Su gstpi teigiamu naviku susijusios mikroaplinkos fibroblastai reikšmingai siejami su gstpi neigiamomis vėžinėmis ląstelėmis pirminio invazinio krūties vėžio ir aksilinių limfmazgių metastazių atvejais poromis | britų žurnalas apie vėžį

Su gstpi teigiamu naviku susijusios mikroaplinkos fibroblastai reikšmingai siejami su gstpi neigiamomis vėžinėmis ląstelėmis pirminio invazinio krūties vėžio ir aksilinių limfmazgių metastazių atvejais poromis | britų žurnalas apie vėžį

Anonim

Dalykai

  • Krūties vėžys
  • Vėžinė mikroaplinka
  • Genų išraiška
  • Metastazės

Šis straipsnis buvo atnaujintas

Anotacija

Pagrindiniai faktai:

Glutationo S-transferazės Pi (GSTPi) ekspresija yra vienas iš veiksnių, kuris, kaip žinoma, susijęs su atsparumo chemoterapiniams vaistams, įskaitant sergančius krūties vėžiu, vystymuisi. Vis dėlto pranešta, kad didelėje procentinėje dalyje pacientų, sergančių pirminiu krūties vėžiu, jo ekspresijos vėžio ląstelėse neįmanoma aptikti. Tačiau GSTPi ekspresija stromos ląstelėse krūties naviko mikroaplinkoje, būtent su vėžiu susijusiuose fibroblastuose (CAF), kurie, kaip pripažįstama, vaidina svarbų vaidmenį vėžio progresavime, vis dar yra mažai pateikti.

Metodai:

Tyrimo tikslas buvo nustatyti GSTPi raišką; vimetinas, su fibroblastų susijęs citoskeleto baltymas; ir α -svorio raumenų aktinas ( α -SMA), žinomas CAF žymeklis krūties vėžio audinyje, imunohistocheminio dažymo metodu iš eilės histologiniais formalino fiksuotų ir parafinu įterptų audinių biopsijos mėginių pjūviais iš 39 pacientų poros sergant invaziniu krūties vėžiu ir atitinkamų aksilinių limfmazgių metastazėmis.

Rezultatai:

11 iš 11 gerybinių krūties audinių biopsijų ductalinių ir acinarinių epitelio ląstelių, mioepitelinių ląstelių ir aplinkinių fibroblastų homogeniška citoplazminė reakcija su anti-GSTPi antikūnais buvo vienoda. Vimentino teigiami fibroblastai buvo nereaguoti su anti- α- SMA antikūnais. GSTPi ekspresijos praradimas buvo stebimas krūties vėžio ląstelėse tiek pirminėje, tiek metastazavusiose vietose 31 iš 39 porų, palyginti su gerybinėmis krūties epitelio ląstelėmis (Fišerio tikslus testas P <0, 001). Abiejose naviko mikroaplinkos vietose buvo pastebėtas reikšmingas ryšys tarp GSTPi teigiamo, vimentinu teigiamo ir α -SMA teigiamo fibroblastų.

Išvada:

Tai yra originalus pranešimas apie reikšmingo ryšio tarp naviko, susijusių su naviku, su GSTPi teigiamu CAF (vimentinu / α -SMA teigiamu), ir GSTPi neigiamomis vėžinėmis ląstelėmis, pirminio invazinio krūties vėžio ir atitinkamų ašinių limfmazgių porų atvejais. metastazės.

Pagrindinis

Krūties vėžys yra antra pagrindinė JAV moterų mirties nuo vėžio priežastis. Dauguma pacientų, sergančių estrogeno receptorių neigiamomis krūties vėžio ląstelėmis, gydomi chemoterapiniais preparatais (Gonzales-Angulo ir kt., 2007). Tokių pacientų pogrupyje vėliau išsivysto atsparumas gydymui ir atsiranda gyvybei pavojinga progresuojanti liga (Gonzales-Angulo ir kt., 2007). Buvo pranešta apie įvairių molekulinių tarpininkų vaidmenį kuriant vėžio ląstelių atsparumą vaistams. Vienas iš tokių tarpininkų yra glutationo S-transferazės Pi (GSTPi), GST supergeno šeimos narys (Su ir kt., 2003; Arai ir kt., 2008). GSTPi katalizuoja reakcijas, kurios sukelia kovalentinį redukuoto glutationo konjugaciją su elektrofiliniais junginiais, tokiais kaip kancerogenai ir citotoksiniai vaistai (Brockstedt ir kt., 2002; Van Emburgh ir kt., 2008). Gautas produktas yra hidrofilinis, mažiau toksiškas ir lengvai pašalinamas, tokiu būdu apsaugodamas normalias GSTPi baltymų ląsteles nuo neigiamo kancerogenų poveikio (Sawaki ir kt., 1990). Pranešama, kad GSTPi baltymų ekspresijos sumažėjimas ar praradimas daugiausia vyksta epigenetiniu būdu, sergant keliomis vėžio formomis, įskaitant krūtį, todėl galima teigti, kad toks netekimas gali sukelti papildomą genetinę žalą vėžio ląstelėms ir pagreitinti ligos progresavimą (Randall et al. 1990 m.; Toffoli ir kt., 1992; Green ir kt., 1993; Moskaluk ir kt., 1997; Esteller ir kt., 1998; Jhaveri ir Morrow, 1998; Montironi ir kt., 1999; DeMarzo ir kt., 2003). Priešingai, pacientai, turintys GSTPi teigiamas krūties vėžio ląsteles, įrodė, kad yra atsparūs gydymui chemoterapiniais vaistais, tokiais kaip ciklofosfamidas, methatreksatas, adriamicinas, doksorubicinas, 5-fluoruracilis, docetakselis ar paklitakselis (Su ir kt., 2003; Arai ir kt., 2008; J. ir kt., 2009). Šių tyrimų rezultatai rodo, kad GSTPi teigiamos vėžio ląstelės neutralizuoja chemoterapinių medžiagų citotoksinį poveikį mechanizmu, panašiu į įprastus jų kancerogenų mechanizmus. Vis dėlto pranešta, kad didelėje pacientų, sergančių pirminės invazinės krūties karcinomos atvejais, GSTPi ekspresija vėžio ląstelėse yra neaptinkama (Esteller ir kt., 1998). Šie intriguojantys pranešimai paskatino mus nustatyti kitus galimus GSTPi ekspresijos šaltinius, susijusius su krūties vėžio naviko mikroaplinka susijusiose stromose, pavyzdžiui, fibroblastą. Apie tokį tyrimą nepranešta. Viena iš pagrindinių naviko, susijusios su mikroaplinkos stromos ląstelėmis, yra susijusi su vėžiu susijusiu fibroblastu (CAF), kuris, kaip pripažinta, vaidina svarbų vaidmenį progresuojant vėžiui, įskaitant krūties vėžį (Orimo ir kt., 2001; Shekhar ir kt.), 2001; Desmouliere ir kt., 2004; Micke ir Ostman, 2004; Nakagawa ir kt., 2004; Tang ir kt., 2004; Galiè ir kt., 2005; Micke ir Ostman, 2005; Sugimoto ir kt., 2005; Cat ir kt. , 2006 ; Ide ir kt., 2006; Patocs ir kt., 2007).

Pateikiame statistiškai reikšmingo ryšio tarp GSTPi ekspresijos praradimo krūties vėžio ląstelėse ir jo ekspresijos palaikymo Vimentin / α -SMA teigiamame CAF auglio mikroaplinkoje palaikomojo pirminio invazinio krūties vėžio ir atitinkamos ašinės limfos atvejais atvejus. mazgo metastazės.

medžiagos ir metodai

Reagentai

Pelės monokloniniai antikūnai prieš GSTPi (klonas: LW29, izotipas: IgG2a), lygiųjų raumenų aktinas ( α- SMA; klonas: 1A4, izotipas: IgG2a) ir vimentinas (klonas: V9, izotipas: IgG1) buvo gauti iš „Novocastra Laboratories Ltd“ (Newcastle). -upon-Tyne, JK); „Dako Cytomation“ (Carpinteria, CA, JAV) ir Millipore (Temecula, CA, JAV). Avidino – biotino – peroksidazės kompleksas (ABC), biotinilinti arklio antimousiniai imunoglobulinai ir normalus arklio serumas buvo nupirkti iš „Vector Laboratories, Inc.“ (Burlingtonas, Kalifornija, JAV) ir blokuojantys peptidus, būdingus kiekvienam pirminiam „LabVision“ antikūnui (Fremontas, Kalifornija)., JAV). Visi kiti naudojami reagentai buvo gryniausi iš „Sigma-Aldrich Chemical Co.“ (St Louis, MO, JAV).

Pacientų

Formalinu fiksuoti / į parafiną įterpti (FFPE) archyviniai krūties audinio biopsijos mėginiai, patvirtinantys patvirtintus 39 pirminio invazinio krūties vėžio atvejus ir atitinkamas aksiliarinių limfmazgių metastazes iš poros, gauti iš Tailando Šiaurės regiono ligoninės. Be to, 11 pacientų gerybinių krūties audinių biopsijos pavyzdžių be aptinkamo naviko buvo gauti iš pacientų amžiaus grupės kaip teigiami kontroliniai audiniai GSTPi ir vimentino ekspresijai iš to paties audinių banko. Be to, vienas invazinio krūties vėžio audinio biopsijos pavyzdys su žinoma GSTPi ir α- SMA išraiška buvo gautas kaip teigiama kontrolė iš to paties audinių banko. Tiek eksperimentiniai, tiek kontroliniai audinių mėginiai buvo fiksuoti, apdoroti ir įterpti tokiu pat būdu aukščiau esančioje ligoninėje. Pacientų, sergančių invaziniu krūties vėžiu, amžius ir patologiniai parametrai parodyti 1 lentelėje. Be to, trijų visų autorių (BC, WYN ir 3) nepriklausomai buvo peržiūrėti ir patvirtinti visų 39 pirminio invazinio krūties vėžio atvejų naviko histologiniai ir branduoliniai laipsniai. SAI). Pirminio invazinio krūties vėžio histologinė klasifikacija buvo nustatyta pagal Scarff – Bloom – Richardson kriterijus (Bloom ir Richardson, 1957; Scarff ir Torloni, 1968). Audinių biopsijos pavyzdžių naudojimą šiam tyrimui patvirtino institucinė apžvalgos taryba, Chiang Mai universitetas, Tailandas, laikydamasi etikos politikos ir tvarkos.

Pilno dydžio lentelė

Imunohistocheminis dažymas

Audinių blokai buvo suskirstyti po 4 μm storio dalis, dedami ant histologinio stiklinio stiklelio ir imuniniu būdu padengti, kaip aprašyta anksčiau (Imam et al, 1993). Trumpai tariant, nenudažyti histologinių stiklinių plokštelių skyriai buvo parafinuoti ksilene ir rehidratuoti mažėjant alkoholio koncentracijai. Endogeninis peroksidazės aktyvumas buvo sustabdytas vandenilio peroksidu (H2O2) metanolyje 20 min. Antigenų epitopų atskyrimas buvo atliekamas kaitinant plokšteles 30 minučių 0, 01 M natrio citrato buferiniame tirpale, pH 6, 0, mikrobangų krosnelėje. Po skaidrių inkubavimo 20 minučių su normaliu tinkamu serumu, kad būtų užkirstas kelias nespecifiniam vėlesnių antikūnų surišimui, skyriai buvo inkubuojami per naktį su 150 μl pelės monokloninio antikūno prieš GSTPi (0, 4 μg ml −1 ), α- SMA (0, 14 μl). g ml −1 ) arba vimentinas (0, 08 μ g ml −1 ) drėgnoje kameroje. Empiriškai buvo nustatyta optimali kiekvieno pirminio antikūno koncentracija, kad būtų gautas intensyviausias žinomų tikslinių ląstelių imuninis dažymas gerybiniuose krūties ar krūties vėžio audinių skyriuose su nenustatomu ar nereikšmingu nespecifinių ląstelių ir stromos komponento dažymu. Skyriams buvo uždėti biotiniluoti arklio anti-pelių imunoglobulinų antikūnai kaip antrinis antikūnas, po to - ABC konjugatas. Antrinių antikūnų ir panaudotų ABC reagentų koncentracijos buvo tokios, kaip anksčiau buvo optimalios krūties vėžio FFPE audinių biopsijos mėginiuose (Saha ir kt., 2007). Diaminobenzidinas buvo naudojamas kaip chromogenas, o hematoksilinas - kaip priešpaltis. Kiekvienam eksperimentui buvo nustatyta kontrolė, kurią sudarė iš anksto absorbuotas pirminis monokloninis antikūnas su specifiniu blokuojančiu peptidu (10 mg baltymo viename mililitre darbinio antikūno skiedinio), siekiant nustatyti antikūno reakcijos specifiškumą.

Imunohistocheminio dažymo įvertinimas

Trys iš autorių (BC, WYN ir SAI) savarankiškai apžvelgė imunitetą turinčius audinių skyrius visiškai aklai. Imuninio dažymo analizės duomenys buvo suskirstyti į tris kategorijas, remiantis GSTPi, α- SMA arba vimentino ekspresijos dažniu, būtent, homogeniški daugumai ląstelių, rodančių pozityvumą (modelis panašus į gerybinių krūties epitelinių ląstelių modelį, kaip parodyta paveikslėliuose). 1A – C), nevienalytis su keliomis išsibarsčiusiomis ląstelėmis, turinčiomis teigiamą ar neigiamą poveikį (mažiau nei 2% teigiamų ląstelių), kaip aprašyta kitur (Saha ir kt., 2007).

Image

Imunohistocheminė GSTPi, vimentino arba α- SMA lokalizacija gerybinių krūties ir krūties vėžio audinių biopsijos mėginiuose. Gerų gerybinių krūties FFPE biopsijos pavyzdžių sekcijos (4 μm storio) ir porinis pirminio invazinio krūties vėžio atvejis bei atitinkamos aksiliarinio limfmazgio metastazės buvo imunohistochemiškai dažytos pelių monokloniniais antikūnais prieš GSTPi, vimentiną ar α- SMA. Anti-GSTPi antikūnas parodė vienalytį citoplazminį rudą dažymą gerybinių krūties latakų ir acini luminalinių epitelio ląstelių, mioepitelio ląstelių ir aplinkinių fibroblastų (rudą dažymą rodo atidarytos rodyklės epitelio / mioepitelio ląstelėms ir uždaros strėlės fibroblastų atveju, A ). Anti-vimentino antikūnai parodė vienalytį citoplazminį rudą fibroblastų dažymą (pažymėtą uždaromis rodyklėmis, B ), bet ne su epitelio ląstelėmis (pažymėtomis atidarytomis rodyklėmis, B ). Anti- α- SMA antikūnai neturėjo aptinkamo reaktyvumo su aplinkiniais fibroblastų (pažymėtų uždaromis rodyklėmis, C ) ir luminalinių epitelio ląstelių (pažymėtų atviromis rodyklėmis, C ), tuo tarpu homogeniškas reaktyvumas buvo pastebėtas su gerybinių krūties mioepitelio ląstelėmis (nurodytos rudos spalvos). viršutinio ląstelių sluoksnio dažymas, C ). Tiek pirminio, tiek aksiliarinio limfmazgio metastazavusių krūties vėžio ląstelių reakcija su anti-GSTPi antikūnais neaptikta (rudos spalvos dažymas nebuvo parodytas atviromis rodyklėmis; atitinkamai - D ir G ), tuo tarpu naviko mikroaplinkos gauti fibroblastai reagavo vienodai (nurodytas rudas dažymas) uždaromis rodyklėmis; atitinkamai D ir G ). Antikūnai prieš vimentiną parodė vienalytį citoplazminį rudą naviko mikroaplinkos fibroblastų dažymą pirminėse ir limfmazgių metastazių vietose (atitinkamai pažymėtomis uždaromis rodyklėmis; atitinkamai E ir H ), bet ne vėžinėse ląstelėse (rudo dažymo nebuvimas rodo rodyklė; atitinkamai E ir H ). Panašus anti-SMA antikūnų reaktyvumo modelis buvo stebimas ir naudojant fibroblastus, tiek pirminėje (pažymėtą uždaromis rodyklėmis, F ), tiek limfmazgių metastazių vietoje (pažymėta uždara rodykle, I ), tuo tarpu vėžio ląstelės buvo neigiamos (nurodytos ati strėlės, F ir I ). Skyriai buvo apdengti Harrio hematoksilinu (mėlynasis branduolinis dažymas). Originalus padidinimas, × 150 ( A - C ) ir × 312 ( D - I ).

Visas dydis

Statistinė analizė

GSTPi, α- SMA arba vimentino ekspresija buvo sugrupuota kaip homogeniškai teigiama, heterogeniškai teigiama arba neigiama, kaip aprašyta aukščiau. Neapibrėžtumo lentelės ir Fišerio tikslus testas (Mehta ir Patel, 1993) buvo naudojamos apibendrinti ryšį tarp baltymų analitų ir ląstelių tipų.

Rezultatai

Gerybinė krūtis

11 iš 11 gerybinių krūties audinių mėginių atvejų monokloninis anti-GSTPi antikūnas parodė vienalytį reaktyvumą su latakų ir acinarinių luminalinių epitelio ląstelių ir mioepitelio (bazinių) ląstelių citoplazma / branduoliu (1A pav., 2 lentelė). Be to, 10 iš 11 (91%) atvejų stromos fibroblastuose buvo pastebėta homogeniška citoplazminė / branduolinė GSTPi ekspresija, tačiau vienu atveju jos nebuvo galima aptikti, nors krūties latakų, acinarinės ir mioepitelinės ląstelės buvo teigiamos. 11 iš 11 atvejų monokloninis anti-vimentino antikūnas suteikė homogeninį citoplazminį stromos fibroblastų reaktyvumo modelį (1B paveikslas; 2 ir 3 lentelės). Gerybinės latakų ir acinarinės epitelio ląstelės bei mioepitelinės ląstelės neigiamai paveikė vimentino ekspresiją (1B pav.). Anti- α- SMA antikūnai citoplazminiu būdu reagavo vienodai su mioepitelio ląstelėmis, tuo tarpu latakų ir acinarinių epitelio ląstelių bei stromos fibroblastų reakcija buvo neigiama 11 iš 11 atvejų (1 pav. C; 2 lentelė).

Pilno dydžio lentelė

Pilno dydžio lentelė

Pirminis ir metastazinis krūties vėžys

Krūties vėžio ląstelės poriniuose pirminiuose navikuose ir jų atitinkamos metastazės prie aksilinio limfmazgio parodė homogenišką citoplazminę / branduolinę GSTPi ekspresiją 8 iš 39 (21%) ir heterogeninę ekspresiją 1 iš 39 (3%), tuo tarpu 29 iš 39 (74) %) atvejai buvo neigiami tiek pirminėse, tiek metastazavusiose vietose (1D ir G paveikslai; 2 lentelė). Likusiu vienu poruotu atveju vėžio ląstelės pirminėje vietoje buvo nevienodai teigiamos GSTPi ekspresijai, tuo tarpu metastazavimo vietoje esančios ląstelės buvo neigiamos (2 lentelė). Palyginti su gerybinėmis krūties epitelio ląstelėmis, krūties vėžio ląstelėse buvo nustatytas labai reikšmingas GSTPi ekspresijos praradimas tiek pirminėje, tiek metastazavusiose vietose (Fisherio tikslus testas P <0, 001, 2 lentelė).

Naviko mikroaplinka

Su naviku, susijusia su mikroaplinka, stromos fibroblastai rodė homogeninę vimentino ekspresiją tiek pirminėje, tiek metastazavusiose vietose 38 iš 39 (97%) porų (1E ir H paveikslai; 2 lentelė). Likusiu vienu poruotu atveju fibroblastai vienodai teigiamai vertino vimentino ekspresiją pirminėje vietoje, tuo tarpu metastazavimo vietoje esantys heterogeniškai buvo teigiami (2 lentelė). Fibroblastai naviko mikroaplinkoje tiek pirminėje, tiek metastazavusiose vietose parodė homogeninę α- SMA ekspresiją 31 iš 39 (79%) poros atvejų (1F ir I pav .; 2 lentelė), įrodydami, kad šios ląstelės yra CAF. Fibroblastai, kuriuose nevienalytė α -SMA teigiamų fibroblastų ekspresija, buvo pastebėti abiejose vietose vienoje poroje ir penkiose vietose pirminėje vietoje (2 lentelė). Α -SMA neigiami fibroblastai buvo aptikti abiejose vietose dviem poromis ir metastazavusioje vietoje vienu atveju (2 lentelė). Statistiškai reikšmingas atvejų skaičius parodė α- SMA raišką auglio mikroaplinkos stromos fibroblastuose tiek pirminėje, tiek metastazavusiose vietose, palyginti su gerybiniais krūties stromos fibroblastais (tikslus Fišerio testas P <0, 001, 2 lentelė). Be to, 37 iš 39 (95%) pirminio krūties vėžio atvejų ir 36 iš 39 (92%) limfmazgių atvejų pastebėtas reikšmingas ryšys tarp vimentino ir α -SMA teigiamų fibroblastų ar CAF naviko mikroaplinkoje. metastazės (3 lentelė).

Su naviku, susijusia su mikroaplinka, stromos fibroblastai rodė homogeninę GSTPi ekspresiją tiek pirminėse, tiek metastazavusiose vietose 30 iš 39 (77%) (1D ir G paveikslai), o heterogeninis - 3 iš 39 (8%) porų (2 lentelė). Likę poriniai atvejai rodė įvairius dažymo modelius: du buvo neigiami abiejose vietose ir du pirminėje vietoje (2 lentelė). Šios pacientų grupės pirminėje ir metastazavimo vietose buvo pastebėtas labai reikšmingas ryšys tarp GSTPi teigiamo / su vimentinu teigiamo / α -SMA teigiamo naviko, susijusio su mikroaplinka, stromos fibroblastų ar CAF (pirminis ir metastazavęs vietų tyrimas (tikslus Fišerio testas P <0, 001, 2 lentelė). ). Nebuvo pastebėta jokio reikšmingo ryšio tarp GSTPi teigiamo / vimentin pozityvaus / α -SMA teigiamo CAF ir paciento amžiaus diagnozuojant, naviko histologinio laipsnio, naviko branduolio laipsnio ar susijusių limfmazgių skaičiaus.

Valdikliai

Iš anksto absorbuotų antikūnų pritaikymas GSTPi, vimentinui ar α- SMA su atitinkamu blokuojančiu peptidu leido panaikinti specifinių tikslinių ląstelių imuninį padengimą, kurios pasižymėjo reaktyvumu su neabsorbuotomis ląstelėmis, parodydamos antikūnų reaktyvumo specifiškumą. Monokloniniai GSTPi arba vimentino antikūnai nuosekliai rodė reaktyvumą su tikslinėmis ląstelėmis audinių pjūviuose iš žinomo teigiamo gerybinio krūties audinio kontrolės, tuo tarpu anti- α- SMA antikūnai nebuvo sureaguoti (rezultatai dabar parodyti). Be to, monokloniniai GSTPi arba α- SMA antikūnai parodė žinomą teigiamą invazinio krūties vėžio audinio kontrolės reakciją su tikslinėmis ląstelėmis audinių atkarpose (rezultatai neparodyti).

Diskusija

GSTPi išraiška, vienas iš žinomų veiksnių, susijęs su atsparumo chemoterapijai plėtra pacientams, sergantiems vėžiu, įskaitant sergančius invaziniu krūties vėžiu (Su ir kt., 2003; Arai ir kt., 2008; Yu ir kt., 2009), yra plačiai paplitę. pranešta, kad didelis procentas pacientų, sergančių invaziniu krūties vėžiu, vėžio ląstelėse yra nepakankamai sureguliuotas (Esteller ir kt., 1998). Šie intriguojantys pranešimai paskatino mus ištirti GSTPi raišką, ypač su krūties naviku, susijusiu su stromos fibroblastu, atsižvelgiant į jų pripažintą vaidmenį vėžio progresavime (Orimo ir kt., 2001; Shekhar ir kt., 2001; Desmouliere ir kt., 2004; Micke ir Ostman, 2004; Nakagawa et al, 2004; Tang et al, 2004; Galiè et al, 2005; Micke and Ostman, 2005; Sugimoto et al, 2005; Cat et al, 2006; Ide et al, 2006; Patocs et al, 2007).

Šio tyrimo tikslas - iš gerai apibūdintos 39 pacientų grupės nustatyti GSTPi ekspresiją invazinėse krūties vėžio ląstelėse ir su krūties naviku susijusiose stromos ląstelėse bei pastarųjų ląstelių tapatumą imunohistocheminio dažymo metodu iš eilės suplanuotų audinių biopsijos mėginių pjūviuose. sergant pirminiu invaziniu krūties vėžiu ir atitinkamų aksilinių limfmazgių metastazėmis. Gerybinių krūties audinių mėginių sekcijos be jokių aptinkamų vėžio ląstelių buvo panaudotos kaip teigiamos GSTPi ir vimentino ekspresijos kontrolės, o neigiamos α- SMA ekspresijai. Vimentino teigiami fibroblastai gerybiniuose krūties audinio skyriuose buvo nuolat neigiami α- SMA, žinomo CAF žymens, ekspresijai. Be to, nustatyta, kad GSTPi yra vienodai ir nuosekliai ekspresuojamas luminalinėse epitelio ir mioepitelinėse ląstelėse gerybiniuose krūties kanaluose ir aciniose. Šie rezultatai atitinka tuos, apie kuriuos pranešė kiti (Terrier et al, 1990). Stebėjimas rodo, kad tiek luminalinės epitelio, tiek mioepitelinės ląstelės, turinčios homogeninę GSTPi ekspresiją, gali padėti apsaugoti normalų ar gerybinį krūties audinį nuo neigiamo aplinkos teršalų ir kancerogenų poveikio.

GSTPi teigiamos krūties vėžio ląstelės buvo aptiktos tiek pirminėje, tiek metastazavusiose vietose devyniais atvejais. Šis pacientų pogrupis, kuris nuolatos ekspresuoja GSTPi vėžio ląstelėse, greičiausiai prisidės prie atsparumo chemoterapiniams vaistams vystymosi mechanizmu, kuris galėtų būti panašus į tą, kurį normalios ląstelės naudoja norėdami neutralizuoti aplinkos kancerogenų citotoksinį poveikį (Brockstedt ir kt., 2002). ; Su ir kt., 2003; Arai ir kt., 2008). Priešingai, krūties vėžio ląstelės, neigiamos GSTPi ekspresijai tiek pirminėje, tiek metastazavusiose vietose, buvo rastos 29 iš 39 (74%) porų. Buvo nustatytas statistiškai reikšmingas ryšys tarp pacientų, turinčių GSTPi neigiamas krūties vėžio ląsteles, ir GSTPi teigiamų CAF, tiek pirminėje, tiek metastazavusiose vietose, esant 95% pasikliautiniems intervalams (2 lentelė). Asociacija yra pakankamai didelė, kad jos negalima paaiškinti vien atsitiktiniu atsitiktinumu. Tai yra, apskaičiuojant P vertę, atsižvelgiama į imties dydį, taip pat į asociacijos dydį. Iš principo gali būti tikimasi, kad šis pacientų, sergančių GSTPi neigiamomis vėžinėmis ląstelėmis, atsakas į chemoterapinių preparatų vartojimą. Tačiau GSTPi neigiamos vėžio ląstelės gali išsivaduoti iš citotoksinio chemoterapinių agentų poveikio, jas neutralizuodamos, išskirdamos GSTPi iš visur esančio GSTPi teigiamo CAF naviko mikroaplinkoje, kaip aptarta toliau.

Priešingai nei gerybinis krūties audinys, auglio mikroaplinkoje buvo pastebėtas statistiškai reikšmingas ryšys tarp teigiamų vimentino ir α -SMA teigiamų fibroblastų pirminėje ir metastazavimo vietose. Pranešama, kad α- SMA ekspresija fibroblastuose yra viena iš fenotipinių savybių, identifikuojančių šias ląsteles kaip CAF (Tuxhorn ir kt., 2002; Mishra ir kt., 2008). Šiame tyrime labai reikšmingu atvejų CAF buvo teigiama GSTPi ekspresija. Šie naviko mikroaplinkos GSTPi teigiami CAF gali padėti apsaugoti GSTPi neigiamas vėžio ląsteles, katalizuodami GSTPi tarpininkaujamas reakcijas, kurios neutralizuotų chemoterapinius agentus šiame pacientų pogrupyje. Tokios vėžio ląstelės, jei naviko mikroaplinkoje nėra GSTPi teigiamo CAF, priešingu atveju būtų jautrios citotoksiniam chemoterapinių agentų poveikiui. Iš tiesų, neseniai atlikti tyrimai pranešė apie kaulų čiulpų stromos ląstelių vaidmenį saugant mieloproliferacinius neoplazmus ar ūminę mieloleukemiją nuo atitinkamai JAK2 ar FLT3 tirozinkinazės inhibitorių poveikio (Manshouri ir kt., 2011; Parmar ir kt., 2011). Šie tyrimai aiškiai parodo navikinių mikroaplinkos ląstelių vaidmenį saugant vėžio ląsteles nuo numatomo gydymo poveikio.

Pripažįstama, kad be GSTPi, kiti mediatoriai, turintys atsparumą daugeliui vaistų, taip pat dalyvauja kuriant cheminį atsparumą pacientams, sergantiems krūties karcinoma (Morrow ir kt., 1998). Tačiau šio tyrimo metu parodytas per didelis GSTPi ekspresijos rodiklis, kai α -SMA teigiamas CAF yra naujas, ir kyla galimybė, kad jų buvimas naviko mikroaplinkoje gali būti prisidedantis veiksnys, kuris gali veikti atskirai arba kartu su kitais veiksniais, sukeliančiais cheminis atsparumas pacientams, kuriems yra GSTPi neigiamos krūties vėžio ląstelės. Taigi metodas, kuriuo vienu metu siekiama nukreipti tiek į GSTPi teigiamas vėžio ląsteles, tiek į GSTPi teigiamas CAF naviko mikroaplinkoje, žada kaip efektyvesnis metodas įveikti cheminį atsparumą pacientams, sergantiems krūties vėžiu.

Kadangi nėra informacijos apie klinikinius tolesnius veiksmus, susijusius su pasikartojančiu ar atsparumo chemoterapiniams vaistams vystymuisi šioje pacientų grupėje, GSTPi ekspresija CAF negalėjo būti įvertinta kaip potencialus prognostinis žymeklis. Šiuo atžvilgiu organizuojamas tolesnis tyrimas, skirtas retrospektyviai nustatyti GSTPi ekspresijos CAF veiksmingumą, kaip potencialų prognostinį žymenį cheminio atsparumo vystymuisi didesniam skaičiui pacientų, sergančių invaziniu krūties vėžiu.

Pokyčių istorija

Šis darbas publikuojamas pagal standartinę licenciją skelbti sutartį. Po 12 mėnesių darbas taps laisvai prieinamas, o licencijos sąlygos bus perkeltos į „Creative Commons“ priskyrimo - nekomercinio - bendro naudojimo - nepanaudotą 3.0 licenciją.