Cyp2c9 alelių dažnis korėjiečių kalba ir jų poveikis losartano farmakokinetikai acta pharmaologica sinica

Cyp2c9 alelių dažnis korėjiečių kalba ir jų poveikis losartano farmakokinetikai acta pharmaologica sinica

Anonim

Anotacija

Tikslas:

CYP2C9 fermentas metabolizuoja daugybę kliniškai svarbių vaistų. Šio tyrimo tikslas - ištirti CYP2C9 genotipų dažnį ir pasirinktų alelių poveikį losartano farmakokinetikai didelėje Korėjos populiacijos dalyje.

Metodai:

CYP2C9 genas buvo genotipuotas 1796 sveikiems korėjiečiams. CYP2C9 aleliai ( CYP2C9 * 1, * 2, * 3 ir * 13 aleliai) buvo išmatuoti naudojant polimerazės grandininės reakcijos restrikcijos fragmento ilgio polimorfizmo (PCR-RFLP) ir tiesioginį sekos nustatymo testą. Kiekvieno CYP2C9 genotipo fermentinis aktyvumas buvo įvertintas kaip substratas naudojant losartaną.

Rezultatai:

CYP2C9 * 1, * 3 ir * 13 alelių dažnis buvo atitinkamai 0, 952 (95% pasikliautinasis intervalas 0, 945–0, 959), 0, 044 (95% PI 0, 037–0, 051) ir 0, 005 (95% PI 0, 003–0, 007). CYP2C9 * 1 / * 1, * 1 / * 3, * 1 / * 13 ir * 3 / * 3 genotipų dažnis buvo 0, 904 (95% PI 0, 890–0, 918), 0, 085 (95% PI 0, 072–0, 098), Atitinkamai 0, 009 (95% PI 0, 005–0, 013) ir 0, 001 (95% PI 0, 000–0, 002). Farmakokinetikos tyrimuose CYP2C9 * 3 / * 3 tiriamųjų losartano AUC 0 – ∞ buvo 1, 42 karto didesni nei CYP2C9 * 1 / * 1 tiriamųjų ir aktyvesnio E-3174 AUC 0 – ∞ . losartano metabolito, CYP2C9 * 3 / * 3 tiriamųjų buvo tik 12%, palyginti su CYP2C9 * 1 / * 1 tiriamųjų.

Išvada:

Rezultatai patvirtino CYP2C9 genotipų dažnį didelėje korėjiečių grupėje ir aptiko CYP2C9 * 3 / * 3 genotipą. CYP2C9 * 3 / * 3 tiriamieji metabolizuoja daug mažiau losartano į E-3174 nei CYP2C9 * 1 / * 1 tiriamieji.

Įvadas

Citochromo P450 (CYP) 2C9 fermentas oksiduoja daugelį kliniškai svarbių junginių, įskaitant vaistus, kurių terapinis indeksas yra siauras, pavyzdžiui, varfariną, tolbutamidą ir fenitoiną, taip pat kitus įprastus vaistus, tokius kaip glibenklamidas, glimepiridas, glipizidas, losartanas, irbesartanas, torsemidas ir daug priešuždegiminių vaistų 1, 2 . Fermentų, metabolizuojančių vaistus, genetiniai polimorfizmai yra pagrindiniai veiksniai, lemiantys individualios reakcijos kintamumą. Buvo pranešta apie trisdešimt penkis CYP2C9 geno alelius (//www.cypalleles.ki.se/cyp2c9.htm), o trys iš jų - CYP2C9 * 1 , * 2 ir * 3 - dažniausiai nustatomi daugumoje populiacijų. CYP2C9 * 2 aleliai yra labiausiai paplitę žalingi aleliai tarp europiečių kilmės žmonių, jų dažnis nuo 0, 080 iki 0, 191. CYP2C9 * 3 alelis yra retesnis (0, 033–0, 162) 3 . Priešingai, CYP2C9 * 2 alelis yra retas tarp Rytų Azijos 3, 4, o CYP2C9 * 3 yra labiau paplitęs nei europiečių (nuo 0, 007 iki 0, 060) 5 . Be to, Rytų Azijos populiacijose retai nustatomi CYP2C9 * 3 homozigotai 5 . CYP2C9 * 3 metabolinis aktyvumas mažiausias in vitro , o CYP2C9 * 2 - tarpinis fermento aktyvumas, CYP2C9 * 1 - didžiausias 6 . Asmenys, turintys mutantinius CYP2C9 variantus, gali tinkamai nemetabolizuoti vaistų, sukeldami toksinį poveikį vaistams. Todėl vaistų dozes reikia koreguoti atsižvelgiant į genotipą. CYP2C9 alelių dažnis įvairiose populiacijose skiriasi. Informacija yra naudinga klinikinei farmakoterapijai. CYP2C9 alelių ir genotipų dažnis Korėjos populiacijoje yra apskaičiuotas 5, 7, 8, 9, tačiau pranešti CYP2C9 * 3 dažniai turi reikšmingų neatitikimų. Taigi mes išmatuojome CYP2C9 alelio ir genotipo dažnius didelėje Korėjos kohortoje, kur aptikome CYP2C9 * 3 / * 3 genotipą ir išanalizavome CYP2C9 * 3 / * 3 genotipo poveikį losartano farmakokinetikai.

medžiagos ir metodai

Dalykai

Į šį genotipo tyrimą įtraukėme 1796 nesusijusius sveikus korėjiečių savanorius. Iš visų savanorių buvo gautas informuotas rašytinis sutikimas.

Genotipo tyrimai

Pagal periferinio kraujo leukocitus genomo DNR buvo išskirta naudojant „Wizard ® Genomic DNA Kit“ (Promega, Madisonas, WI, JAV) pagal gamintojo instrukcijas. CYP2C9 * 2, * 3 ir * 13 alelių analizė buvo atlikta naudojant polimerazės grandininės reakcijos restrikcijos fragmento ilgio polimorfizmą (PCR-RFLP), kaip aprašyta anksčiau 5 . CYP2C9 * 1 alelis buvo priskirtas nesant kitų aptinkamų alelių. Genetikai, identifikuoti PCR-RFLP, buvo patvirtinti sekos analize. CYP2C9 geno egzonai ir egzono / introno jungtys buvo amplifikuoti taip, kaip aprašyta, šiek tiek modifikuojant 5, 10 . PGR produktai buvo išgryninti naudojant PGR gryninimo rinkinį (AxyPrep ® PGR valymo rinkinį, Axygen Bioscience Inc, Union City, CA, JAV) ir sekos su ABI3730 automatiniu sekoseritoriumi (Applied Biosystems Inc, Foster City, CA, JAV). „BigDye Terminator Cycle Sequencing Ready reakcijos rinkinys“ („Applied Biosystems Inc“, Delaveras, JAV).

Farmakokinetinių tyrimų protokolas

Losartano farmakokinetikos tyrimui buvo atrinkta trylika sveikų vyrų iš Korėjos, kuriems nustatytas CYP2C9 * 1 / * 1 ( n = 12) arba CYP2C9 * 3 / * 3 ( n = 1) genotipas. Nors buvo aptikti du tiriamieji, sergantys CYP2C9 * 3 / * 3 , vienas nepateikė raštiško informuoto sutikimo. Taigi į farmakokinetikos tyrimą buvo įtrauktas tik vienas CYP2C9 * 3 / * 3 turintis asmuo.

Tiriamieji buvo nuo 20 iki 26 metų, jų kūno masės indeksai buvo nuo 21 iki 25 kg / m 2 . Visi tiriamieji buvo sveiki, kaip apibrėžta ligos istorijoje, fiziniame tyrime ir įprastiniuose laboratoriniuose tyrimuose (kraujo chemija, hematologija ir šlapimo analizė). Tiriamųjų buvo paprašyta susilaikyti nuo vaistų, kofeino, greipfrutų produktų ir alkoholinių gėrimų vartojimo bei nerūkyti mažiausiai 1 savaitę iki tyrimo laikotarpio ir jo metu. Visi tiriamieji pateikė žodinį ir rašytinį informuotą sutikimą, po to, kai jiems buvo paaiškintos eksperimentinės procedūros ir tyrimo tikslas. Tyrimo protokolą patvirtino Korėjos Sungkyunkwan universiteto Farmacijos mokyklos institucinės etikos komitetas. Visos procedūros buvo atliktos pagal Helsinkio deklaracijos dėl biomedicininių tyrimų, susijusių su žmonėmis, rekomendacijas.

Tyrimo dieną kiekvienas tiriamasis per naktį nevalgydamas vartojo 50 mg losartano kalio (Cozaar ®, MSD-Korea, Seulas, Korėja) per burną su 240 ml vandens. Tiriamieji nevalgius palaikė 4 valandas po vaisto vartojimo. Prieš ir po 0, 5, 1, 1, 5, 2, 3, 4, 6, 8, 10 ir 24 valandų veninio kraujo mėginiai (10 ml) buvo paimti į heparinizuotus mėgintuvėlius ir centrifuguoti 10 minučių 3000 aps / min greičiu. Plazma buvo atskirta ir laikoma -70 ° C temperatūroje, kol prireiktų.

Losartano ir E-3174 tyrimas plazmoje

CYP2C9 metabolizuoja losartaną į aktyvesnį metabolitą E-3174 11 . Taigi, losartano ir E-3174 koncentracijos plazmoje buvo nustatytos HPLC, naudojant fluorescencijos detektorių, kaip anksčiau buvo pranešta 12 modifikacijose. Trumpai tariant, stikliniame mėgintuvėlyje buvo sumaišyta 1, 0 ml plazmos, 150 ng valsartano (IS) ir 200 μL 1 mol / l fosforo rūgšties ir, nuolat intensyviai maišant, ekstrahuojama 7 ml metil -tret -butilo eterio (MTBE). 1 min. Po centrifugavimo (10 min. 2500 aps / min.) Organinis sluoksnis buvo perkeltas į kitą mėgintuvėlį su 200 μL 0, 05 mol / l natrio hidroksido ir intensyviai maišomas 1 min. Mėginiai vėl buvo centrifuguojami 2500 sūkių per minutę 10 minučių. Vandeninis sluoksnis buvo surinktas, o likęs MTBE pašalintas išgarinant azotą. Natrio hidroksido sluoksnis parūgštinamas 50 μL 0, 2 mol / l fosforo rūgšties ir sumaišomas. Vandeninė frakcija plaunama pridedant 6 ml n- heksano ir maišoma 1 min. Po centrifugavimo heksanas buvo išmestas, o likęs n- heksanas buvo pašalintas garinant azotą. Metanolis (150 μL) buvo įpiltas į 250 μL pakartotinai ekstrahuoto vandens fazės, o 100 μL gauto mišinio buvo įšvirkšta į HPLC sistemą. HPLC sistemą sudarė Waters Model 515 HPLC siurblys, Waters Model 717 Plus automatinis imtuvas, Waters 474 skenuojantis fluorescencinis detektorius ir kolonėlės krosnis (Waters, Milford, MA, JAV). Atskyrimai buvo atlikti 5 μm Luna CN kolonoje (4, 5 mm × 250 mm; Phenomenex, Torrance, CA, JAV). Judrioji fazė buvo 15 mmol / L fosforo rūgšties / acetonitrilo (65:35, v / ν ), sureguliuojama iki pH 3, 0, naudojant 5 mol / L natrio hidroksido, esant 1 ml / min. Nuotekos buvo aptiktos fluorescencijos būdu, sužadinant 250 nm bangoje, ir išmetamos esant 380 nm. Standartinės losartano ir E-3174 kreivės buvo tiesinės nuo 5 iki 1000 ng / ml ( r2 > 0, 999). Vidutinis losartano ir E-3174 tikslumas buvo atitinkamai 90–102% ir 96–101%. Losartano ir E-3174 variacijos koeficientai (dienos tikslumu ir dienos tikslumu) buvo atitinkamai <9% ir 10%.

Farmakokinetinė analizė

Losartano ir E-3174 farmakokinetiniai parametrai buvo apskaičiuoti nedalijamaisiais metodais iš kraujo mėginių ėmimo laiko, didžiausios koncentracijos plazmoje ( C max ) ir laiko iki C max ( t max ) pasiekimo, naudojant „BA Calc 2007“ analizės programą (KFDA, Seulas, Korėja). Plotas po kreive (AUC) koncentracijos plazmoje metu buvo apskaičiuotas naudojant tiesinę trapecijos taisyklę. Eliminacijos greičio konstanta ( k e ) buvo nustatyta atliekant plazmos koncentracijos ir laiko kreivės loginės-tiesinės dalies tiesinės regresijos analizę. AUC nuo 0 iki begalybės (AUC 0 – ∞ ) buvo apskaičiuotas kaip AUC 0 – ∞ = AUC + C t / ke ( Ct yra galutinė koncentracija plazmoje). Pusinės eliminacijos laikas ( t 1/2 ) buvo apskaičiuotas taip: t 1/2 = ln 2 / k e . Tariamasis losartano klirensas per burną (CL / F) buvo apskaičiuotas taip: CL / F = Dozė / AUC 0 – ∞ .

Statistinė analizė

Duomenys buvo sudaryti pagal genotipą ir alelių dažnį. Kiekvieno alelio dažnis nurodomas 95% pasikliovimo intervalais. Hardy-Weinbergo pusiausvyra buvo įvertinta lyginant genotipo dažnius su numatomomis vertėmis, naudojant nenumatytų atvejų lentelės χ 2 testą. Statistinis reikšmingumas buvo nustatytas atliekant test 2 testą; reikšmė buvo laikoma mažesne kaip 0, 05. Farmakokinetiniai duomenys išreiškiami kaip vidurkis ± SD.

Rezultatai

CYP2C9 alelių ir genotipų dažnis

Apskaičiuotas CYP2C9 alelių ir genotipų dažnis Korėjos populiacijoje yra apibendrintas 1 lentelėje. Genotipo dažnio pasiskirstymas reikšmingai nesiskyrė nuo Hardy-Weinberg pusiausvyros. CYP2C9 * 1 buvo labiausiai paplitęs alelis (0, 952, 95% PI: 0, 945–0, 959). Dažniausias alelio variantas buvo CYP2C9 * 3 (0, 044, 95% PI: 0, 037–0, 051). CYP2C9 * 1 / * 3 dažnis šiame tyrime buvo daugiau nei keturis kartus didesnis nei anksčiau pranešta 7 ( P <0, 001, 2 lentelė). CYP2C9 * 13 dažnis mūsų imtyje buvo 0, 005 (95% PI: 0, 003–0, 007). Buvo 1624 tiriamieji, kuriems nustatytas CYP2C9 * 1 / * 1 genotipas (0, 904, 95% PI: 0, 890–0 918), 153 - su CYP2C9 * 1 / * 3 genotipu (0, 085, 95% PI: 0, 072–0, 098), 17 - su CYP2C9 * 1 / * 13 genotipas (0, 009, 95% PI: 0, 005–0, 013) ir 2 su CYP2C9 * 3 / * 3 genotipu (0, 001, 95% PI: 0, 000–0, 002) (1 lentelė). PCR-RFLP genotipo rezultatai atitiko sekos nustatymo rezultatus (duomenys nepateikti).

Pilno dydžio lentelė

Pilno dydžio lentelė

CYP2C9 * 3 alelių dažnis mūsų Korėjos mėginyje buvo šiek tiek didesnis (nors ir nežymiai) didesnis nei Kinijos mėginiuose ir buvo žymiai didesnis nei Japonijos mėginiuose ( P <0, 01) (3 lentelė). CYP2C9 * 13 alelių dažnis mūsų mėginyje buvo šiek tiek mažesnis nei Kinijos mėginiuose ir šiek tiek didesnis nei Japonijos mėginiuose, nors šie skirtumai nebuvo reikšmingi (3 lentelė).

Pilno dydžio lentelė

Losartano farmakokinetika

Buvo išmatuoti losartano ir E-3174 farmakokinetiniai parametrai, kuriems nustatytas CYP2C9 * 3 / * 3 genotipas, retas korėjiečių genotipas (0, 1%, 1 lentelė). Šiam asmeniui losartano C max ir AUC 0 – ∞ buvo šiek tiek didesni, o CL / F buvo mažesnis nei CYP2C9 * 1 / * 1 tiriamiesiems, tačiau losartano metabolizmas į E-3174 buvo beveik visiškai užblokuotas (1 paveikslas, lentelė). 4).

Image

Losartano (A) ir E-3174 (B) koncentracijos laiko plazmoje profiliai tiriamiesiems su CYP2C9 * 1 / * 1 (n = 12, atviri apskritimai) arba CYP2C9 * 3 / * 3 ( n = 1, uždari apskritimai). sušvirkštus vienkartinę 50 mg losartano dozę, genotipai.

Visas dydis

Pilno dydžio lentelė

Diskusija

CYP2C9 katalizuoja I fazės metabolizmą maždaug 15–20% vaistų, kuriems taikoma ši reakcija. CYP2C9 aleliniai variantai CYP2C9 * 2 , CYP2C9 * 3 ir CYP2C9 * 13 koduoja fermentus, kurių CYP2C9 * 1 yra atitinkamai maždaug 10–40%, 5% –15% ir 1–12%, atitinkamai 4, 10, 29 CYP2C9 * 2 alelis yra labiausiai paplitęs alelio variantas tarp europiečių kilmės žmonių, jo dažnis yra maždaug 0, 132 4, 9, 16, 30 . Rytų Azijoje 3 CYP2C9 * 2 aleliai yra reti ( 3 lentelė). Iki šiol CYP2C9 * 2 alelis buvo aptiktas tik dviem Rytų Azijos pacientams, abu kinai, turintys CYP2C9 * 1 / * 2 genotipą 9, 16 . Savo 2154 korėjiečių mėginyje nenustatėme CYP2C9 * 2 alelio (3 lentelė).

Funkciškai CYP2C9 * 3 alelio metabolinis aktyvumas mažiausias in vitro , o CYP2C9 * 2 yra tarp CYP2C9 * 3 ir CYP2C9 * 1 6 . Europiečiams būdingas didelis CYP2C9 * 2 alelių dažnio heterogeniškumas (nuo 0, 033 iki 0, 162), tuo tarpu CYP2C9 * 3 aleliai yra retesni 6 . Anksčiau buvo pranešta, kad korėjiečių CYP2C9 * 3 dažnis yra 0, 011 7, tačiau anksčiau mes nustatėme, kad jis yra 0, 060 5 . Kadangi šie rezultatai tokie skirtingi, reikėjo atlikti papildomą tyrimą. Be to, pirmajame tyrime nenustatytas CYP2C9 * 3 dažnio skirtumas tarp Korėjos ir Japonijos mėginių, tačiau mūsų ankstesnėje ataskaitoje buvo 5 . Korėjos populiacijoje (2154 nesusiję asmenys) CYP2C9 * 3 dažnis buvo 0, 044, žymiai didesnis ( P <0, 001) nei japonų vidutinis dažnis (0, 028), tačiau panašus į kinų (0, 035). Kadangi CYP2C9 alelio ir genotipo dažnis skirtinguose tyrimuose skiriasi, didelis pavyzdys, toks kaip mūsų, turėtų atspindėti tikruosius genotipo dažnius. Neseniai atliktame tyrime, kuriame dalyvavo 295 korėjiečiai, pranešta apie CYP2C9 * 3 dažnį, panašų į nustatytą šiame tyrime 13, tačiau CYP2C9 * 13 dažnis buvo mažesnis. CYP2C9 * 13 dažnis mūsų tyrime buvo 2, 5 karto didesnis. Kadangi šio tyrimo mėginių skaičius ( n = 3592) buvo daug didesnis nei kito tyrimo ( n = 590) 13, šis tyrimas gali suteikti patikimesnės informacijos apie CYP2C9 alelių dažnį Korėjos populiacijoje.

CYP2C9 * 13 alelis pirmą kartą buvo nustatytas Kinijos mėginyje, o CYP2C9 * 3 / * 13 genotipas žymiai sumažina metabolinį aktyvumą 21 . Šiame tyrime 17 iš 1796 tiriamųjų turėjo CYP2C9 * 1 / * 13 genotipą, o CYP2C9 * 13 / * 13 ir * 3 / * 13 nerasta (1 lentelė). CYP2C9 * 13 variantas susilpnino daugelio substratų aktyvumą in vivo 20, 29, 31 ir jis buvo rastas tik Rytų Azijoje (3 lentelė). Akivaizdžiai to nėra afroamerikiečių, europiečių, ispanų ir aškenazių žydų populiacijose 32 .

Šiame tyrime du tiriamieji buvo homozigotiniai CYP2C9 * 3 / * 3 atžvilgiu , tačiau vienas asmuo nepateikė raštiško informuoto sutikimo įtraukti į farmakokinetinį tyrimą. Mes įvertinome likusio CYP2C9 * 3 / * 3 homozigoto fermentinį aktyvumą, naudodami losartaną. CYP2C9 * 3 / * 3 pacientui losartano C max (187% CYP2C9 * 1 / * 1 ) ir AUC (242% CYP2C9 * 1 / * 1 ) padidėjo, o C max (3, 6% CYP2C9 *) 1 / * 1 ) ir E-3174 AUC (11, 5% CYP2C9 * 1 / * 1 ) sumažėjo, palyginti su CYP2C9 * 1 / * 1 tiriamaisiais. CYP2C9 * 3 / * 3 tiriamųjų organizme E-3174 formavimasis iš losartano pastebimai sumažėjo, palyginti su CYP2C9 * 1 / * 1 tiriamaisiais, todėl AUC 0 – ∞ buvo maždaug 1/9 dalis nuo CYP2C9 * 1 / * 1 tiriamųjų. Šie rezultatai atitinka ankstesnę Švedijos ataskaitą 33 . Nors tiek losartanas, tiek E-3174 blokuoja angiotenzino II receptorius, E-3174 yra bent 10 kartų stipresnis nei 34 losartanas, o klinikinį losartano poveikį daugiausia lemia E-3174. Taigi losartano antihipertenzinis poveikis CYP2C9 * 3 / * 3 tiriamiesiems gali būti silpnesnis nei CYP2C9 * 1 / * 1 tiriamųjų. Todėl CYP2C9 * 3 / * 3 pacientams, sergantiems hipertenzija, gali būti naudinga vartoti kitus hipertenzinius vaistus, kurių nemetabolizuoja CYP2C9 . Ankstesniuose tyrimuose CYP2C9 * 1 / * 3 reikšmingai sumažėjo losartano pavertimas E-3174 (50–95% nuo CYP2C9 * 1 / * 1 ) 20, 33, 35, 36 ir * 1 / * 13. genotipai (62 proc. CYP2C9 * 1 / * 1 ) 20 . Kadangi E-3174 AUC 0 – ∞ reikšmingai nesiskyrė tarp CYP2C9 * 1 / * 1 tiriamųjų ir CYP2C9 * 3 ar * 13 heterozigotų, šie genotipai klinikinio losartano poveikio neturėjo. Kadangi CYP2C9 * 3 / * 3 genotipas beveik neturi fermento aktyvumo, varfarino, fenitoino ir geriamųjų hipoglikeminių agentų vartojimas gali būti pavojingas 1, 2, 6 .

Apibendrinant galima teigti, kad Korėjos populiacijoje CYP2C9 * 3 dažnis buvo 0, 044 (95% PI 0, 037–0, 051), o CYP2C9 * 13 dažnis buvo 0, 005 (95% PI 0, 003–0, 007). Dideliame Korėjos pavyzdyje rasta tik keturi genotipai ( CYP2C9 * 1 / * 1 , * 1 / * 3, * 1 / * 13 ir * 3 / * 3 ). CYP2C9 * 3 / * 3 tiriamieji iš losartano sudarė žymiai mažiau E-3174 nei CYP2C9 * 1 / * 1 tiriamieji, o tai rodo, kad šio genotipo antihipertenzinis losartano poveikis stipriai sumažėjo.