Gliukokortikoidai sukelia ilgalaikį poveikį nervų kamieninėms ląstelėms, sukeldami su senėjimu susijusius pokyčius | ląstelių mirtis ir liga

Gliukokortikoidai sukelia ilgalaikį poveikį nervų kamieninėms ląstelėms, sukeldami su senėjimu susijusius pokyčius | ląstelių mirtis ir liga

Anonim

Dalykai

  • Epigenetika
  • Neuroninės kamieninės ląstelės
  • Neuromokslas
  • Senescencija

Anotacija

Intrauterinės programos pakitimai, atsirandantys kritiniais vystymosi laikotarpiais, turi neigiamą poveikį viso organo sistemoms ar atskiroms audinių funkcijoms vėlesniame gyvenime. Šiame darbe parodyta, kad žiurkių embriono nervų kamieninės ląstelės (NSC), veikiamos sintetinio gliukokortikoido deksametazono (Dex), patiria paveldimus pokyčius, galbūt per epigenetinius mechanizmus. Dėl Dex poveikio sumažėja NSC proliferacija, nedarant poveikio išgyvenimui ar diferenciacijai ir keičiant genų, susijusių su ląstelių senėjimu ir mitochondrijų funkcijomis, raišką. Dex nuo gliukokortikoidų receptorių (GR) priklausomai nuo ląstelių ciklo padidina genų p16 ir p21 reguliavimą . Su senėjimu siejami žymekliai didelio judrumo grupė ( Hmg ) A1 ir heterochromatino baltymas 1 (HP1) taip pat yra sureguliuoti Dex paveiktose NSC, tuo tarpu Bmi1 (daugiakobio žiedo piršto onkogenas) ir mitochondrijų genai Nd3 (NADH dehidrogenazė 3) ir cititas (citochromas b). ) yra nepakankamai reguliuojami. Kartu vykstantis pasaulinio DNR metilinimo ir DNR metiltransferazių ( Dnmts ) sumažėjimas rodo epigenetinių pokyčių atsiradimą. Visos šios savybės išlieka dukterinėse NSC (niekada nebuvo tiesiogiai veikiamos Dex) ir yra susijusios su didesniu jautrumu oksidaciniam stresui, kaip rodo padidėjęs apoptozinių ląstelių žūtis, veikiant redokso ciklą reaguojančių deguonies rūšių (ROS) generatoriui. 2, 3-dimetoksi-1-naftochinonas (DMNQ). Mūsų tyrimas pateikia naujų įrodymų apie gliukokortikoidų (GC) sukeltą programavimo poveikį NSC ir palaiko mintį, kad vaisiaus endogeninių ar egzogeninių GC poveikis gali sukelti ilgalaikių padarinių, galinčių turėti įtakos neurodegeneraciniams ir (arba) neurodegeneraciniams sutrikimams.

Pagrindinis

Epidemiologiniai ir eksperimentiniai tyrimai parodė, kad intrauterininės programos pakitimai, atsirandantys kritiniais vystymosi laikotarpiais, gali turėti neigiamų pasekmių vėlesniame gyvenime. 1 Morfometrinės analizės koreliavo kai kuriuos intrauterininio augimo modelius, ypač augimo sulėtėjimą, su specifinėmis pogimdyminėmis pasekmėmis, padidindamos širdies ir kraujagyslių sistemos, metabolizmo, inkstų ir endokrininės sistemos sutrikimus. 2 Įdomu tai, kad naujausi klinikiniai tyrimai parodė ryšį tarp intrauterininio augimo sulėtėjimo ir hiperaktyvaus dėmesio sutrikimo (ADHD) 3 bei depresijos išsivystymo. 4 Hormonai, tokie kaip gliukokortikoidai (GC), vaidina svarbų vaidmenį planuojant gimdą. Vystymosi metu GC kontroliuoja vaisiaus augimą visuose audiniuose ir organuose ir turi lemiamą vaidmenį planuojant gimdą 5, savo veikimą keičiant receptorių, fermentų, jonų kanalų, pernešėjų, įvairių augimo faktorių, citoarhitektūrinių baltymų, rišančių baltymų ir tarpląstelinių signalinių kelių komponentai. Jie gali veikti tiesiogiai genuose ir (arba) netiesiogiai, darydami įtaką, pavyzdžiui, kitų hormonų biologiniam prieinamumui. 6 Daugelis prenatalinių iššūkių, žinomų kaip programavimo poveikis, buvo susiję su dideliu GC lygiu gimdoje . 1 Vaisiui padidėjęs GC lygis gali atsirasti, kai terapiniai tikslai arba kaip atsakas į stiprų motinos stresą skiriami išoriniai GK. Paprastai vaisius nuo motinos GC yra apsaugotas placentos 11 beta hidroksisteroidų dehidrogenazės 2 tipo (11 β- HSD2). Tačiau didelis motinos lygis, viršijantis placentos 11 β- HSD2 ribą, arba patologinės būklės, pažeidžiančios placentos funkcijas, gali sukelti vaisiaus GC perteklių. 5

Gerai žinoma, kad GC, nors ir yra labai svarbios prisitaikant prie streso, gali sukelti neigiamą poveikį nervų sistemai, kai jų sekretuojama daugiau. 7, 8 modeliai su gyvūnais pateikė įtikinamų įrodymų, kad vaisiaus didelis GC lygis keičia smegenų vystymąsi, sukelia nuolatinius struktūrinius ir funkcinius pokyčius ir taip pat turi įtakos vaisiaus neurogenezei. 9, 10, 11 Tam tikri suaugusiųjų smegenų regionai išlaiko neurogeninį potencialą 12, o keli tyrimai parodė, kad suaugusiojo hipokampo metu GC neigiamai veikia neurogenezę. 13, 14 Atitinkamai ankstyvo padidėjusio GC lygio poveikis, kurį sukelia prenatalinis stresas, yra ilgalaikis, todėl vėlesniame gyvenime graužikų ir nežmoginių primatų neurogenezė sumažėja. 9, 15

Ankstesniuose tyrimuose mes pastebėjome, kad prenatalinis didelio lygio sintetinio GC deksametazono (Dex) poveikis sukelia ilgalaikius žiurkių neuronų ląstelių pokyčius, kuriems būdingas padidėjęs jautrumas oksidaciniam stresui ( 16), kuriuos taip pat stebėjome suaugusiems NKS. 17 Visi duomenys rodo Dex programavimo efektą, kuris sukėlė ilgalaikius pokyčius ląstelėse, kurios niekada nebuvo tiesiogiai veikiamos. Atsižvelgiant į pagrindinį NKS vaidmenį besivystančioje ir suaugusiųjų nervų sistemoje, mes sukūrėme šį tyrimą, norėdami ištirti molekulinius mechanizmus, atsakingus už ilgalaikį poveikį, kurį GC sukelia pirminėse embrioninės žievės NSC kultūrose.

Rezultatai

GC sukeltas poveikis buvo tiriamas pirminėse NSC (P1), veikiamose 48 valandas 1 μM Dex, ir dukterinėse ląstelėse (D) iš 2 pasažo (D2) ir 3 (D3), kurios niekada nebuvo tiesiogiai veikiamos Dex (žr. 1 pav.

Image

Eksperimentinis modelis. Atlikus smegenų žievės išpjaustymą ir ląstelių apdengimą, NSC buvo kultivuojami 5 dienas prieš praeinant, kad būtų gautos pirminės ląstelės (P1). Po 3 dienų auginimo P1 ląstelės 48 valandas buvo veikiamos Dex (1 μM ). Norint ištirti ilgalaikį (paveldimą) Dex poveikį, P1 NSC buvo imami, norint gauti dukterines ląsteles (D). D2 = dukterinės NSC nuo 2 praėjimo; D3 = dukterinės NŠK nuo 3 praėjimo

Visas dydis

Dex sumažina NSC proliferaciją, netrukdydamas ląstelių gyvybingumui ar diferenciacijai

Vaizduojant gyvas ląsteles paaiškėjo, kad Dex paveiktas P1 turėjo daugiau procesų ir buvo linkęs augti atskirai, tuo tarpu kontrolinės ląstelės augo klasteriuose, turinčiuose glaudžius ląstelių ir ląstelių kontaktus (2a ir b paveikslai). Be to, dėl Dex ekspozicijos žymiai sumažėjo bendras ląstelių skaičius, kaip pastebėta P1 ląstelėse, taip pat D2 ir D3 ląstelėse (2c paveikslas), tuo pačiu nedidinant nekrotinių (duomenys nepateikti) arba apoptozinių ląstelių (papildomas S1 pav.). Kaip parodyta imunocitocheminiu proliferacijos žymeklio Ki67 (žalios spalvos) dažymu, Dex ekspozicija žymiai sumažino P1 proliferaciją (3a ir b paveikslai), o šis poveikis išliko D (3c paveikslas).

Image

Dex poveikis sumažina NSC proliferaciją. Faziniai kontrolinio ( a ) ir dex ekspozicijos (1 μM Dex 48 valandas) ( b ) P1 NSC kontrastiniai vaizdai. Masto juosta = 50 μm . c ) bendras pradinių (P1) ir D2 bei D3 ląstelių skaičius (išreikštas procentais nuo kontrolinių ląstelių skaičiaus). Reikšmės parodytos kaip vidurkis ± SEM * P <0, 05

Visas dydis

Image

Dex sumažina Ki67-teigiamų NSC skaičių nepakeisdamas nestin-teigiamų ląstelių procentinės dalies. Mikrografijoje pavaizduotos Ki67 teigiamos ląstelės (žalia spalva) ( a, b ), o teigiamų ląstelių procentas nurodytas c punkte. Nestopino (žalios spalvos) citoplazminis dažymas kontroliniuose ( d ) ir Dex ( e ) NSC. Branduoliai dažomi „Hoechst 33342“ (mėlyna spalva). Reikšmės parodytos kaip vidurkis ± SEM * P <0, 05. Masto juosta = 50 μm

Visas dydis

Norėdami išsiaiškinti, ar ląstelių proliferacijos sumažėjimas buvo susijęs su diferenciacijos padidėjimu, atlikome imunocitocheminius tyrimus kontrolinėse ir Dex P1, D2 ir D3 ląstelėse, naudodami NSC žymenis (nestinas, žalia spalva), ankstyvuosius neuronus (TuJ1, žalia spalva) ir glia progenitorinės ląstelės (GFAP, raudona spalva). Beveik 100% kontrolinės, taip pat Dex P1 (3d ir e pav.), D2 ir D3 ląstelės buvo nestin teigiamos, tuo tarpu jokiame TuJ1 ar GFAP teigiamose ląstelėse nebuvo aptikta nė vienos perėjos (papildomas paveikslas S2).

Dex padidina ląstelių ciklo inhibitorių genų ekspresiją ir senėjimo požymius

Genų ekspresijos analizė atliekant kiekybinį realaus laiko PGR (q-PGR) P1 ląstelėse atskleidė reikšmingą Dex sukeltą ląstelių ciklą reguliuojančių genų p16 (raukšlės pokytis 1, 98 ± 0, 08) (4a paveikslas) ir p21 (raukšlės pokytis 2, 14 ±) padidėjimą. 0, 15) (4b paveikslas), kuris išliko D2 ( p16 kartų pokytis 2, 02 ± 0, 2, p21 kartų pokytis 1, 75 ± 0, 06) ir D3 NSC ( p16 kartų pokytis 1, 89 ± 0, 13, p21 kartų pokytis 2, 17 ± 0, 31). Ankstyvas gliukokortikoidų receptorių (GR) antagonisto Mifepristone (RU486) poveikis smarkiai slopino p16 (kartų pokytis 1, 23 ± 0, 05) (papildomas S3A paveikslas) ir p21 (kartų pokytis 1, 42 ± 0, 07) (papildomas S3B paveikslas) (nepakeičiant GR ekspresijos) (P3). kartų pokytis 0, 92 ± 0, 2) (papildomas paveikslas S3C), nukreipiant į GR tarpinamą mechanizmą. siRNR nukleofekcija GR numušti (efektyvumas apie 50–70%, kartų keitimas 0, 3 ± 0, 01) (papildomas S3D paveikslas) užblokavo Dex sukeltą p16 (kartų keitimas 1, 45 ± 0, 13) (4c paveikslas) ir p21 (kartų keitimas 1, 32 ± 0, 09) (4d paveikslas) reikšmingai padidėjo reguliavimas.

Image

Ilgalaikis p16 ir p21 ekspresijos reguliavimas priklauso nuo GR. Genų ekspresijos analizė q-PGR parodė, kad p16 ( a ) ir p21 ( b ) genai buvo sureguliuoti P1 NSC (iškart po 48 val. Dex ekspozicijos), taip pat D2 ir D3 NSC (24 val. Po atitinkamo praėjimo). siRNR nukleofekcija GR numušti blokavo Dekso sukeltą p16 ( c ) ir p21 ( d ) reguliavimą. Santykinės kiekybinio išraiškos vertės buvo apskaičiuotos pagal aritmetinę lygtį 2 ΔΔCT . Tikslinių genų kiekis buvo normalizuotas iki Hprt, o santykinis padidėjimas buvo lygus 2 -Δ (ΔCTDex – ΔCT valdymas) . * P <0, 05

Visas dydis

Atsižvelgiant į tai, kad p16 ir p21 padidėjimas buvo susijęs su ląstelių senėjimu, mes išanalizavome Dex sukeltą poveikį senėjimo žymenų raiškai q-PGR ir imunocitochemijos pagalba. Įdomu tai, kad Dex atmetė Bmi1 (daugiakombi žiedinio piršto onkogeno) išraišką P1 (raukšlės pokytis 0, 33 ± 0, 03), D2 (raukšlės pokytis 0, 32 ± 0, 03) ir D3 NSC (raukšlės pokytis 0, 46 ± 0, 06) (5a paveikslas) ir aukštyn reguliuojamą didelio judrumo grupę A1 ( Hmga1 ) D2 (kartų keitimas 2, 09 ± 0, 26) ir D3 ląstelėse (kartų keitimas 2, 06 ± 0, 22) (5b paveikslas). Priešingai, reikšmingų Hmga2 išraiškos pokyčių nenustatėme (P1 kartų pokytis 1, 36 ± 0, 1, D2 kartų pokytis 0, 89 ± 0, 03, D3 kartų pokytis 1, 12 ± 0, 15) (papildomas paveikslas S4). Be to, Dexas praturtino heterochromatino 1 baltymo gama (HP1 γ ) (žalia spalva) vadinamaisiais su senėjimu susijusiuose heterochromatino židiniuose (SAHF) (5c ir d paveikslai).

Image

Dex skatina senėjimo žymenų raišką NSC. q-PGR analizė parodė, kad Bmi1 ( a ) išraiškos lygis reikšmingai sumažėjo P1 NSŠ 48 valandas po Dex ekspozicijos, taip pat D2 ir D3 NSK 24 valandą po atitinkamo praėjimo. Padidėjusi Hmga1 mRNR ( b ) raiška buvo pastebėta tik D2 ir D3 ląstelėse. Kontroliniai ( c ) ir Dex ( d ) NSK konfokaliniai vaizdai, rodantys Dex sukeltą 1 heterochromatino baltymo gama (HP1 γ ) (žalia spalva) praturtėjimą. Branduoliai buvo priešpriešiniai naudojant „Hoechst 33342“ (mėlyna spalva). * P <0, 05, mastelio juosta = 50 μm

Visas dydis

Dex keičia mitochondrijų kvėpavimo grandinės genų raišką

Ląstelių senėjimas buvo susijęs su sutrikusia mitochondrijų funkcija. Įdomu tai, kad genų ekspresijos analizė q-PGR parodė ilgalaikį mitochondrijų genų NADH dehidrogenazės 3 ( Nd3 ) sumažėjimą (P1 kartų pokytis 0, 41 ± 0, 06, D2 karto pokytis 0, 41 ± 0, 03, D3 karto pokytis 0, 43 ± 0, 05) (6a pav.) ir citochromas b ( Cytb ) (P1 kartų pokytis 0, 47 ± 0, 05, D2 kartų pokytis 0, 48 ± 0, 04, D3 kartų pokytis 0, 45 ± 0, 03) (6B paveikslas).

Image

Dex keičia mitochondrijų genų raišką. Dex in NSC paskatino ilgalaikį reikšmingą Nd3 ( a ) ir Cytb ( b ) mRNR ekspresijos sumažėjimą. Reikšmės parodytos kaip vidurkis ± SEM * P <0, 05

Visas dydis

Dex modifikuoja visuotinę DNR metilinimą

Metilinimo matavimai parodė, kad žymiai sumažėjo P1 (∼ 33%) ir D2 (∼ 40%) NSC visuotinis DNR metilinimas (7a paveikslas), susijęs su sumažėjusia DNR metiltransferazių ( Dnmts ) ekspresija . Tėvų ląstelėse buvo nustatytas reikšmingas Dnmt1 (raukšlės pokytis 0, 53 ± 0, 02), Dnmt3a ( rakto pokytis 0, 62 ± 0, 01) ir Dnmt3b mRNR lygis (raukšlės pokytis 0, 5 ± 0, 01) (7b pav.), Tuo tarpu D parodė Dnmt1 sumažėjimą. (kartų keitimas 0, 69 ± 0, 01) ir Dnmt3a išraiška (kartų keitimas 0, 68 ± 0, 01) (7c paveikslas).

Image

Dex modifikuoja visuotinę DNR metilinimą. Visuotinis citozino metilinimo lygis sumažėjo P1 ir D2 paveiktose NSC ( a ) kartu su metiltransferazių Dnmt1 ir Dnmt3a mRNR ( b ir c ) reguliavimu. Dnmt3b mRNR ekspresijos lygis buvo sumažintas tik P1 ląstelėse ( b ). Reikšmės parodytos kaip vidurkis ± SEM * P <0, 05

Visas dydis

Dex sukelia ilgalaikį jautrumą oksidaciniam stresui

Tuomet norėjome patikrinti hipotezę, kad ilgalaikis senėjimas ir mitochondrijų pakitimai bus susiję su didesniu pažeidžiamumu oksidacinio streso metu. Mes atlikome iššūkį dukterinėms NSC su oksidacinio streso induktoriumi 2, 3-dimetoksi-1, 4-naftochinonu (DMNQ, 3 μM ) ir, palyginti su kontrolinėmis ląstelėmis, pastebėjome padidėjusią reaktyviųjų deguonies rūšių (ROS) gamybą Dex-NSC. ), kurie buvo siejami su didesniu ląstelių žūties dažniu, kaip parodyta dvejopai padidėjus apoptozės NSS skaičiui (8b pav.).

Image

Dex padidina NSC jautrumą oksidaciniam stresui. D2 ląstelės, paveiktos oksidacinio streso induktoriaus DMNQ 8 valandas, pastebimai padidino ROS kaupimąsi ( a ) ir padidino TUNEL teigiamų apoptozinių ląstelių skaičių, praėjus 24 valandoms po DMNQ ekspozicijos ( b ). Reikšmės parodytos kaip vidurkis ± SEM * P <0, 05

Visas dydis

Diskusija

Mūsų išvadų naujovė yra įrodymas, kad NSC GC sukelia paveldimus pokyčius, įskaitant proliferacijos sumažėjimą ir genų išraiškos pokyčius, susijusius su senėjimu ir mitochondrijų funkcijomis. Visuotinio DNR metilinimo sumažėjimas leidžia manyti, kad epigenetiniai mechanizmai gali turėti lemiamą reikšmę pasireiškiant Dex sukeltam poveikiui. Be to, tiek motinos, tiek D ląstelės yra jautresnės oksidaciniam stresui. Visi šie duomenys atveria naujas vertimo perspektyvas. Atsižvelgiant į pagrindinį NŠK vaidmenį besivystančioje nervų sistemoje, galima įsivaizduoti, kad in vivo GC sukelti pokyčiai žievės NŠK gali neigiamai paveikti neurogenezę su vėlesniais neigiamais funkciniais rezultatais pažintinių gebėjimų srityje. 18, 19 tyrimai tiek su žmonėmis, tiek su gyvūnais parodė, kad prenatalinio ir ankstyvojo postnatalinio smegenų vystymosi sutrikimai gali sukelti protinį atsilikimą ir kognityvines disfunkcijas 20, o vystymosi neurogenezės sutrikimas susijęs su šizofrenija. 21 Gerai žinoma, kad NKS taip pat yra suaugusiųjų nervų sistemoje, kur jie gali turėti įtakos mokymuisi, atminčiai ir reagavimui į sužeidimus. 12 Taigi, ilgalaikis sutrikimas, kurį sukelia NŠK GC, gali turėti neigiamų padarinių ir suaugus.

Kalbant apie ląstelių mechanizmus, Dex sukeltas NSC skaičiaus sumažėjimas nebuvo susijęs su ląstelių žūties padidėjimu ar diferenciacija, aiškiai nurodant proliferacijos greičio pasikeitimą, suderinus su Sundberg ir kt. 22 Genų ekspresijos analizė atskleidė ląstelių ciklą reguliuojančių genų p16 ir p21 , kurie atstovauja stipriems ciklinui priklausomų kinazių ir D tipo ciklinų inhibitoriams įvairiuose ląstelių tipuose, reguliavimą, ir tai sąlygoja ląstelių ciklo sustojimą. 23, 24 blokuodami GR su neselektyviu antagonistu Mifepristone arba atlikdami numušimo eksperimentus, nukreiptus į GR raišką, mes galime užkirsti kelią tiek p16, tiek p21 reguliavimui . Genų ekspresijos reguliavimas GR gali mechaniškai vykti dviem skirtingais būdais: (1) ligandu suaktyvinta GR tiesiogiai sąveikauja su GC reaguojančiais elementais (GRE), esančiais tikslinių genų promotoriaus regionuose; (2) GR tarpininkaujama genų ekspresijos stimuliacija vyksta GR sąveikaujant su kitais DNR surištais baltymais, tiesiogiai neprisirišant prie pačios DNR arba sąveikaujant su kitomis molekulėmis, dalyvaujančiomis tarpląsteliniame signalizavime. 25 Tiriant p21 , žiurkių promotoriaus sekose buvo nustatyti į GC reaguojantys regionai, kuriems reikalinga C / EBP DNR surišimo vieta ir ekspresinis C / EBP α transkripcijos faktorius. 26, 27 Taigi, Dex sukeltas p21 reguliavimas gali įvykti dėl funkcinės baltymų sąveikos tarp GR ir C / EBP α susiejimo mechanizme.

P16 ir p21 padidėjimas buvo susietas su ląsteliniu ir in vivo senėjimu, 28, 29, o mūsų duomenys nurodo Dex, skatinantį senėjimą NSC, o poveikis, kuris perduodamas iš tėvų ląstelių D. ląstelių senėjimui, lydi SAHF, turinčių įvairių chromatino baltymų, tokių kaip K9-metilinis H3 histonas, H2A makro, HP1 ir HMGA baltymai. 30 Hmga1 genų ekspresijos analizė ir baltymų analizė, naudojant imunocitochemiją prieš HP1 γ, parodė, kad dukteriniuose Dex-NSC yra padidėję abu senėjimo žymenys. Be to, mes aptikome sumažėjusį Bmi1 reguliavimą, kuris taip pat laikomas senėjimo rodikliu remiantis tuo, kad normalūs embriono fibroblastai iš Bmi1 - / - pelių rodo priešlaikinio senėjimo fenotipą, koreliuojantį su padidėjusia p16 išraiška. 31

Ląstelių senėjimas yra susijęs su mitochondrijų disfunkcijomis, kaip parodyta keliuose skirtinguose ląstelių tipuose, įskaitant fibroblastus, epitelio, mezotelio ir hipokampo ląsteles. 32, 33, 34, 35 Ypač padidėjęs ROS kiekis ir sumažėjusios mitochondrijų energetinės kompetencijos gaminti ATP yra du pagrindiniai įvykiai, pabrėžti mitochondrijų senėjimo hipotezėje. 36 Mitochondrijos yra žinomos kaip pagrindinis GC taikinys, nes mitochondrijų genome yra šeši galimi GRE. Gelio poslinkio analizė įrodė GR prisijungimą prie mitochondrijų genomo po GC užkrėtimo 37, o tai lemia kelių mitochondrijų koduotų genų transkripcinį reguliavimą. 38 Savo ląstelių modelyje stebėjome, kaip motininėse ląstelėse, ir D., transkripciniai I komplekso ( Nd3 ) ir III komplekso ( Cytb ) fermentų mitochondrijų-kvėpavimo grandinių fermentai yra slopinami motininėse ląstelėse ir D. Pažymėtina, kad adrenalektomizuotų žiurkių tyrimas parodė, kad kelios mitochondrijų genai, įskaitant Cytb , reaguoja į GC ir yra sureguliuojami , reaguojant į mažas kortikosteroono dozes. 38

Mūsų tyrimų metu visas Dex sukeliamas poveikis iš tėvų ląstelių išliko iki D. Visuotinio DNR metilinimo pokyčiai, kartu su sumažėjusia Dnmt1 , Dnmt3a ir Dnmt3b ekspresija, rodo, kad Dex sukeliamas paveldimas poveikis gali atsirasti dėl epigenetinio NSC perprogramavimo. . Tęstinių tyrimų tikslas - nustatyti genų specifinius DNR metilinimo pokyčius.

Remiantis mūsų ankstesniais duomenimis, 16, 17 Dex sukelia ilgalaikį padidėjusį jautrumą oksidaciniam stresui, tai parodo didesnis ląstelių, kurioms atliekama apoptozė, skaičius, susijęs su aukštesniu tarpląstelinio ROS lygiu. Tačiau ilgalaikiai GC sukelti pokyčiai netrukdo NŠK gyvybingumui, nebent juos paveiktų neigiamas dirgiklis, pavyzdžiui, oksidacinis stresas.

Apibendrinant, mūsų duomenys pateikia naujų įrodymų apie Dex sukeltą programavimo poveikį NSC ir patvirtina mintį, kad sąlygos, susijusios su vaisiaus ekspozicija, kai yra didelis GC kiekis, greičiausiai turės ilgalaikių padarinių, galinčių turėti įtakos neurologinio vystymosi sutrikimams ir (arba) neurodegeneraciniams sutrikimams. procesai.

Papildoma informacija

PDF failai

  1. 1.

    Papildomi skaičiai ir lentelė

„Word“ dokumentai

  1. 1.

    Papildomos figūros ir lentelių legendos

Žodynas

NSC

nervų kamieninės ląstelės

ADHD

dėmesio stokos hiperaktyvus sutrikimas

GC

gliukokortikoidai

11 β- HSD2

11 beta tipo hidroksisteroidų dehidrogenazės 2 tipas

Deksas

deksametazonas

P1

patronuojančios NSC

D

dukros ląstelės

q-PGR

kiekybinis realaus laiko PGR

GR

gliukokortikoidų receptorių

Hmg

didelio judrumo grupė

SAHF

su senėjimu susijusių heterochromatinų židiniai

HP1 γ

heterochromatino baltymo 1 gama

Nd3

NADH dehidrogenazė 3

Cytb

citochromas b

Dnmts

DNR metiltransferazės

Bmi1

daugiakobio žiedo piršto onkogenas

Hprt

hipoksantino fosforibosiltransferazė

DMNQ

2, 3-dimetoksi-1, 4-naftochinonas

ROS

reaktyviosios deguonies rūšys

GRE

GC reaguojantys elementai

PF

paraformaldehidas

OD

optinis tankis

karboksi-H2 DCFDA

5- (ir-6) -karboksi-2 ′, 7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate

PBS

fosfatiniu buferiniu tirpalu

RT

kambario temperatūra

BSA

galvijų serumo albuminas

Papildoma informacija pridedama prie ląstelių mirties ir ligų svetainės (//www.nature.com/cddis).