / L, kad užblokuotų K V kanalo veiklą.

Visas dydis

Image

BK Ca srovių procentas padidėjo esant skirtingoms DHA koncentracijoms.

Visas dydis

Image

BK Ca srovių I – V kreivės esant skirtingoms DHA koncentracijoms ir bandymo galimybėms.

Visas dydis

DHA poveikis K V srovėms

(1) Poveikis K V ir maksimalioms srovėms: esant bandymo potencialui +50 mV, stabili didžiausia srovė buvo 460, 95 ± 73, 01 pA, o srovės tankis buvo 43, 9 ± 2, 32 pA / pF ( n = 10). Kai DHA buvo naudojama esant 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 ir 80 μmol / L, K V srovės buvo slopinamos 0, 40% ± 0, 02%, 1, 37% ± 0, 06%, 11, 80% ± 0, 59%, 26, 50. % ± 1, 75%, 56, 50% ± 2, 89%, 73, 30% ± 3, 66%, 79, 70% ± 3, 94% ir 78, 10% ± 3, 91%, atitinkamai ( P <0, 05, n = 10). 4 paveiksle pavaizduoti dabartiniai pėdsakai, kuriuos sukelia depoliarizacija nuo -60 mV laikymo potencialo iki +50 mV bandymo potencialo esant skirtingoms DHA koncentracijoms. DHA EC 50 K V srovėse buvo 44, 20 ± 0, 63 μmol / L (5 paveikslas). (2) Poveikis K V srovių I – V kreivėms: kai DHA buvo naudojama esant 20, 40, 60 ir 80 μmol / L koncentracijai, K V srovės ir srovės tankis pamažu mažėjo didėjant DHA koncentracijai. I – V kreivės pasislinko žemyn (6 paveikslas).

Image

K V srovių sumažėjimas esant skirtingoms DHA koncentracijoms. A, B, C, D ir E yra DHA atitinkamai 0, 20, 40, 60 ir 80 μmol / L. Išoriniame tirpale buvo IBTX 100 nmol / L, kad užblokuotų BK Ca kanalo veiklą.

Visas dydis

Image

K V srovių procentai sumažėjo esant skirtingoms DHA koncentracijoms.

Visas dydis

Image

K – V srovių I – V kreivės esant skirtingoms DHA koncentracijoms ir bandymo galimybėms.

Visas dydis

Diskusija

Įvairių rūšių kalio kanalai VSMC vaidina svarbų vaidmenį reguliuojant membranos potencialą ir kraujagyslių tonusą. Iš šių kalio kanalų BKM kanalai ir K V kanalai yra plačiai paplitę VSMC. Visų pirma, BK Ca kanalai yra labiausiai išreikšti kanalai VSMC. BK Ca kanalai sudaryti iš poras sudarančio α-subvieneto ir reguliuojančio β-subvieneto. Dėl tvirto laidumo (200–250 pS) ir didelio tankio (1–4 kanalų / μm 2 ) VSMC, BK Ca kanalų aktyvumas yra pagrindinis veiksnys, padedantis kontroliuoti ramybės būsenos membranos potencialą ir kraujagyslių tonusą 17, 18 . BK Ca kanalus galima suaktyvinti padidinus citozolinių Ca 2+ koncentraciją ([Ca 2+ ] i ) arba depoliarizuojant ląstelių membraną 19, 20 . BK Ca kanalų aktyvinimas repoliarizuoja ląstelės membranos potencialą ir skatina įtampos aktyvuotų Ca 2+ kanalų (VACC) uždarymą, priešingai nei VACC vaidmuo kraujagyslių susiaurėjime. Todėl BK Ca kanalai yra pagrindiniai kanalai, reguliuojant kraujagyslių tonusą VSMC. Įdomu tai, kad BK Ca kanalai nėra išreikšti kardiomiocitais 21 . K V kanalus taip pat sudaro poras formuojantis α-subvienetas ir reguliuojantis β-subvienetas. Iki šiol pripažinta daugiau nei 30 genų, koduojančių kelis K V α-subvienetų pošeimius, ir kiekvienas α-subvienetas yra susietas su pagalbiniais β-subvienetais, kurie daro įtaką kanalo charakteristikoms ir modifikuoja vidines α-subvienetų savybes 22, 23 . Tyrimai parodė, kad genai K v 1, 2, K v 1, 3, K v 1, 4, K v 1, 5, K v 4, 1 ir K v 4, 2 yra ekspresuojami žiurkių VSMC, taip pat žiurkių skilvelių miocituose. Žiurkės vainikinės arterijos K v 1.2 ir K v 1.5 išraiška buvo nustatyta žiurkių CASMC 24, 25, 26 .

VSMC taip pat aptiktas platus K V kanalo pasiskirstymas. VSMC membranos potencialo depoliarizavimas sukelia Ca 2+ antplūdį per L tipo Ca 2+ kanalus ir suaktyvina sutraukiančiąsias mašinas. Šie pokyčiai leidžia atidaryti K V kanalus ir leisti K + ištekėjimą, sukeldami repolarizaciją ir atitinkamai grįždami į ramybės membranos potencialą. Visi šie duomenys rodo, kad pagrindinė K V kanalų funkcija yra apriboti membranų depoliarizaciją ir palaikyti ramybės būseną, 22, 27 .

Riebalų rūgštys, ypač ω-3 PUFA, yra vienas svarbus širdies energijos šaltinis. Jie daro svarbų poveikį kardiomiocitų elektrofiziologijai ir metabolizmui. Buvo pranešta, kad didelis diet-3 PUFA suvartojimas per dieną (daugiau nei 4, 0 ga. Per dieną) yra susijęs su palankiais fiziologiniais pokyčiais, įskaitant trigliceridų lygio sumažėjimą, antiaritminius veiksmus, antitrombozinį poveikį, kraujospūdžio sumažėjimą ir imuninės funkcijos stiprinimas; kartu šie pokyčiai gali sumažinti širdies, kraujagyslių ligų riziką 2, 28, 29 . Nors kai kurie klinikiniai tyrimai paaiškino, kad DHA lengvai kaupiasi širdies audiniuose, skatina širdies vainikinių arterijų išsiplėtimą ir padidina vainikinių arterijų kraujotaką 30, šio teigiamo DHA poveikio širdies ir kraujagyslių ligoms išvengti mechanizmai vis dar nėra visiškai išaiškinti. aišku. Norėdami išsiaiškinti mechanizmus, kuriais DHA veikia kraujagyslių išsiplėtimą, mes ištyrėme DHA poveikį BK Ca ir K V kanalams žiurkių CASMC, naudodami visos ląstelės pleistro spaustuko metodiką.

Mūsų rezultatai parodė, kad DHA, kai koncentracija didesnė kaip 10 μmol / L, suaktyvina BK Ca kanalus, o BK Ca srovės padidėjo padidėjus DHA koncentracijai. Tai rodo, kad DHA turi aktyvinantį poveikį BK Ca kanalams, o tai lemia K + ištekėjimą, Ca 2+ kanalų uždarymą, Ca 2+ antplūdžio sumažėjimą, ląstelių membranos potencialo repolarizacijos paspartėjimą ir kraujagyslių išsiplėtimą. Dar įdomiau, kad mūsų rezultatai parodė, kad DHA K V kanaluose daro visiškai priešingą poveikį. Kai DHA koncentracija buvo didesnė kaip 20 μmol / L, didėjančios DHA koncentracijos K V sroves palaipsniui blokavo; šis radinys rodo, kad DHA gali slopinti K V kanalus. Teoriškai K V kanalų slopinimas gali blokuoti K + ištekėjimą ir ląstelės membranos potencialo repolarizaciją, o tai sukelia kraujagyslių susiaurėjimą. Tačiau daugelis tyrimų parodė, kad DHA sukelia kraujagyslių išsiplėtimą 6, 8, 12, 30, 31 . Kadangi 1) BK Ca kanalų tankis yra daug didesnis nei K V kanalų VSMC ir 2) DHA EC50 yra mažesnis nei BK V kanaluose, todėl manome, kad padidėjęs K + kiekis ištekėjimas per aktyvuotus BK Ca kanalus yra daug didesnis už sumažintą K + ištekėjimo kiekį per slopinamus K V kanalus tam tikroje DHA koncentracijoje. Todėl darome išvadą, kad DHA poveikis kraujagyslių išsiplėtimui iš esmės pasiekiamas suaktyvinant BK Ca kanalus, todėl BK Ca kanalai vaidina pagrindinį vaidmenį plečiant kraujagysles ir gerinant vainikinių arterijų kraujotaką.

Jūs ir kt. 12 buvo tiriama dokozaheksaenoato ir jo penkių citochromo P-450 epoksigenazės metabolitų, žinomų kaip epoksididozapentaenoaatai ​​(EDP), potencija plečiant kiaulių ir žiurkių vainikinių arterijas. Jie nustatė, kad, palyginti su 13, 14-EDP, dokozaheksaenoatas (DHA) silpnai suaktyvino BK Ca kanalus įrašydamas vieną kanalą. Tačiau šie autoriai vartojo mažas DHA koncentracijas (mažesnes nei 10 μmol / L). Kitas tyrimas 31 parodė, kad DHA gali žymiai išplėsti aortos žiedus, šviežiai išskirtus iš spontaniškai hipertenzinių žiurkių, moduliuodami L tipo Ca 2+ kanalus ir K ATP kanalus. Kadangi tokiomis sąlygomis nėra metabolinės aplinkos, nėra DHA metabolitų; todėl DHA gali turėti tiesioginį poveikį K + ir L tipo Ca 2+ kanalams žiurkių VSMC. Mūsų tyrimo rezultatai parodė, kad DHA, esant didesnei nei 10 μmol / L koncentracijai, tiesiogiai ir ryškiai suaktyvina BK Ca kanalus. Atsižvelgiant į DHA poveikį K V kanalams, pranešta apie skirtingus rezultatus. Wu ir kt. 11 parodė, kad į išorę nukreiptų K + ( I K V ) srovių stiprinimas ir vidinis I K 1 srovių ištaisymas gali būti susijęs su DHA sukeltu vasorelaksacija žmogaus vainikinių arterijų lygiuosiuose raumenyse, ir Poling et al. 10 pranešė, kad DHA slopina K V kanalus neuronuose. Tyrimai taip pat parodė, kad DHA slopina K V kanalus skilvelių miocituose, kuriuose nustatyta K V 1.1 – K V 1.5 ir K V 4.1 – K V 4.2 raiška 32, 33 . Mūsų tyrimai parodė, kad DHA, kurio koncentracija didesnė kaip 20 μmol / L, labai slopina K V kanalus žiurkių CASMC.

Tyrimai parodė, kad aktyvinant adenililciklazę, įjungiami kelių rūšių kraujagyslių K + kanalai, įskaitant BK Ca kanalus ir K V kanalus. Dėl šios aktyvacijos padidėja tarpląstelinė cAMP koncentracija, kuri suaktyvina nuo cAMP priklausomą baltymo kinazę (PKA). PKG suaktyvinimas taip pat gali suaktyvinti kraujagyslių K + kanalus 34 . Be to, K + kanalų slopinimas VSMC yra inicijuojamas aktyvuojant baltymų kinazę C (PKC) 35, 36 . Tačiau molekuliniai BK Ca kanalo aktyvavimo mechanizmai ir K V kanalo slopinimas DHA išlieka neaiškūs.

Mūsų eksperimentuose DHA tiesiogiai suaktyvino BK Ca kanalus, nurodydamas, kad DHA gali jungtis su BK Ca kanalų α poromis ar β reguliavimo elementais arba būti šalia jų ir sukelti BK Ca kanalų konformacinius pokyčius. Būsimus tyrimus reikia atlikti dėl molekulinių mechanizmų, kuriais aktyvuojami BK Ca kanalai ir K V kanalai, kuriuos slopina DHA.

Kadangi vis dar nėra pranešimų apie tiesioginį DHA poveikį BK Ca ir K V kanalams žiurkių CASMC, šis tyrimas turi didelę reikšmę mechanizmų, kuriais ω-3 PUFA sukelia kraujagyslių išsiplėtimą ir kraujo sumažėjimą, tyrimui. slėgis. Tačiau mūsų tyrimai turi tam tikrų apribojimų. Pirmiausia buvo tiriamas tik DHA poveikis BK Ca ir K V kanalams, tuo tarpu DHA poveikį K ATP ir K ir kanalams reikia toliau tirti. Antra, kadangi ω-3PUFA daugiausia sudaro DHA ir EPA, reikia toliau tirti EPA poveikį BK Ca ir K V kanalams.

Autoriaus indėlis

Wen-ping JIANG sukurtas tyrimas; Li-hong LAI atliko tyrimus; Ru-xing WANG pateikė naujų analizės priemonių ir reagentų; Li-hong LAI išanalizavo duomenis ir parašė darbą.