Didelio branduolio karioferino α 2 ekspresija yra stipri ir nepriklausoma biocheminio pasikartojimo prognozė prostatos vėžiu sergantiems pacientams, kuriems taikoma radikali prostatektomija | šiuolaikinė patologija

Didelio branduolio karioferino α 2 ekspresija yra stipri ir nepriklausoma biocheminio pasikartojimo prognozė prostatos vėžiu sergantiems pacientams, kuriems taikoma radikali prostatektomija | šiuolaikinė patologija

Anonim

Dalykai

  • Patologija
  • Prognostiniai žymekliai
  • Prostatos vėžys

Anotacija

Apibūdinta, kad padidėjęs α 2 karioferino (KPNA2) raiškos lygis yra susijęs su bloga įvairių piktybinių navikų prognoze. Šis tyrimas buvo atliktas siekiant įvertinti KPNA2 raiškos klinikinį poveikį ir jo ryšį su pagrindiniais genomos pokyčiais prostatos vėžyje. Audinių mikrotraumoje, kurioje yra 11 152 prostatos vėžio pavyzdžių, buvo atlikta imunohistochemija, siekiant nustatyti KPNA2 raišką. Rezultatai buvo palyginti su onkologiniais stebėjimo duomenimis ir genomo pokyčiais, tokiais kaip TMPRSS2-ERG suliejimai ir PTEN , 5q21, 6q15 ar 3p13 delecijos. Nustatyta, kad KPNA2 raiškos gerybinėse prostatos liaukose nebuvo arba jos buvo silpnos, o 68, 4% iš 7964 aiškinamų prostatos vėžio atvejų jis buvo silpnas, vidutinio sunkumo ar stiprus. KPNA2 pozityvumas buvo reikšmingai susijęs su ERG pertvarkymu ( P <0, 0001). Esant ERG neigiamam ir pozityviam prostatos vėžiui, KPNA2 imuninis dažymas buvo reikšmingai susijęs su pažengusia patologine naviko stadija (pT3b / pT4), aukštu Gleasono laipsniu ir ankstyvu biocheminiu pasikartojimu (kiekvienas p <0, 0001). Daugybinė kintamoji analizė, apimanti visus nustatytus prognozuojamus kriterijus po operacijos, parodė, kad KPNA2 prognostinis vaidmuo ( P = 0, 001) nepriklausė nuo aukšto Gleasono laipsnio, pažengusio patologinio naviko stadijos, aukšto priešoperacinio prostatos specifinio antigeno lygio ir teigiamo chirurginio paraštės būklės ( P <0, 0001). kiekvienas). Palyginus KPNA2 raišką su PTEN , 5q21, 6q15 ir 3p13 delecijomis ERG teigiamame ir neigiamame vėžyje, nustatyta stipri sąsaja su PTEN delecijomis abiejuose pogrupiuose ( P <0, 0001). Apibendrinant galima teigti, kad dėl tvirto nepriklausomo prognostinio KPNA2 ekspresijos poveikio kyla tikimybė, kad vien tik KPNA2 ekspresijos matavimas arba kartu su kitais molekuliniais parametrais gali būti kliniškai naudinga informacija. Duomenys taip pat pabrėžia svarbų branduolinės energijos importo mechanizmo funkcionalumo vaidmenį prostatos vėžio biologijoje.

Pagrindinis

Prostatos vėžys yra labiausiai paplitęs vyrų piktybinis procesas Vakarų visuomenėse. 1 Nors nemaža prostatos vėžio dalis yra gana nuolaidi, prostatos vėžys yra pagrindinė vyrų su vėžiu susijusios mirties priežastis. Nepaisant naujausių tyrimų pranašumų, šiuo metu vieninteliai nustatyti prognoziniai ikiprognozavimo parametrai yra Gleason laipsnis, naviko mastas biopsijose, priešoperacinis prostatos specifinis antigenas (PSA) ir klinikiniai parametrai. Šie duomenys yra statistiškai galingi, tačiau jų nepakanka optimaliems individualiems gydymo sprendimams priimti. Galima tikėtis, kad molekulinių ypatybių analizė ateityje leis geriau prognozuoti naviko agresyvumą.

Karioferinai yra tirpūs branduolio pernešimo receptoriai, panaudojantys branduolių porų kompleksą, kad gabentų krovininius baltymus ir tam tikras RNR į ląstelės branduolį ir iš jo. 2 α2-karioferinas (KPNA2) priklauso karioferinų šeimai ir buvo apibūdinta kaip turintis onkogeninį vaidmenį keičiant vėžiui svarbių krovinių baltymų tarpląstelinę lokalizaciją. Įtariama, kad 3 KPNA2 dalyvauja ląstelių proliferacijoje, diferenciacijoje, ląstelių ir matricų adhezijoje, kolonijų formavime ir migracijoje. 4, 5, 6, 7 padidėjęs KPNA2 ekspresijos lygis, palyginti su normaliu audiniu, buvo aprašytas įvairių piktybinių navikų, įskaitant krūties vėžį, 8 melanomą, 9 kiaušidžių vėžį 10 ir astrocitomą. 11

Buvo aprašytas branduolinio KPNA2 baltymo ekspresijos reguliavimas prostatos vėžio audinyje ir nustatyta, kad KPNA2 ekspresijos lygis yra susijęs su PSA pasikartojimu po radikalios prostatektomijos 707 pirminiu prostatos vėžiu sergančių pacientų grupėje. 4 In vitro eksperimentai parodė, kad KPNA2 slopinimas sumažino PC3 ląstelių proliferaciją ir gyvybingumą. Aptikus TMPRSS2: ERG sintezuotas prostatos vėžys yra padalijamas į sintezės teigiamų ir neigiamų navikų pogrupius, kurie yra susieti su kitais genomo pokyčiais, įskaitant PTEN ir 3p13 ir sintezės teigiamus sintezę bei delecijas. 5q21 ir 6q15 esant sintezės neigiamam vėžiui. 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 Kadangi visi šie išbraukimai buvo susieti su bloga paciento prognoze, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, mes hipotezuojame, kad KPNA2 prognostinė vertė gali būti pakeistas dėl šių pakeitimų buvimo ar nebuvimo. Norėdami sužinoti daugiau apie galimą KPNA2 baltymų analizės klinikinį naudingumą ir jo ryšį su žinomais pagrindiniais prostatos vėžio molekuliniais pokyčiais, buvo panaudotas audinių mikrotraumas (TMA), kuriame yra 11 152 prostatos vėžio pavyzdžių su klinikiniais stebėjimais, ir pridedama molekulinė duomenų bazė. Mūsų duomenys rodo, kad didelis KPNA2 dažymas yra stiprus ir nepriklausomas prostatos vėžio prognostinis žymeklis.

medžiagos ir metodai

Pacientų

Radikaliosios prostatektomijos mėginiai buvo įvertinti iš 11 152 pacientų, kuriems 1992– 2011 m. Buvo atlikta chirurgija Urologijos skyriuje ir Hamburgo Eppendorfo universiteto medicinos centro „Martini“ klinikose. Iš viso stebimi 9628 pacientai, kurių stebėjimo mediana buvo 36, 8 mėnesio (diapazonas: 1–228 mėnesiai; 1 lentelė). PSA vertės buvo išmatuotos po operacijos, o pasikartojimas buvo apibrėžtas kaip pooperacinis PSA, kuris buvo 0, 2 ng / ml ir padidėjo pirmą kartą pasirodžius. Visi prostatos mėginiai buvo analizuojami pagal standartinę procedūrą, įskaitant visos prostatos įdėjimą į histologinę analizę. 20 TMA gamybos procesas anksčiau buvo išsamiai aprašytas. 21 Šio tyrimo tikslais buvo peržiūrėti visi hematoksilinu ir eozinu dažyti histologiniai pjūviai iš visų prostatektomijos mėginių ir navikai buvo pažymėti plokštelėse. Viena 0, 6 mm audinio šerdis buvo išmušta iš anksto pasirinkto kiekvieno naviko srities ir perkelta į TMA. Punch vieta buvo pasirinkta taip, kad joje būtų kuo didesnė naviko ląstelių frakcija. Audiniai buvo paskirstyti į 24 TMA blokus, kiekviename iš jų buvo 144–522 naviko pavyzdžių. Vėžio audinio buvimas ar nebuvimas buvo patvirtintas imunohistochemine AMACR ir 34BE12 analize gretimose TMA sekcijose. Vidaus kontrolėje kiekviename TMA bloke taip pat buvo įvairių kontrolinių audinių, įskaitant normalų prostatos audinį. Prie šios TMA pridėtoje molekulinėje duomenų bazėje yra ERG ekspresijos rezultatai, atlikti atliekant 9628 ERG lūžio fluorescencijos in situ hibridizacijos (FISH) analizę 6106 (išplėsta iš Minner ir kt., 22 ) ir 5q21 delecijos būseną 3037 m., 16 6q15 3528 m. išsiplėtė iš Kluth ir kt. 15 ), PTEN 6130 17 ir 3p13 1290 (nepaskelbti duomenys) navikų.

Pilno dydžio lentelė

Imunohistochemija

Šviežiai išpjaustytos TMA sekcijos buvo imuniškai apsaugotos vieną dieną ir per vieną eksperimentą. Buvo panaudotas pirminis antikūnas, specifinis KPNA2 (polikloninis; triušis, Abcam; kat. Nr. Ab84440; skiedžiant santykiu 1/150), stikleliai buvo deparafinuoti ir 5 min. Veikiami karščio sukeltos antigeno savybės autoklave 121 ° C temperatūroje. Tris-EDTA buferis (pH 9). Tada surištas antikūnas buvo vizualizuotas naudojant „EnVision Kit“ (Dako). Vienas patyręs asmuo išanalizavo visas dėmes (KG). KPNA2 ekspresija vyravo branduolyje, o ląstelių citoplazmoje buvo mažesnis ekspresijos lygis. Branduolinis KPNA2 dažymas buvo įvertintas pagal šią balų sistemą: dažymo intensyvumas (0, 1+, 2+ ir 3+) ir teigiamų naviko ląstelių dalis buvo užregistruoti kiekvienoje audinio vietoje. Remiantis anksčiau aprašytais parametrais buvo sudarytas galutinis imunohistochemijos (IHC) balas: 23, 24, 25 neigiamose balose visiškai nebuvo dažymo, silpnuose punktuose dažymo intensyvumas buvo 1+ ≤ 70% naviko ląstelių arba dažymo intensyvumas 2+. ≤ 30% navikinių ląstelių; vidutinio sunkumo balų dažymo intensyvumas buvo 1+> 70% naviko ląstelių, 2+ dažymo intensyvumas> 30%, bet ≤ 70% naviko ląstelių, arba dažymo intensyvumas 3+, kai ≤ 30% naviko ląstelių; ir stiprių balų dažymo intensyvumas buvo didesnis nei 2%> 70% naviko ląstelių arba 3+ dažymo intensyvumas> 30% naviko ląstelių. Citoplazminis KPNA2 dažymas buvo retas, paprastai susijęs su dideliu branduolinio dažymo lygiu, todėl nebuvo laikomas analize.

Statistika

Statistiniai skaičiavimai buvo atlikti naudojant JPM 9 programinę įrangą (SAS institutas, Cary, NC, JAV). Nepaprastosios padėties lentelės ir χ 2 testas buvo atlikti siekiant nustatyti ryšius tarp molekulinių parametrų ir naviko fenotipo. Išgyvenimo kreivės buvo apskaičiuotos pagal Kaplan – Meier. Log-rank testas buvo pritaikytas reikšmingiems išgyvenamumo skirtumams tarp grupių nustatyti. Patikrinta patologinių, molekulinių ir klinikinių kintamųjų statistinė nepriklausomybė ir reikšmingumas buvo atlikta Cox proporcingos rizikos regresijos analizė.

Rezultatai

Techniniai nesklandumai

Iš viso 3188 iš 11 152 masyvo sudarytų audinių mėginių (28, 6 proc.) Buvo neinformatyvūs KPNA2 IHC, nes visiškai trūko audinio arba nebuvo vienareikšmių vėžinių ląstelių.

KPNA2 IHC

KPNA2 raiška vyravo branduolyje, retai lydima dar mažesnio dažymo lygio ląstelių citoplazmoje. KPNA2 ekspresijos nebuvo arba jis rodė silpną dažymą gerybinėse prostatos liaukose. Taigi piktybinėje prostatoje KPNA2 ekspresijos lygis buvo didesnis, palyginti su gerybiniu audiniu. Prostatos karcinomos atveju teigiamas dažymas KPNA2 buvo nustatytas 5443 iš mūsų 7964 aiškinamų prostatos vėžio atvejų (68, 3%) ir buvo laikomas silpnu 32%, vidutiniu 17, 8% ir stipriu 18, 5% atvejų. Tipiniai TMA, dažyto KPNA2 antikūnais, elementai yra pateikti 1 paveiksle.

Image

Tipiniai ( a ) nėra ir ( b ) stiprios KPNA2 ekspresijos elementai prostatos vėžyje.

Visas dydis

KPNA2 vs ERG būsena

Norėdami įvertinti, ar KPNA2 raiška yra susijusi su ERG būkle prostatos vėžyje, pasinaudojome prie mūsų prie TMA pridėtos duomenų bazės, įskaitant duomenis apie TMPRSS2-ERG sintezės būklę, kurią FISH nustatė 5036 navikuose ir IHC 7787 navikuose, kuriuos dažė ir KPNA2. prieinama. Padidėjusi KPNA2 ekspresija buvo stipriai susijusi su TMPRSS2-ERG pertvarkymu ir ERG baltymo ekspresija (kiekviena P <0, 0001; 2 paveikslas). Atitinkamai, ryšys tarp KPNA2 ekspresijos ir histologinio fenotipo bei klinikinių vėžio ypatybių buvo apskaičiuotas atskirai ERG teigiamam ir neigiamam prostatos vėžio pogrupiams (2 ir 3 lentelės). Abiejose grupėse aukšta KPNA2 raiška buvo reikšmingai susijusi su nepalankiu naviko fenotipu. Padidėjusi KPNA2 ekspresija buvo glaudžiai susijusi su pažengusia naviko stadija (kiekviename P <0, 0001), aukštu Gleason laipsniu (kiekviename P <0, 0001) ir teigiamu mazgo įsitraukimu ( P <0, 0001 ir P = 0, 0325) (2 ir 3 lentelės).

Image

KPNA2 raiškos ryšys su ERG būkle, parodytas fluorescencijos in situ hibridizacijos analizės ir imunohitochemijos (kiekviena P <0, 0001) atžvilgiu.

Visas dydis

Pilno dydžio lentelė

Pilno dydžio lentelė

Ryšys su kitomis pagrindinėmis genominėmis trintimis sergant ERG ir teigiamais prostatos vėžiais

Naujausi tyrimai pateikė įrodymų apie skirtingus prostatos vėžio molekulinius pogrupius, kuriuos apibūdina TMPRSS2-ERG suliejimai ir kelios genominės delecijos. Mes ir kiti aprašėme tvirtą PTEN ir 3p13 delecijų ryšį su ERG teigiamumu ir 5q21 ir 6q15 delecijų ryšį su ERG neigiamumu. 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 Norint įvertinti, ar dažymas KPNA2 gali būti ypač susijęs su viena iš šių genominių delecijų, imunohistocheminiai rezultatai buvo palyginti su ankstesniais atradimais apie PTEN , 3p13, 6q15 ir 5q21 delecijas. Visų navikų analizė parodė reikšmingas KPNA2 ekspresijos į šias delecijas asociacijas ar bent jau stiprias tendencijas (3 pav.). Vėliau atlikta ERG teigiamų ir neigiamų vėžio pogrupių analizė parodė, kad abiejuose pogrupiuose išliko stiprus ryšys tarp KPNA2 ekspresijos ir PTEN delecijų ( P <0, 0001; 4 ir 5 pav.). ERG neigiamame vėžyje taip pat buvo stiprus 6q15 ir 5q21 delecijų ryšys su didele KPNA2 ekspresija (kiekviena P <0, 0001; 4 paveikslas).

Image

KPNA2 ekspresija palyginti su delecijomis PTEN ( P <0, 0001), 3p13 ( P = 0, 03), 6q15 ( P <0, 0001) ir 5q21 ( P = 0, 0537), tiriama fluorescencijos in situ hibridizacijos analize visais prostatos vėžiais.

Visas dydis

Image

KPNA2 ekspresija palyginti su delecijomis PTEN ( P <0, 0001), 3p13 ( P = 0, 7514), 6q15 ( P <0, 0001) ir 5q21 ( P <0, 0001), tiriama naudojant fluorescencinę in situ hibridizacijos analizę ERG neigiamame vėžyje.

Visas dydis

Image

KPNA2 ekspresija palyginti su delecijomis PTEN ( P <0, 0001), 3p13 ( P = 0, 1622), 6q15 ( P = 0, 027) ir 5q21 ( P = 0, 2662), tiriama fluorescencine in situ hibridizacijos analize ERG teigiamų vėžių atvejais.

Visas dydis

Ryšys su PSA pasikartojimu

Buvo stebimi 6853 pacientai, turintys informatyvius KPNA2 duomenis. Stiprus KPNA2 dažymas buvo susijęs su ankstyvu biocheminiu visų vėžio atvejų pasikartojimu, taip pat su 3731 ERG neigiamo ir 2960 ERG teigiamo vėžio pogrupiais (kiekvienas p <0, 0001; 6a – c paveikslai). Tolesnė analizė, apimanti PTEN delecijos būseną, atskleidė, kad KPNA2 ekspresija vis dar buvo tinkama 3372 PTEN neišbrauktų vėžio pogrupyje ( P <0, 0001; 6d pav.). Šis reikšmingas ryšys išliko tiek iš PTEN neišbrauktų ERG neigiamų, tiek ir teigiamų navikų ( P <0, 0001 ir P = 0, 0009; 6e ir f paveikslai). KPNA2 ekspresijos lygis nepateikė papildomos prognozinės informacijos mažesniame pogrupyje iš 798 PTEN ištrintų vėžio atvejų ( P = 0, 6082; duomenys nepateikti).

Image

KPNA2 imuninio dažymo intensyvumo ryšys su biocheminiu pasikartojimu: a ) visų vėžio atvejų ( n = 6853; P <0, 0001), b ) ERG neigiamų vėžių ( n = 3731; P <0, 0001), c ) ERG teigiamų vėžių ( n) = 2960; P <0, 0001), d ) PTEN - neišbraukti vėžiai ( n = 3372; P <0, 0001), e ) PTEN - neišbraukti ERG neigiami vėžiai ( n = 1983; P <0, 0001) ir f ) PTEN neišbraukti ERG teigiami vėžiai ( n = 1370; P = 0, 0009). PSA, prostatos specifinis antigenas.

Visas dydis

Daugiamatė analizė

Daugybinė kintamoji analizė, apimanti nustatytus prognostinius kriterijus, prieinamus po operacijos, atskleidė nepriklausomą prognostinį svarbą pažengusiam Gleasono laipsniui, aukštai naviko stadijai, aukštam priešoperaciniam PSA lygiui ir teigiamam chirurginio paraštės statusui (kiekvienam P <0, 0001), taip pat KPNA2 raiškai ( P = 0, 001). Jei mazgo būklė įtraukiama į daugiamatę analizę, absoliutus analizuojamų pacientų skaičius sumažėja nuo 6691 iki 4055 ir nepriklausomas prognozinis reikšmingumas buvo nustatytas tik pažengusiam Gleason laipsniui, aukštam naviko laipsniui, aukštam priešoperaciniam PSA lygiui, teigiamam mazgo statusui ir teigiamam chirurginiam kraštui. statusas ( P <0, 0001 kiekvienas), bet ne KPNA2 imuniniam dažymui ( P = 0, 059). Daugybinė kintamųjų analizė, apimanti tik kriterijus, prieinamus prieš operaciją, pavyzdžiui, maksimalų Gleasono laipsnį biopsijose, klinikinę stadiją ir ikioperacinį PSA lygį, dar kartą atskleidė tvirtą nepriklausomą prognostinę svarbą pažengusiai biopsijai Gleason laipsnis, pažengusi klinikinė stadija, aukštas PSA lygis ir taip pat KPNA2 raiška ( P <0, 0001 kiekvienas). Atliekant šiuos statistinius skaičiavimus, visi kintamieji (įskaitant tuos, kurie galimi prieš ir po operacijos) buvo naudojami tose pačiose kategorijose, kaip parodyta 1 lentelėje.

Diskusija

Mūsų tyrimo rezultatai nustato, kad KPNA2 raiška yra potencialiai kliniškai naudingas prostatos vėžio prognostinis žymeklis.

Imunohistocheminiais tyrimais nustatyta, kad 68, 3% iš 7964 aiškinamų prostatos vėžio, gydomų radikalia prostatektomija, 68–50 proc. Viename ankstesniame tyrime, atliekant prostatos vėžio TMA KPNA2 IHC, buvo aprašyta branduolinė KPNA2 ekspresija 47% iš 606 aiškinamų prostatos vėžio atvejų. 4 Šiek tiek skirtingi šio tyrimo ir mūsų tyrimo rezultatai greičiausiai atsiranda dėl skirtumų tarp IHC protokolų ir taškų nustatymo sistemų. Pavyzdžiui, mūsų tyrime KPNA2 aptikti buvo panaudotas triušio antikūnas iš „Abcam“, o Mortezavi ir kt. 4 naudojo pirminį ožkos antikūną iš „Santa Cruz Biotechnology“. Taip pat labai skyrėsi balų sistema. Tiriant Mortezavi ir kt. , 4 buvo pasirinktas vidutinis branduolinis KPNA2 imunoreaktyvumas prostatektomijos atvejais (mediana 0%) ir atitinkamai teigiamas branduolinis KPNA2 imunoreaktyvumas buvo apibrėžtas kaip branduolinis dažymas mažiausiai 0, 1% tikslinių ląstelių. Mūsų tyrime buvo naudojamas iš anksto nustatytas balas, kuris buvo sudarytas kiekvienai audinio vietai pagal du parametrus, dažymo intensyvumą (0, 1+, 2+ ir 3+) ir teigiamų naviko ląstelių dalį. 23, 24, 25

Mūsų balų sistema pagrįsta tuo, kad dažymo intensyvumas yra mažiau patikimas nei dažytų naviko ląstelių dalis. Svarbu pažymėti, kad su fiksacija susiję dažymo intensyvumo pokyčiai yra neatsiejama IHC eksperimentų ypatybė. Pavyzdžiui, 2+ dažymo intensyvumas gali parodyti tikrąją vidutinio lygio baltymų ekspresiją optimaliomis fiksacijos sąlygomis, tačiau taip pat gali atsirasti dėl „nepakankamo“ aukšto lygio ekspresijos, jei fiksacija nėra optimali. Priešingai, dažytų navikų ląstelių daliai fiksacijos kokybė praktiškai neturi įtakos. Mūsų balų sistema buvo apibrėžta atsižvelgiant į šiuos faktus. Pavyzdžiui, 1+ vėžys, turintis 70% dažytų naviko ląstelių, laikomas „vidutinio sunkumo“ laipsniu, nes mes manome, kad didelė beicuotų ląstelių dalis yra svarbesnė nei mažas dažymo intensyvumas, kuris gali būti dėl silpno imunoreaktyvumo. Atvirkščiai, 2+ vėžys su ≤30% dažytų ląstelių laikomas „silpnu“, nes jame yra tik nedidelė dalis teigiamų navikų ląstelių, nors audinio mėginys tikriausiai buvo optimaliai imunoreaktyvus. Tačiau 30–70 proc. Slenksčiai buvo parinkti beveik savavališkai, remiantis patirtimi, kad daugelyje ankstesnių tyrimų jie suteikia tvirtų rezultatų aptikdami reikšmingus ryšius tarp molekulinių žymenų ir klinikinės patologinės naviko ypatybių. 23, 24, 25 Taigi, šie radiniai yra dar vienas TMA technologijos, tvirtos genotipo / fenotipo asociacijų identifikavimui, tvirtumo pavyzdys. Naudodamiesi mūsų prostatos vėžio TMA, mes anksčiau įrodėme kelių žinomų ir naujų molekulinių žymenų prostatos vėžyje, įskaitant Ki-67, 26 PTEN , 17 p53, 20 8p, 27 6q15 arba CRISP3, prognostinę svarbą. 24

Ryškiausias aukšto lygio KPNA2 dažymo ryšys su ankstyvu PSA pasikartojimu yra reikšmingiausias šio tyrimo rezultatas. Stebėtina, kad aukšto KPNA2 ekspresijos lygio prognostinis pobūdis nepriklausė nuo galingų prognostinių veiksnių, tokių kaip Gleasono laipsnis, naviko stadija ir chirurginės pakraščio būklė (7 paveikslas), ypač todėl, kad KPNA2 ekspresija buvo analizuojama tik minutiniu audinio pavyzdžiu, kurio kiekvieno naviko dydis buvo 0, 6 mm. .

Image

Biocheminio pasikartojimo ryšys su a ) Gleasono laipsniu, b ) naviko stadija, c ) limfmazgių būkle ir d ) chirurginės pakraščio būsena (kiekviena P <0, 0001). PSA, prostatos specifinis antigenas.

Visas dydis

Anksčiau buvo pasiūlyta, kad kelių navikų mėginių branduolių analizė galėtų pagerinti TMA tyrimų reprezentatyvumą. 28 Ši rekomendacija buvo grindžiama geresniu didelių pjūvių duomenų suderinamumu su TMA duomenimis, jei kiekvienam vėžiui buvo naudojamos 3–4 šerdies, palyginti su tik vienu mėginiu. Tačiau šie atradimai buvo pagrįsti prielaida, kad audinyje gali būti reikšmingas heterogeniškumas, kurį apibūdina standartinis 3 × 4 cm 2 parafino blokas, ir kad didelio pjūvio analizė yra pasirinktas metodas naviko heterogeniškumui įvertinti. Mūsų nuomone, ši prielaida yra labai abejotina. Anksčiau parodėme, kad TMA formatas paprastai yra pranašesnis už didelių skyrių tyrimus, siekiant atskleisti ryšius tarp molekulinių žymenų ir klinikinės eigos. Šiame tyrime mes palyginome TMA ir p53, ER ir PR didžiojo pjūvio radinius, susijusius su krūties vėžiu, ir parodėme, kad per didelis židinio p53 pozityvumo aiškinimas dideliuose pjūviuose užgožia nustatytą p53 prognostinę svarbą, kuri, be abejo, buvo nustatyta TMA formatas. 29 Neseniai mes išplėtėme šias analizes prostatos vėžiui ir išsamiai ištyrėme branduolių skaičiaus įtaką prognozuojamam Ki-67 ir p53 poveikiui prostatos vėžiui. 30 Šiame tyrime buvo išanalizuoti mūsų dabartinio prostatos vėžio TMA navikų pogrupio ( n = 3261) branduoliai. Rezultatai atskleidė, kad randamos tos pačios reikšmingos asociacijos tarp Ki-67 ar p53 ekspresijos ir padidėjusio naviko stadijos aukšto Gleason laipsnio ar ankstyvo PSA, neatsižvelgiant į tai, ar trys audinių šerdies buvo analizuojamos atskirai, ar iš trijų šerdžių buvo gautas bendras rezultatas. Šie duomenys rodo, kad kelių branduolių panaudojimas TMA nebūtinai padidina gebėjimą nustatyti biomarkerių asociacijas su naviko fenotipu ir prognoze. Pastaruoju metu mes pristatėme savo „heterogeniškumo TMA platformą“, skirtą nustatyti vidinį ir tarpfokalinį ERG sintezės heterogeniškumą prostatos vėžiui nustatyti. Šio TMA formato racionalumas buvo grindžiamas hipoteze, kad vėžio progresavimo metu atsiranda daugybė subklonų ir kad šie subklonai gali būti identifikuojami tik tada, kai analizuojama visa naviko masė, o ne viena, iš anksto pasirinkta naviko blokada. Šiam tyrimui mes pagaminome TMA iš radikalių prostatektomijos pavyzdžių iš 190 pacientų. Kiekviena prostata buvo visiškai išpjaustyta, ir visi audinių blokai buvo patikrinti, ar nėra vėžio. Audinių perforatoriai buvo paimti iš 10 skirtingų nuotolinių navikų turinčių kiekvienos prostatos blokų, o visi 1900 audinių perforatoriai buvo surinkti į vieną TMA. Kiekviena prostata taip pat buvo patikrinta, ar nėra daugybės nepriklausomų naviko židinių pagal nustatytus kriterijus. 32 Trumpai tariant, šio tyrimo rezultatai parodė, kad ERG išraiška dažnai (42% pacientų) buvo nevienalytė 10 šerdžių, tuo tarpu tik 16% pacientų augliai turėjo homogenišką ERG teigiamą poveikį. ERG heterogeniškumas buvo susijęs su vienu naviko židiniu (intrafokalinis heterogeniškumas) 69 atvejais (93% heterogeninių atvejų) ir tarp skirtingų naviko židinių (interfokalinis heterogeniškumas) 5 atvejais (7%). Svarbu tai, kad vieno audinio bloko heterogeniškumas buvo nustatytas tik 4 (0, 5%) audinių dėmėse iš> 700 ERG teigiamų audinių dėmių iš 103 skirtingų pacientų, o TMA branduolių išvados buvo patvirtintos atliekant didelio pjūvio analizę 14 atvejų. Kartu paėmus, šių tyrimų rezultatai aiškiai parodo, kad TMA yra pranašesni už didelių skyrių tyrimus, siekiant nustatyti kliniškai reikšmingas asociacijas, kad kelios šerdys, paimtos iš to paties donoro bloko, nepadidina tokių analizių galios ir kad atitinkamas heterogeniškumas (t. Y. ERG neigiami ir teigiami naviko subklonai) gali būti patikimai atpažįstami tik tada, kai analizuojama visa naviko dalis, bet ne tuo atveju, jei analizuojama tik maža naviko dalis, paprastai vaizduojama standartiniame 3 × 4 cm 2 audinio bloke.

Remdamiesi mūsų rezultatais, Mortezavi et al 4 taip pat pasiūlė KPNA2 ekspresiją kaip nepriklausomą biocheminio pasikartojimo prognozę. Remiantis šiais duomenimis, gali būti, kad KPNA2 ekspresija gali būti dar galingesnis prognozinis biomarkeris priešoperaciniame režime, kai nėra aiškios naviko stadijos, Gleasono laipsnio ir chirurginės pakraščio būsenos. Jei molekulių analizė atliekama šerdies adatos biopsijose, analizuojamo vėžio audinio kiekis yra panašus į TMA analizę (ar net didesnis). Bandydami modeliuoti ikioperacinį scenarijų, mes iš tikrųjų nustatėme dar stipresnį nepriklausomą KPNA2 dažymo poveikį, jei jis būtų analizuojamas kartu su priešoperaciniu PSA ir biopsijos Gleason laipsniu. Verta paminėti, kad „Gleason“ klasifikacija turi esminių apribojimų, jei ji nustatoma atliekant biopsijas. Gleasono laipsnis, nustatytas atliekant šerdies adatos biopsiją, atspindi galutinį Gleasono laipsnį, gautą atliekant rezekcijos mėginį, tik apie 65%, o pažeminimas rodo dažniausią adatos biopsijos problemą. Atrodo, kad molekulinės savybės, tokios kaip KPNA2 matavimas, bus dar naudingesnės, kai histologiniai duomenys nėra optimalūs.

Biologinė KPNA2 funkcija atitinka reikšmingą vėžio vystymosi ir progresavimo vaidmenį. Karioferinai tarpininkauja branduoliniam įvairių prostatos vėžiui reikšmingų veiksnių, tokių kaip androgenų receptorius, MYC, BCAR1 ir p53, importui. 34, 35, 36, 37 Atitinkamai ląstelių linijų funkciniai tyrimai parodė, kad KPNA2 ekspressija yra onkogeninė ir skatina vėžinių ląstelių dauginimąsi, gyvybingumą ir migraciją. 4, 5, 6, 7 Naujausi tyrimai, siejantys aukštą KPNA2 ekspresiją su neigiama klinikine 8 ir kiaušidžių vėžio, 10 melanomos, 9 ir astrocitomos 11 klinikine baigtimi, pateikia papildomus klinikinius įrodymus apie tvirtą KPNA2 reikšmę vėžio biologijoje. Tai, kad molekulių, reguliuojančių branduoliui svarbių navikinių baltymų importą, aberacijos gali turėti lemiamą vaidmenį vėžio ląstelėse, patvirtina ir naujausi pastebėjimai, kad Ran, kito svarbaus branduolio importo mechanizmo baltymo, ekspresija yra susijusi su neigiamu naviko fenotipu krūties ir plaučių vėžys. 38

Kitas šio tyrimo tikslas buvo ištirti, ar KPNA2 raiška yra susijusi su pagrindiniais prostatos vėžio genomo pokyčiais, pasinaudojant mūsų prie TMA pridėta duomenų baze. Maždaug pusė prostatos vėžio sukelia genų susiliejimą, susiejantį androgenų reguliuojamą geną TMPRSS2 su ETS šeimos transkripcijos veiksniais. 39 Dėl šio pertvarkymo ERG yra reguliuojama androgenų ir masiškai padidinta. Mūsų duomenys rodo, kad KPNA2 raiška yra reikšmingai susijusi su teigiama ERG būkle. Suradus šį ryšį dviem nepriklausomais ERG sintezės aptikimo metodais (IHC / FISH), iš esmės atmetama klaidingai teigiama asociacija dėl neefektyvaus KPNA2 ir ERG imuninio dažymo pažeistų nereaktyvių audinių pogrupyje. Suaktyvinus ERG raišką prostatos epitelio ląstelėse, atsiranda nenormalus skirtingų signalizacijos kaskadų, suaktyvinančių ląstelių adheziją, matricos rekonstravimą ir signalo perdavimą, aktyvavimas. 40, 41, 42, 43 Kyla pagunda spėlioti, kad didesnę KPNA2 raišką ERG teigiamame nei ERG neigiamame vėžyje gali paskatinti padidėjęs branduolio transportavimo pajėgumų reikalavimas šiuose navikuose. Pavyzdžiui, kelios signalizacijos kaskados, tokios kaip WNT ir TGF- β keliai, kurie, kaip žinoma, yra aktyvuojami ERG, 40, 41, 44, priklauso nuo efektyvaus jų efektorinių molekulių, įskaitant β- katenino ir SMAD, branduolinio importo. 45, 46

Tolesnėse pogrupių analizėse dalyvavo navikų populiacijos, apibrėžtos genominėmis delecijomis, kurios, kaip žinoma, yra glaudžiai susijusios su ERG būkle. Visų pirma, delecijos 3p13 ir PTEN vyksta esant ERG teigiamiems, o 5q21 ir 6q15 delecijos ERG neigiamam prostatos vėžiui. 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 Įdomu tai, kad KPNA2 dažymas buvo glaudžiai susijęs su PTEN ir 6q15 delecijomis tiek ERG neigiamo, tiek ir teigiamo vėžio atvejais. Šie radiniai gali leisti manyti, kad bet koks kelio, kuris taip pat skatina stiprią KPNA2 ekspresiją, aktyvinimas gali palengvinti PTEN ir 6q15 inaktyvaciją, arba PTEN ir 6q15 inaktyvacija gali palengvinti tam tikrų molekulinių ypatybių vystymąsi, galiausiai lemia stiprią KPNA2 ekspresiją. Pastarosios hipotezės įrodymai yra susiję su nustatytu funkciniu ryšiu tarp PTEN delecijos ir padidėjusio PI3K / AKT signalizacijos, 47 kuris, kaip įrodyta, padidina ir nukleocitoplazminės pernešimo mašinos aktyvumą, ir gebėjimą. 48, 49

ERG IHC nenustatytas pertvarkymas, įtraukiantis alternatyvius ETS šeimos narius į „sintezės tipo“ prostatos vėžį, yra alternatyvus paaiškinimas, kodėl stiprus PTEN praradimas susijęs su KPNA2 ekspresija ERG neigiamame vėžyje. Žinoma, kad PTEN delecijos yra labai glaudžiai susijusios su ERG teigiamu vėžiu. 50 Mūsų grupėje PTEN ištrinami 29, 1% ERG teigiamų, bet tik 10, 7% ERG neigiamų vėžio atvejų. 17 Nors trūksta eksperimentinių įrodymų, galima būtų spėlioti, kad PTEN delecijos taip pat pastebimai padidėja šiuose 5–10% „suliejimo tipo“ prostatos vėžių, turinčių pakaitinius pertvarkymus, kurie nesukelia ERG per didelės ekspresijos. Jei taip, stiprus KPNA2 ekspresijos ryšys su sintezės tipo prostatos vėžiu gali sukelti pastebėtą KPNA2 ir PTEN delecijų ryšį ERG neigiamame vėžyje.

Apibendrinant galima pasakyti, kad mūsų tyrimas nustatė tvirtą ryškios aukštos KPNA2 ekspresijos ir ankstyvo PSA pasikartojimo ryšį, kuris nepriklausė nuo Gleason laipsnio, naviko stadijos, pakitimo būklės ir priešoperacinio PSA lygio serijoje iš daugiau nei 6000 aiškinamų vėžio atvejų. Dar stipresnis nepriklausomas prognostinis KPNA2 ekspresijos poveikis aplinkoje, naudojant tik tuos parametrus, kurie yra operatyviai prieinami, iškelia tikimybę, kad vien tik KPNA2 ekspresijos matavimas arba kartu su kitomis molekulinėmis savybėmis gali būti kliniškai naudinga informacija.