Padidėjusi tarpląstelinės matricos metaloproteinazės induktoriaus (cd147) ekspresija sergant daugybine mieloma: vaidmuo reguliuojant mielomos ląstelių proliferaciją | leukemija

Padidėjusi tarpląstelinės matricos metaloproteinazės induktoriaus (cd147) ekspresija sergant daugybine mieloma: vaidmuo reguliuojant mielomos ląstelių proliferaciją | leukemija

Anonim

Dalykai

  • Vėžio genetika
  • Citogenetika
  • Mieloma

Anotacija

Išsėtinė mieloma (MM) pasireiškia besimptomine ikivėžine būsena, nenustatyto reikšmingumo monoklonine gamopatija (MGUS). Nors MGUS sergantys pacientai gali išlikti stabilūs metų metus, jiems yra didesnė rizika progresuoti iki MM. Skubiai reikia geriau suprasti svarbius molekulinius pokyčius, susijusius su perėjimu iš besimptomės į simptominę ligos būseną. Mūsų tyrimai pirmą kartą rodo, kad CD147 molekulė (tarpląstelinės matricos metaloproteinazės induktorius) gali atlikti svarbų biologinį vaidmenį MM. Pirmiausia parodėme, kad CD147 yra per daug ekspresuojamas MM plazmos ląstelėse (PC), palyginti su normaliais ir ikivėžiniais PC. Tada funkciniai tyrimai atskleidė, kad natūralus CD147 ligadas, ciklofilinas B, stimuliuoja MM ląstelių augimą. Be to, kai MM pacientų kompiuteriai, kuriuose rodoma bimodalinė CD147 išraiška, buvo suskirstyti į CD147 ryškias ir CD147 silpnas populiacijas ir išanalizuoti dėl proliferacijos potencialo, mes nustatėme, kad CD147 ryškūs kompiuteriai rodo žymiai aukštesnį ląstelių proliferacijos lygį nei CD147 silpni kompiuteriai. Galiausiai, CD147 nutildymas žymiai sumažino MM ląstelių dauginimąsi. Visi šie duomenys leidžia manyti, kad CD147 molekulė vaidina pagrindinį vaidmenį MM ląstelių dauginimosi procese ir gali būti patrauklus taikinys siekiant sumažinti šios ligos proliferacinį skyrių.

Įvadas

Išsėtinė mieloma (MM) yra piktybinis navikas, kuriam būdingas piktybinių plazmos ląstelių (PC), išsidėsčiusių daugiausia kaulų čiulpuose, kloninis išsiplėtimas ir apibūdinamas kaip turinčių 10% PK ir 3 g / dl monokloninio imunoglobulino (Ig). ; M-baltymas), kartu su organų galūnių pažeidimais, kurie gali apimti lytinius kaulų pažeidimus. Prieš MM pasireiškia asimptominis, ikivėžinis piktybinis sutrikimas, nenustatyto reikšmingumo monokloninė gamopatija (MGUS), 1, 2, kuris apibūdinamas kaip toks, kuriame yra <10% PK PC, M-baltymo serume <3 g / dl ir organų galūnių pažeidimų nėra. 3 Nors kloninio MGUS AK populiacija gali išlikti nepaprastai stabili metų metus, MGUS sergantiems pacientams kyla visą gyvenimą trunkanti, žymiai padidinta rizika, kad 1% per metus pasireikš apverstas MM. 3, 4 Šių pacientų gydymas nepradėtas, kol neįvyksta transformacija ir nėra rimtų galinių organų pažeidimų. 5 Nors gydant šią ligą padaryta reikšminga pažanga, MM sergančių pacientų mirtingumas ir toliau yra aukštas, o išgyvenimo mediana yra tik 4–7 metai. 6

Nors daugelis grupių, pavyzdžiui, CD19, 7, padėjo apibrėžti fenotipinius žymenis, kurie paprastai atskiria MM kompiuterius nuo normalių BM kompiuterių (NBMPC), šiuo metu nėra tokio žymeklio, kuris leistų atskirti MGUS ir MM kloninius kompiuterius arba galėtų juos atskirti. ląstelės, turinčios proliferacinį potencialą. Šiame tyrime nagrinėjama galimybė, kad CD147 molekulė gali atlikti svarbų vaidmenį MM ligos biologijoje. CD147, dar žinomas kaip tarpląstelinės matricos metaloproteinazės (MMP) induktorius, yra visur paplitęs transmembraninis glikoproteinas, priklausantis Ig superšeimai 8, o įvairios jo funkcijos buvo pastarųjų apžvalgų tema. 8, 9 Nors CD147 yra plačiai ekspresuojamas daugelio tipų ląstelėse, nors dažnai ir labai žemu lygiu, yra daugybė literatūros, apibūdinančios nenormaliai padidėjusią jo raišką žmogaus vėžyje. 10, 11, 12 Be to, įrodyta, kad CD147 lygis padidėja progresuojant nuo gerybinės ir piktybinės ligos daugelyje kietų navikų. Įrodyta, kad CD147 reguliavimas naviko ląstelėse stimuliuoja padidėjusią angiogenezę 16 ir MMP gamybą, sukeldamas tarpląstelinės matricos degradaciją, naviko augimą ir metastazes. 17 CD147 taip pat buvo pasiūlyta apsaugoti vėžines ląsteles nuo apoptozės tipo likimo, anoikio. 18 Galiausiai, CD147 jungiasi su savo natūraliais ligadais, ciklofilinu A (CypA) ir CypB, 19, 20, kartu su heparino sulfato proteoglikanais, taip skatindamas ląstelių dauginimąsi. 21 Ciklai yra ląsteliniai baltymai, kurie, kaip kadaise buvo manoma, vaidina tik tarpląstelines funkcijas. Tačiau dabar visuotinai pripažįstama, kad šie baltymai gali būti sekretuojami uždegiminėmis sąlygomis ir turi būti tirpūs tarpląstelinių tarpininkų tarpininkai. Nors pranešta, kad tarpląsteliniai CypA ir CypB palaiko antiapoptozinį poveikį ir prisideda prie STAT3 signalizacijos ir išgyvenimo MM ląstelėse, 23, mūsų žiniomis, CD147 ryšys su ciklais MM nebuvo įrodytas anksčiau.

Kadangi literatūroje yra surinkta įrodymų apie CD147 ekspresijos lygių koreliaciją su piktybine progresija, šiame tyrime mes ištyrėme CD147 ekspresijos lygius per ligos MGUS iki MM tęstinumą ir jo galimą įtaką piktybiniam PC proliferacijai.

medžiagos ir metodai

Paciento medžiaga

MGUS ir MM pacientų BM aspiratai buvo renkami kaip įprastos klinikinės apžiūros dalis. Pacientų, kuriems atliktos stuburo operacijos, neatsitiktinai padarius B-linijos piktybinius navikus, BM aspiratai buvo NBMPC šaltinis. „Mayo“ klinikos institucinė peržiūros taryba patvirtino protokolą, iš kurio reikia paimti mėginius iš sveikų donorų, taip pat iš asmenų, sergančių monoklonine gamopatija. Visi tiriamieji, iš kurių, remiantis Helsinkio deklaracija, buvo imtasi aspiracijos, davė rašytinį informuotą sutikimą dalyvauti šiame tyrime. Normalus donoro periferinis kraujas tarnavo kaip normalių B ląstelių šaltinis. BM aspirato mononuklearinės ląstelės buvo išskirtos Ficoll-Paque (GE Healthcare, Piscataway, NJ, JAV) tankio gradiento centrifugavimu. Tiek MM, tiek normalūs kompiuteriai buvo išskirti iš paciento BM aspiracijos, atskyrus magnetinius granules, naudojant žmogaus CD138 teigiamo atrankos rinkinį („StemCell Technologies“, Vankuveris, Britų Kolumbija, Kanada) ir „Robosep Cell Separator“ („StemCell Technologies“).

Periferinio kraujo B limfocitai buvo praturtinti> 95% grynumu per neigiamą atranką, naudojant „StemCell Technologies“ B ląstelių praturtinimo kokteilį. Periferinio kraujo B ląstelės buvo suaktyvintos auginant ląsteles 37 ° C temperatūroje 5% CO 2 inkubatoriuje 5 dienas, esant 10 μg / ml CpG (oligodeoksinukleotidas 2006 5′-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3 ′), interleukinas (IL) -2 (100 V / ml; Fitzgerald Industries International, Acton, MA, JAV) ir IL-15 (10 ng / ml; Peprotech, Rocky Hill, NJ, JAV).

Ląstelių linijos ir auginimo terpė

Žmogaus mielomos ląstelių linijos (HMCL) ANBL-6, 24 ALMC-2 25 ir MCG buvo gautos mūsų laboratorijoje. Nuo IL-6 nepriklausomas RPMI 8226 HMCL buvo įsigytas iš ATCC (Manassas, VA, JAV). Visi HMCL buvo palaikomi Iscove modifikuotoje Dulbecco terpėje, papildytoje 50 V / ml penicilino G, 100 μg / ml streptomicino (Invitrogen, Carlsbad, CA, JAV) ir 5% šiluminiu būdu aktyvuoto veršelio serumo serume (PAA Laboratories, Etobicoke, Ontario, Kanada). Buvo naudojamas rekombinantinis IL-6, kurio galutinė koncentracija buvo 1 ng / ml (Novartis, Bazelis, Šveicarija). Rekombinantinis IGF-I buvo naudojamas esant 10 μg / ml galutinei koncentracijai (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, JAV).

DNR sintezės testai

DNR sintezės testai, išmatuojantys [3H] -timidino (PerkinElmer, Waltham, MA, JAV) inkorporaciją, buvo atlikti, kaip aprašyta anksčiau. 26 ląstelės buvo inkubuotos Iscove modifikuotoje Dulbecco terpėje kartu su 0, 5% galvijų serumo albuminu (Celliane, Norcross, GA, JAV) su arba be 1 ng / ml IL-6 ir 10 nM CypB (Prospec, Rehovot, Izraelis) arba 37 ° C. buvimas 5% CO 2 . CD147 blokuojančių tyrimų metu ląstelės buvo inkubuotos su arba be 0, 5 μg / ml su izotipu suderintu kontroliniu Ab, turinčiu nereikšmingą specifiškumą (MOPC-21; Sigma-Aldrich), arba su α-CD147 neutralizuojančiu antikūnu (Novus Biologicals, Littleton, CO, JAV) 2 valandas prieš stimuliaciją IL-6 arba CypB. Po nurodyto inkubacijos ilgio buvo išmatuota DNR sintezė. Duomenys pateikiami kaip vidutinis trimatių mėginių [3H] -timidino įtraukimas arba duomenys iš nepriklausomų eksperimentų +/− sem

Ląstelių ciklo ir DNR kiekio analizė

Vienos branduolio ląstelės buvo inkubuojamos su visa Iscove modifikuota Dulbecco terpe, kurioje yra 10 μM bromodeoksiuridino (BrdU), prieš dažant kitą dieną, naudojant BrdU-APC srauto rinkinį (BD Biosciences, San Diegas, CA, JAV), kaip aprašyta anksčiau. 27 Ląstelės buvo nudažytos dėl CD147, po to pritvirtintos ir permeabilizuotos, prieš tai apdorojant 30 μg / ml DNR 1 valandą 37 ° C temperatūroje ir dažytos anti-BrdU. Galiausiai į mėginį buvo pridėta 7-AAD. DNR turinio analizei ląstelės buvo kultivuojamos 24 valandas prieš plaunant šaltu fosfatiniu buferiniu tirpalu, prieš tai lėtai pridedant 1 ml ledinio etanolio, maišant. Ląstelės buvo inkubuojamos per naktį -20 ° C temperatūroje, du kartus plaunamos šaltu fosfatiniu buferiniu tirpalu ir 20 minučių inkubuojamos su 50 μl RNazės A (10 μg / ml) 37 ° C temperatūroje. Iš viso į mėginius prieš atliekant analizę FACStar (BD Biosciences) buvo įpilta 400 μl 50 μg / ml propidium jodido. Duomenys buvo analizuojami naudojant FlowJo (Tree Star, Ashland, OR, JAV).

RNR išskyrimas, cDNR sintezė ir imunoglobulino sunkiosios grandinės kintamo regiono (IGHV) genų sekų analizė

Bendra ląstelių RNR buvo išgauta iš išgrynintų AKM iš MGUS ir MM pacientų bei sveikų donorų, naudojant „Trizol“ reagentą (Invitrogen). Iš viso 2 μg RNR buvo paversta cDNR naudojant „GE Healthcare“. Pirmasis „Strand Synthesis“ rinkinys ir cDNR buvo amplifikuota PGR, naudojant Qiagen (Valensija, Kalifornija, JAV) „HotStarTaq MasterMix“ rinkinį ir pradmenis, specifinius CD147 ir β-aktinui kaip vidinę kontrolę. Naudoti CD147 pradmenys buvo: priekinė 5′-ACATCAACGAGGGGAGACG-3 ′ ir atvirkštinė 5′-GGCTTCAGACAGGCAGGACA-3 ′. Amplifikacija buvo atlikta naudojant „PerkinElmer 9600“ termociklerį tokiomis sąlygomis: 94 ° C 15 min., Po to 30 ciklų 94 ° C 30 s, 57 ° C 30 s, 72 ° C 90 s ir paskutinis ciklas. 72 ° C 10 min. Mėginiai buvo elektroforeguoti 1, 5% agarozės geluose, turinčiuose etidžio bromido. IGHV analizė buvo atlikta, kaip aprašyta anksčiau. 28

Imunofenotipinė analizė

Taikant anksčiau aprašytus metodus, 25 ląstelės buvo inkubuotos su šiais antikūnais: su fikoeritrinu konjuguotu CD147 (Abcam, Kembridžas, MA, JAV), su fikoeritrinu konjuguotu pelės IgG1 izotipu kontrole (R&D, Mineapolis, MN, JAV), APC ir FITC- konjuguotos CD138, FITC ir APC konjuguotos CD19 ir FITC ir APC konjuguotos pelės IgG1 izotipų atitikties kontrolinės priemonės (BD Biosciences). CD19 buvo naudojamas atskirti normalius kompiuterius (CD138 + / CD19 + ) nuo piktybinių kompiuterių (CD138 + / CD19 - ). 7 duomenys buvo analizuojami naudojant FlowJo (Tree Star). Kai kuriose analizėse duomenys pateikiami kaip delta CD147 vidutinis fluorescencijos intensyvumas (ΔCD147 PFI), kuris apskaičiuojamas dalijant CD147 PFI iš kontrolinio antikūno PFI. Tais atvejais, kai buvo bimodalinė CD147 ekspresija, ΔCD147 MFI buvo apskaičiuojamas darant duomenis tik ant ląstelių, kurios buvo šviesios CD147.

Ląstelių išgyvenimo analizė

Tirpinant ląsteles 24, 48 ir 72 valandas, ląstelių gyvybingumui įvertinti buvo naudojamas trypano mėlynojo išskyrimas. Apoptozės tyrimams ląstelės buvo kultivuojamos galutiniame 2 ml tūryje Costar (Corning Inc., Corning, NY, JAV) 24 šulinėlių plokštelėse 72 valandas prieš dažymą Annexin-FITC (BD Biosciences) ir 7-AAD, naudojant srautą. citometrija.

Western blot analizė

Ląstelės 45 minutes lizuojamos ant ledo lizinimo buferyje, kuriame yra 10 mM Tris (pH 7, 4), 150 mM NaCl, 0, 5 m M MgCl2, 0, 5 m M CaCl 2, 10 m M NaF, 10 m M Na 4 P2O 7., 1% NP-40, 10% glicerolio, 0, 1% natrio dodecilsulfato, 2 mM EDTA, pilnas mini proteazės inhibitoriaus kokteilis ir fosSTOP fosfatazės inhibitoriaus kokteilis (Roche, Indianapolis, IN, JAV). Lizatai buvo išvalyti iš netirpių medžiagų, centrifuguojant, ir jiems buvo atlikta 10% natrio dodecilsulfato poliakrilamido gelio elektroforezė, prieš tai perkeliant juos į polivinilideno fluoro membraną (Millipore, Billerica, MA, JAV) ir užblokuoti 25 mM Tris-HCl (pH 7, 2) 150. m M NaCl ir 0, 1% Tween 20 (TBST) plius 5, 0% Blotto (ISC BioExpress, Kaysville, UT, JAV). Blotai buvo tiriami anti-CD147 antikūnais (GeneTex, Irvine, CA, JAV) praskiedžiant santykiu 1: 2500, anti-fosfo mitogenu aktyvuota baltymo kinaze (MAPK) arba anti-total MAPK santykiu 1: 1000 (NEB, Ipswich, MA, JAV) arba anti-β-aktino antikūnus (Novus) skiedžiant santykiu 1: 5000. Krienų peroksidaze konjuguoti antriniai antikūnai („GE Healthcare“) buvo naudojami skiedžiant santykiu 1: 2000. Baltymams aptikti buvo naudojamas SuperSignal (Pierce, Rockford, IL, JAV) chemiliuminescencinis substratas.

Maži trukdantys RNR (siRNR) transfekcijos parametrai

CD147 / BSG siGenome siRNR dupleksai (tikslinės sekos yra patentuoti) buvo susintetinti ir įsigyti iš Dharmacon Research, Inc. (Lafayette, CO, JAV). SiRNR dupleksų transfekcija buvo pasiekta naudojant elektroporaciją, kaip aprašyta anksčiau. 29 Trumpai tariant, ląstelės buvo transfekuotos CD147 siRNR ir vėliau pasodintos į normalią augimo terpę. Praėjus 24 valandoms po pirmosios transfekcijos, buvo atlikta antroji transfekcija CD147 siRNR ir ląstelės buvo pasodintos į normalią augimo terpę. Dvidešimt keturias valandas po antrosios transfekcijos ląstelės prieš kultūrą buvo plaunamos du kartus (2, 5x104 ląstelių kiekvienoje duobutėje, galutinio tūrio 200 μl 96 šulinėlių plokščio dugno mikrotitravimo plokštelėse, ir 2, 5x105 ląstelių kiekvienoje duobutėje, galutiniame tirpale). 2 ml tūrio 24 šulinėlių plokščio dugno plokštelės). Visos kultūros buvo atliekamos trimis egzemplioriais, naudojant 0, 5% galvijų serumo albumino ir IL-6 (1 ng / ml) 3 dienas 37 ° C temperatūroje, esant 5% CO 2 . Praėjus 48 valandoms po kultivavimo 96 šulinėlių mikrotitravimo plokštelėse, kultūros buvo impulsuojamos 1 μCi [3H] -timidinu, o po 18 valandų - ląstelės buvo surinktos ir įvertintas [3H] -timidino įsiskverbimas. Ląstelėms, auginamoms 24 šulinėlių plokštelėse, ląstelės buvo suskaičiuotos ir išanalizuotos srauto citometrijos būdu 24, 48 ir 72 valandas po antrosios transfekcijos.

Statistinė analizė

Statistinė analizė buvo atlikta naudojant Wilcoxon rango testą. Vertės P <0, 05 buvo laikomos reikšmingomis.

Rezultatai

Padidėjusi CD147 išraiška MM kompiuteriuose

Norėdami nustatyti, ar CD147 yra biologinis vaidmuo MM, mes įvertinome CD147 mRNR ekspresijos lygius išgrynintuose PC, gautuose iš serijos MGUS ir MM. Mes pastebėjome ypač aukštesnius CD147 mRNR lygius MM kompiuteriuose ir MGUS kompiuteriuose (1a pav.). 1b paveiksle pavaizduoti CD147 mRNR lygiai normalių ramybės būsenoje esančių ir aktyvuotų B ląstelių ir BM PC spektre, palyginti su MGUS ir MM pacientų PC mėginiais. Priešingai nei MM PC CD147 mRNR, CD147 mRNR lygis buvo žymiai mažesnis MGUS AK, NBMPC ir ramybės būsenoje bei aktyvuotose normaliose B ląstelėse.

Image

CD147 mRNR ekspresijos lygis yra padidėjęs pirminiuose MM pacientų AK, palyginti su MGUS pacientų AK ir normaliais mėginiais. a ) Atliekant atvirkštinės transkriptazės PGR, buvo įvertinti CD147 ir β-aktino mRNR lygiai išgrynintame CD138 + MGUS (1–3 juostos) ir MM PC (4–15 juostos), taip pat ( b ) NBMPC, CD19 + lygiuose. B ląstelės ir aktyvuotos CD19 + B ląstelės.

Visas dydis

Toliau mes ištyrėme, ar CD147 mRNR raiškos lygiai koreliuoja su MGUS ir MM PC ląstelių paviršiaus CD147 raiška. Srauto citometrinė analizė atskleidė keletą modelių (2a paveikslas, apatinės plokštės): (1) vienodas CD147 ekspresijos trūkumas (MGUS pacientas); (2) vienoda CD147 silpna ekspresija (1 MM pacientas); (3) bimodalinė CD147 išraiška (2 MM pacientas); ir (4) tolygi CD147 raiška (3 pacientas, sergantis MM). Ši metodika buvo naudojama įvertinti CD147 lygius papildomiems 17 MGUS ir 104 MM pacientams, o 2b paveikslas rodo, kad MM pacientų PC išreiškė žymiai aukštesnį CD147 lygį nei PC iš MGUS pacientų. Galiausiai atlikome Western blot analizę, kad įvertintume CD147 baltymo ekspresiją, nes šis metodas leido mums vizualizuoti glikozilinimo struktūrų skirtumus. Yra įrodymų, kad didesnė glikozilinta CD147 forma yra aktyvioji forma, nes ji sukelia MMP gamybą 17, 30, 31 ir metastazes. 32, 33 pav. 2c parodyta, kad naudojant šį metodą normaliose B ląstelėse nebuvo galima aptikti CD147, tuo tarpu MGUS kompiuteriuose buvo nustatytas labai mažas šios molekulės lygis. Priešingai, CD147 baltymas buvo akivaizdžiai matomas ANBL-6 ir ALMC-2 HMCL ir kiekviename iš keturių paciento MM PC mėginių. Įdomu tai, kad tiek HMCL, tiek MM pacientų mėginiuose buvo stebimos tiek aukštos, tiek žemos glikozilintos CD147 formos, nors ir skirtingai. Visi šie duomenys rodo, kad MM ląstelės vidutiniškai išreiškia padidėjusį CD147 mRNR ir baltymų kiekį, palyginti su MGUS AK.

Image

CD147 baltymų lygis padidėja MM pacientų AK ir HMCL. a ) CD138 + pirminio paciento AK (brūkšniuotomis linijomis) iš MGUS (kairioji panelė) ir MM (vidurinė ir dešinė plokštės) pacientų stebimi skirtingi CD147 paviršiaus išraiškos lygių modeliai. ( b ) srauto citometrija buvo naudojama CD147 ekspresijos ΔMFI nustatyti. c ) Western blot analizė patvirtina padidėjusį tiek didelio, tiek žemo lygio glikozilintų CD147 formų baltymų ekspresijos lygius HMCL ir MM pacientų mėginiuose, palyginti su normaliais CD19 + B ląstelių ir MGUS pacientų mėginiais (pacientų mėginiai, nepriklausomi nuo 2A).

Visas dydis

Padidėjusi CD147 ekspresija gali lydėti MM ligos progresavimą

Norint nustatyti, ar CD147 ekspresijos lygiai koreliuoja su MM ligos progresavimu, ištirti trijų pacientų serijiniai CD138 + MM PC mėginiai. Pradinio įvertinimo metu 1 MM pacientui buvo kliniškai diagnozuota besimptomė, bet progresuojanti liga, pastebimai padidėjęs KM PC (60%) ir IgA lygis (1610, mg / dl). 3a paveikslas parodo, kad CD147 šiame etape buvo aiškiai aptinkamas MM kompiuteriuose. Po 9 mėnesių pakartotinio įvertinimo, AK AK lygis padidėjo iki 70%, o CD147 padidėjo daugiau nei šešis kartus (3b paveikslas). Po 1 mėnesio 1 MM pacientas pasidavė ligai. 2 MM pacientas iš pradžių buvo įvertintas gavus autologinį periferinio kraujo kamieninių ląstelių transplantaciją. Šiuo metu CD147 nebuvo galima aptikti srauto citometrijos būdu (3c paveikslas). 100 dieną po periferinio kraujo kamieninių ląstelių transplantacijos pranešta, kad 2 MM pacientas gerai reaguoja į gydymą, tačiau CD147 ekspresiją dabar buvo galima nustatyti atliekant srauto citometriją (3d pav.). Praėjus vieneriems metams po periferinio kraujo kamieninių ląstelių transplantacijos, buvo nustatyta, kad pacientui recidyvuoja cirkuliuojantys AK, 50% AKT ir didelis IgA / kappa lygis (atitinkamai 1170 ir 5, 4 mg / dl). CD147 ekspresija tuo metu reikšmingai padidėjo (3e pav.). Galiausiai pirminis 3 MM paciento įvertinimas atskleidė CD147 buvimą (3f pav.). Tuo metu pacientas buvo besimptomis, tačiau susirūpinimas dėl didėjančios piktybinės BM PC populiacijos (18%) ir padidėjusios kappa lengvosios grandinės (334 mg / dl) paskatino pradėti gydymą. Tęsiant gydymą, buvo nuspręsta, kad pacientas reaguoja gerai, mažėdamas MM PC procentas ir kappa lengvosios grandinės lygis, tačiau gydytojo ataskaitoje buvo pareikštas susirūpinimas dėl galimo ligos progresavimo. Per tą laiką CD138 + MM dažymas PC parodė, kad CD147 lygis padidėjo atitinkamai iki 5, 5 ΔMFI (3g paveikslas) ir 23, 8 (ΔMFI) iki 23, 8 (3h paveikslas).

Image

CD147 ekspresijos lygis padidėja pacientams, sergantiems MM, sergantiems progresuojančia liga. CD147 paviršiaus išraiškos lygiai pirminiuose CD138 + pirminiuose MM kompiuteriuose (pilka histograma), palyginti su izotipu suderinta kontrole (juoda histograma). a ) CD147 lygis pirminiuose CD138 + MM AK iš MM paciento (1 pacientas), turinčio besimptomę, bet progresuojančią ligą (ΔMFI = 4, 9), ir b ) po 8 mėnesių (ΔMFI = 30, 2). c ) CD147 lygis CD138 + ląstelėse iš MM paciento (2 pacientas) autologinių kamieninių ląstelių transplantacijos metu (ΔMFI = 1, 0) ir d ) 100 dienų po periferinio kraujo kamieninių ląstelių transplantacijos (PBSCT) (ΔMFI = 4, 6); kuris galiausiai progresuoja iki atkryčio ( e ) praėjus vieneriems metams po PBSCT (ΔMFI = 38). f ) CD147 lygiai pirminiuose CD138 + pirminiuose MM PC, gauti iš besimptomio MM paciento, pavesto pradiniam gydymui (3 pacientas) (ΔMFI = 5), ir CD147 lygis išmatuotas praėjus 7 mėnesiams po gydymo pradžios ( g ) (ΔMFI = 5, 5) ir 11 mėnesių po gydymo pradžia, kai buvo pastebėtas labai geras dalinis atsakas į susirūpinimą dėl progresijos ( h ) (ΔMFI = 23, 8).

Visas dydis

CypB stimuliuoja mielomos ląstelių DNR sintezę

Toliau mes analizavome CypB, natūralaus CD147 ligando, sugebėjimą sukelti MM ląstelių proliferaciją. Įdomu tai, kad abiejuose nuo IL-6 priklausomuose HMCL (4a pav.) Pridėjus egzogeninio CypB, atkuriamai padidėjo DNR sintezė abiejuose HMCL, nors ir mažesniu laipsniu nei IL-6. Norėdami užtikrinti, kad reikalinga CD14 stimuliacija Cyp, mes nustatėme, ar blokuojantis monokloninį antikūną prieš CD147 slopins Cyp stimuliuotos DNR sintezę. 1 lentelėje pateikti duomenys pateikia papildomų įrodymų, kad CypB stimuliuoja HMCL DNR sintezę. Nors papildymas izotipu suderintu kontroliniu monokloniniu antikūnu (MOPC-21) neslopino CypB stimuliuoto reagavimo, pridedant CD147 blokuojantį antikūną beveik visiškai panaikino CypB stimuliuotą atsaką. Be to, anti-CD147 antikūnas taip pat šiek tiek slopino IL-6 stimuliuojamos DNR sintezės mastą, kas rodo bendresnį CD147 vaidmenį MM ląstelių proliferacijoje. Galiausiai, pridėjus blokuojantį antikūną, nuo trijų citų HMCL pastebėtas nuo citokinų nepriklausomas fono proliferacija taip pat buvo reikšmingai slopinamas. Neparodytuose eksperimentuose nustatėme, kad anti-CD147 sukeltas MM ląstelių proliferacijos slopinimas nebuvo antrinis po apoptozės indukcijos. Šie rezultatai patvirtina išvadą, kad MM ląstelių DNR sintezei stimuliuoti CypB reikia CD147 ekspresijos. Visi šie duomenys nustato tarpląstelinius ciklus kaip naujas molekules, kurios gali prisidėti prie bendro MM ląstelių proliferacijos lygio.

Image

CypB stimuliuoja HMCL ir CD147 ekspresuojančias pirmines mieloma sergančių pacientų ląsteles. ( a ) Ląstelės buvo badaujamos per naktį Iscove modifikuotoje Dulbecco terpėje + 0, 5% galvijų serumo albumino (BSA), po to, prieš auginant 3 dienas, naudojant IL-6 arba CypB, 2 dienas plaunamas 2x druskos tirpale, prieš įvertinant DNR sintezę. Duomenys parodo nepriklausomų eksperimentų reikšmes ± sem, naudojant ANBL-6 ( n = 8) ir MCG ( n = 4) HMCL. Tiek ANBL-6, tiek MCG parodė statistiškai reikšmingą atsaką į CypB (atitinkamai P = 0, 008 ir 0, 041). ( b ) CD138 + pirminės MM paciento ląstelės buvo inkubuotos 2 valandas, esant kontroliniam antikūnui arba anti-CD147, prieš stimuliavimą IL-6 ar CypB 5 dienas. c) Western blot analizė atskleidžia MAPK fosforilinimą po CypB stimuliacijos. IL-6 buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė. Beta aktinas naudojamas kaip krovimo kontrolė.

Visas dydis

Pilno dydžio lentelė

CD147 yra reikalingas CypB tarpininkaujant signalizavimui pirminėse MM ląstelėse

Toliau mes ištyrėme, ar CD147 išreiškiantys pirminiai MM pacientų kompiuteriai taip pat reaguoja į CypB stimuliaciją. 4b paveikslas parodo, kad kartu su IL-6, CypB gali stimuliuoti CD147 ekspresuojančių paciento MM ląstelių DNR sintezę. Be to, pridėjus CD147 blokuojantį antikūną, žymiai sumažėjo DNR sintezė, gauta dėl IL-6 ir CypB stimuliacijos. 4c paveikslas taip pat parodo, kad CypB stimuliacija sukelia MAPK fosforilinimą. IL-6 buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė, o visi MAPK lygiai buvo naudojami kaip įkrovos kontrolė. Šie rezultatai aiškiai parodo, kad CypB gali ne tik specifiškai stimuliuoti DNR sintezę per CD147 HMCL, bet taip pat gali stimuliuoti pirminę paciento MM ląstelių DNR sintezę ir MAPK fosforilinimą.

CD147 ekspresija yra susijusi su ciklinėmis ląstelėmis

Toliau norėjome tiesiogiai įvertinti, ar yra ryšys tarp MM ląstelių CD147 ekspresijos ir ląstelių ciklo tranzito. Norėdami tai padaryti, mes atlikome ląstelių ciklo analizę pacientų mėginiuose, kurie, kaip žinoma, ekspresuoja CD147. Po ląstelių auginimo per naktį, naudojant BrdU, buvo analizuojamos šviesios CD138 + / CD147 ir CD138 + / CD147 ląstelės. Pažymėtina, kad ryškios CD138 + / CD147 ląstelės buvo žymiai praturtintos ląstelių ciklo S ir G2 / M fazėse (atitinkamai 20, 6% ir 5, 2%), tuo tarpu CD138 + / CD147 silpnos ląstelės gyveno beveik vien tik G0 / G1 fazė (97, 6%) (5a paveikslas; viršutinė plokštė).

Image

CD147 ekspresuojančios pirminės MM ląstelės pereina ląstelių ciklą. ( a ) Dviejų MM pacientų BM mononuklearinės ląstelės buvo auginamos per naktį 37 ° C temperatūroje, naudojant BrdU. 1 MM pacientui buvo parodyta bimodalinė CD147 išraiška, o pažymėtas CD147 ryškus pogrupis (R2) buvo žymiai praturtintas ląstelėmis S ir G2 / M fazėse. 2 MM pacientas, kurio CD147 ekspresija buvo vienodesnė, buvo analizuojamas tiriant CD147 ryškias ir CD147 silpnas populiacijas. CD147 ryškios ląstelės (R2) buvo žymiai praturtintos ląstelėmis S ir G2 / M. ( b ) Išrūšiuoti 2 MM MM paciento CD147 šviesios ir CD147 silpnos populiacijos buvo auginami 5 dienas prieš įvertinant IL-6 ir CypB jautrumą, matuojant DNR sinteze. c ) pirminio MM paciento CD138 + / CD147 silpnų ir CD138 + / CD147 šviesių ląstelių pirmyn ir dydžio sklaida.

Visas dydis

Absoliutus CD147 lygis taip pat gali turėti įtakos MM ląstelių proliferaciniam potencialui. Norėdami išspręsti šią galimybę, mes išanalizavome pirminius pacientų kompiuterius, kurie išreiškė CD147 vienarūšiu būdu, nors ir plačiu, kelių žurnalų diapazonu. Įdomu tai, kad ryškūs kompiuteriai CD147 buvo labai praturtinti S (42%) ir G2 / M (50, 3%) fazėse, tuo tarpu CD147 neryškūs kompiuteriai buvo beveik išimtinai G0 / G1 fazės metu (96, 2%) (5a paveikslas; apatinė plokštė). ). Atsižvelgiant į tai, kad kai kurie tyrėjai pasiūlė koreliaciją tarp CD45 + kompiuterių ir MM klono proliferacinio skyriaus, 34 CD147 ryškių / neryškių populiacijų analizė taip pat buvo susijusi su CD45 raiška. Tačiau CD45 ekspresija buvo panaši tiek CD147 šviesių, tiek CD147 neryškių grupių populiacijose (duomenys nepateikti). Taip pat išrinkome CD138 + PC iš 2 MM paciento į CD147 dim ir CD147 šviesias populiacijas ir 5 dienas auginome šias ląsteles prieš įvertindami DNR sintezę. 5b paveikslas aiškiai parodo, kad ryškūs kompaktinių diskų kompaktiniai diskai CD147 rodo didelį foninį išplitimą ir reikšmingai reaguoja į pridedant IL-6 ir CypB. Palyginimui, CD147 neryškių kompiuterių, įskaitant bazinės DNR sintezę, rodmenys buvo žymiai mažesni. Wright-Giemsa dažymas parodė, kad CD147 neryškūs kompiuteriai buvo morfologiškai mažesni nei ryškūs CD147 kompiuteriai (duomenys nepateikti). Šią išvadą patvirtino srauto citometrija, kuri parodė prieš žemiausią CD147 neryškių kompiuterių ir CD147 ryškių kompiuterių rodomą žemesnį priekinės sklaidos lygį prieš rūšiavimą (5c paveikslas).

Atsižvelgiant į ryškius CD147 šviesių ir CD147 neryškių kompiuterių proliferacijos greičio skirtumus, vis dar buvo įmanoma, kad CD147 neryškūs kompiuteriai nebuvo susiję kloniškai ir gali reikšti likusius NBMPC. Norint patikrinti šią galimybę, RNR buvo išskirtas iš 2 paciento MM paciento CD147 šviesių ir CD147 neryškių populiacijų ir buvo tiriamas IGHV. Tačiau 1 papildomas paveikslas parodo, kad IGHV srities genai tiek CD147 šviesioje, tiek CD147 dimensijų populiacijose buvo identiški vienas kitam, kaip ir originalios nerūšiuotos pirminės paciento ląstelės. Mes taip pat įvertinome CD147 mRNR ekspresijos lygius kiekvienoje subpopuliacijoje atvirkštinės transkriptazės PGR metodu ir patvirtinome sumažėjusį CD147 mRNR lygį CD147 silpnuosiuose PC (papildomas 2 paveikslas). Rezultatuose, kurie nebuvo parodyti, mes taip pat išanalizavome abi subpopuliacijas, naudodami fluorescencinę in situ hibridizaciją, ir abiejose PC populiacijose buvo 3, 7, 9 ir 15 trisomijos kartu su 13 monosomija.

siRNR sukeltas žemas CD147 reguliavimas sumažina HMCL proliferaciją

Galiausiai mes panaudojome siRNR-numušimo strategijas, kad galutinai patikrintume CD147 išraiškos ir MM ląstelių proliferacijos vaidmenį. Pirmiausia ALMC-2, ANBL-6 ir KAS-6/1 ląstelės buvo transfekuotos CD147 specifine siRNR. Sumažinti CD147 ekspresijos lygiai buvo patikrinti srauto citometrija (6a paveikslas; ALMC-2 parodytas kaip reprezentatyvus HMCL visose 6 paveikslo plokštėse). Be to, IL-6 sukelta DNR sintezė (6b paveikslas) ir ląstelių proliferacija (6c paveikslas) buvo žymiai pažeistos po CD147 žemo reguliavimo (atitinkamai P = 0, 0001 ir P = 0, 0006 3 dieną). Tada mes nustatėme, ar CD147 žemas reguliavimas turėjo įtakos apoptozinių ląstelių, esančių mūsų HMCL, skaičiui. Nepateiktais duomenimis, apoptozinių ląstelių skaičius nepadidėjo sumažėjus CD147 reguliavimui. Pažymėtina, kad ląstelių ciklo analizė parodė, kad dėl CD147 sumažėjusio reguliavimo padidėjo ląstelių skaičius ląstelių ciklo G0 / G1 fazėje ir sumažėjo ląstelių skaičius ląstelių ciklo G2 / M fazėje, nes palyginti su ląstelėmis, perkeltomis kontroline siRNR (6d pav.). Nors IL-6 sukeltas HMCL proliferacinis pajėgumas sumažėjo sumažėjus CD147 reguliavimui, MAPK IL-6 tarpininkaujantis fosforilinimas išliko tvirtas (6e pav.), Kas rodo, kad IL-6 signalizacijos kelias šiose ląstelėse nebuvo pažeistas. Norėdami išsiaiškinti, ar mūsų rezultatai, atėmus CD147 reguliavimą, būdingi IL-6 sukeltai signalizacijai MM ląstelėse, ar atspindi bendrą proliferacinio pajėgumo sumažėjimą, mes toliau ištyrėme CD147 sumažėjusio reguliavimo įtaką CypB sukeltai proliferacijai. Kaip parodyta 6f paveiksle, po CD147 sumažėjusio reguliavimo buvo pakenkta CypB sukeltai DNR sintezei ( P = 0, 033 3 dieną). Norėdami toliau patikrinti, ar CD147 funkcija nepriklauso nuo IL-6 signalizacijos, įvertinome CD147 ekspresiją nuo IL-6 nepriklausomoje ląstelių linijoje RPMI 8226. Ši analizė parodė, kad šios ląstelės išreiškia labai aukštą CD147 lygį (ΔMFI = 302, duomenys nerodyta). Nors CD147 siRNR tik vidutiniškai sumažino CD147 ekspresiją (ΔMFI = 85), šiose ląstelėse buvo žymiai sutrikdyta DNR sintezė (6g paveikslas) ( P = 0, 001 3 diena, 6 g paveikslas). Visi šie duomenys rodo, kad sumažėjęs CD147 reguliavimas sumažina bendrą MM ląstelių proliferacinį pajėgumą, nepriklausomai nuo IL-6 signalizacijos kelio.

Image

Dėl sumažėjusio CD147 reguliavimo sumažėja MM ląstelių proliferacinis pajėgumas. ( a ) Srauto citometrija buvo naudojama patvirtinti CD147 sumažėjusį reguliavimą ALMC-2 ląstelėse 72 valandas po kontrolinės siRNR arba CD147 specifinės siRNR transfekcijos. ( b ) Dėl sumažėjusio CD147 reguliavimo sumažėjo fono ir IL-6 sukeltos DNR sintezė ALMC-2 ląstelėse, išmatuotos po 3 dienų auginimo. Atkreipkite dėmesį, kad per 4 valandas iki eksperimento pradžios ląstelėms buvo atimtas serumas ir IL-6. ( c ) CD147 žemas reguliavimas slopino IL-6 stimuliuojamą ALMC-2 proliferaciją. ( d ) Western blot, patvirtinantis CD147 numušimą ALMC-2 ląstelėse ir trukdymą IL-6 stimuliuojamam MAPK fosforilinimui. Atkreipkite dėmesį, kad per 4 valandas iki eksperimento pradžios ląstelėms buvo atimtas serumas ir IL-6. ( e ) CD147 sumažėjęs reguliavimas ALMC-2 ląstelėse padidina ląstelių skaičių G0 / G1 ląstelių ciklo fazėje. ( f ) CypB sukeltos DNR sintezė ALMC-2 ląstelėse sumažėja po to, kai CD147 yra sureguliuojamas. Atkreipkite dėmesį, kad 12 valandų prieš eksperimento pradžią ląstelės buvo kultivuojamos terpėje, turinčioje 0, 5% BSA. ( g ) Dėl sumažėjusio CD147 reguliavimo sumažėja IL-6 nepriklausomos ląstelių linijos RPMI 8226 DNR sintezė (* P <0, 05).

Visas dydis

Diskusija

Ankstesni tyrimai parodė, kad CD147 molekulė yra per daug ekspresuojama daugelyje karcinomų, palyginti su normaliais ir gerybiniais kolegomis 10, 11, 35, 36, ir prisideda prie biologinės veiklos, kuri skatina naviko progresavimą. 13, 15, 37 Tačiau iki mūsų tyrimų CD147 ekspresija MM ląstelėse ir jo potenciali biologinė funkcija nebuvo žinoma. Čia pateikiame pirmuosius įrodymus, kad CD147 ekspresijos lygis gali būti sureguliuotas MM ir, dar svarbiau, kad CD147 turi biologinį vaidmenį šioje ligoje.

Kalbant apie CD147 ekspresijos lygius, mūsų duomenys patvirtina išvadą, kad CD147 mRNR lygis padidėja MM kompiuteriuose, palyginti su MGUS kompiuteriais ir NBMPC. Analizuojant viešai prieinamus genų ekspresijos profiliavimo duomenis 38, taip pat paaiškėjo, kad CD147 mRNR lygis buvo padidėjęs MM kompiuteriuose ( n = 559), palyginti su MGUS kompiuteriais ( n = 44) ( P <0, 0001), o Mayo genų ekspresijos profiliavimo duomenų analizė ( maloniai pateiktas dr. Rafaelio Fonseca) taip pat parodė, kad MM AK ( n = 53, anksčiau negydyti MM pacientai) išreiškė didesnį CD147 mRNR lygį nei MGUS kompiuteriai ( n = 24) ( P <0, 0034). CD147 baltymo lygis, kaip matė ΔMFI, buvo padidėjęs MM ląstelėse palyginti su MGUS ląstelėmis ( P = 0, 0020). Mes taip pat išanalizavome CD147 raišką normaliose B ląstelėse ir, nors CD147 mRNR lygis buvo žemas, CD147 nebuvo galima aptikti atliekant Western blot analizę. Be to, tyčinis normalių B ląstelių aktyvinimas polikloniniu aktyvinimu nesugebėjo sureguliuoti CD147 ekspresijos (duomenys neparodyti), kas rodo, kad padidėjęs CD147 MM ląstelėse gali atspindėti genetinius pokyčius, vykstančius piktybinės transformacijos metu.

Mūsų atradimas, kad daugelis pirminių paciento MM ląstelių išreiškia padidėjusį CD147 lygį, paskatino toliau tirti šios molekulės biologinį vaidmenį piktybiniuose PC. Čia mes pasinaudojome atradimu pacientams, kurių MM ląstelės ekspresuoja CD147 bimodaliniu būdu, nes tai suteikė įrankį atskirti CD147 dim ir CD147 ryškius MM kompiuterius iš to paties paciento ir paklausti, ar CD147 turi reikšmę pagreitintam PC platinimui. . In this regard, we clearly demonstrated that CD147 bright PCs were greatly enriched for cells within the S and G2/M phases of the cell cycle, whereas CD147 dim PCs largely resided within G0/G1 phase. Taken together with our data demonstrating that CD147 knockdown decreases MM cell proliferation, these results support a critical role for CD147 in MM cell proliferation. These findings are clinically significant because the proliferative rate of PCs, measured by the PC labeling index, is an important prognostic factor. Generally, MGUS PCs display an extremely low PC labeling index and PC numbers in these patients can remain stable for years. Elevations in PC labeling index are generally indicative of disease progression, whether it is from MGUS to MM or in progressing MM patients. 38, 39 Our observations that CD147-expression levels may increase with disease progression suggest a mechanism that may underlie elevations in PC labeling index.

Of note, CD45 expression has been suggested to identify the proliferative compartment within MM. 34 However, this conclusion remains controversial. For example, some have argued that the absence of this marker is associated with poor prognosis, 40, 41 whereas still others have contradicted this observation by stating that CD45 expression correlates with aggressiveness of the disease. 42 Finally, additional investigators have found no correlation or prognostic significance of CD45 within this disease. 43 Despite the controversy, to address the possibility that CD147 is a surrogate for CD45 expression, we also assessed CD45 expression on CD147 bright and CD147 dim PCs that had been pulsed with BrdU. However, we observed that CD45 + PCs were found to reside in both CD147 bright and CD147 dim PC populations of the clone, thereby suggesting that CD147 expression marks a distinctive cellular state (data not shown).

Given the demonstrated role of CD147 in MM cell proliferation, we also carried out studies to determine if its natural ligand, extracellular Cyps, 19 could stimulate MM cell proliferation. Of interest, the CD147–Cyp interaction has been implicated as having an important role in inflammatory diseases by inducing MMP production. 9, 44, 45 Recent evidence also shows that the addition of extracellular Cyps to CD147-expressing tumor cells enhances both tumor-cell invasion and cellular proliferation. 46 Here, we show that CypB indeed stimulates DNA synthesis of MM CD147 bright but not CD147 dim PCs demonstrating the specificity of the interaction. Moreover, addition of a blocking antibody to CD147 abrogated Cyp-stimulated MM cell responses. The Cyp responsiveness of MM cells is consistent with recent work by Bauer et al. 23, demonstrating that CypA and CypB support myeloma cell survival through STAT3 signaling. It is important to note that the HMCLs differed in their level of responsiveness to CypB. Although this observation needs further study, we speculate that this may result from variable levels of CypB autocrine signaling, that is, some HMCLs may secrete higher levels of CypB that would render the activity of exogenous CypB less obvious. Preliminary studies have demonstrated that not only is CypB found in the plasma of BM MM patient samples but it is also secreted by both HMCLs and CD138+ primary patient samples (Arendt et al. , unpublished observations). Collectively, our results, taken together with reports in the literature that blocking CD147 induces cell death in cancer cells 47 and silencing CD147 inhibits tumor progression, proliferation and migration activity, 48, 49, 50 suggest that CD147 may be an attractive molecule to target therapeutically in MM patients.

In addition to a role in MM cell proliferation, the CD147 molecule has a number of other activities with possible relevance to MM. For example, a characteristic feature of MM is that the tumor cell shares a reciprocal interaction with the BM microenvironment. The signals that are exchanged, causing immune suppression, angiogenesis and lytic bone lesions, have a critical role in maintaining tumor-cell growth and survival. Many of these distinguishing features have been attributed to CD147 in other cancers and an attractive hypothesis currently under study is that this molecule also exerts these additional activities within the MM cell niche. There are two relevant examples. First, CD147 overexpression has been shown to promote increased angiogenesis 16 and an angiogenic phenomenon is also observed as MGUS evolves into MM. 51, 52 Second, it has been shown that CD147 stimulates production of MMPs not only by surrounding stromal cells but also by tumor cells themselves. 15 Importantly, the dysregulated presence of MMPs in the MM microenvironment has been implicated in extracellular matrix remodeling and osteolytic bone destruction. 53 Other investigators have suggested that the higher glycosylated form of CD147 is the active form, inducing both MMP production 17, 30, 31 and metastasis 32, 33 Therefore, our observations that the CD147 glycosylation patterns of primary MM cells were quite varied support the need for an additional investigation into CD147 glycosylation status and bone disease in MM patients.

Finally, in a small cohort of patients from whom we had serial samples collected at various stages of disease, we obtained preliminary evidence that CD147-expression levels may correlate with disease progression (Figure 3). Taken together, these studies provide the rationale for future studies aimed at determining whether CD147 would function as a clinically useful biomarker of disease progression. We emphasize that larger studies utilizing serial samples are needed to formally test this possibility. Intriguingly, we observed some MGUS patients with higher CD147 levels and some MM patients with very low CD147 levels. Follow-up studies of both groups of patients over time are necessary to understand the significance of these observations. However, an anecdotal review of the small subset of MM patients with CD147 dim PCs indicated that these patients were undergoing preconditioning for ASCT (autologous stem cell transplant) or were asymptomatic and/or lacked CT/PET positivity at the time of sample draw. Lastly, the patterns of CD147 expression observed in patient samples are intriguing and varied from patient PCs with uniform CD147-negative, CD147 dim or CD147 bright expression to patient PCs that included only a small CD147 bright subpopulation. Longitudinal studies are also needed to determine whether the emergence of a CD147 bright PC population indeed correlates with progression across the disease continuum.

In summary, our studies demonstrate that CD147 is differentially expressed across the disease continuum both at the mRNA and protein levels, and signaling via this molecule may be necessary for MM PCs to transit the cell cycle. As CD147 has been implicated as having a significant role in other cancers, these results emphasize not only the possible importance of CD147 in the evolution of MGUS to MM tumor progression but also its potential role in tumor proliferation. Our studies provide an important novel foundation for future studies investigating the ability of CD147 to serve as an important biomarker of disease progression in the monoclonal gammopathies.

Papildoma informacija

Vaizdo failai

  1. 1.

    1 papildomas paveikslas

PDF failai

  1. 1.

    2 papildomas paveikslas

„Word“ dokumentai

  1. 1.

    Papildomos figūros legendos

    Papildoma informacija pridedama prie dokumento Leukemijos svetainėje (//www.nature.com/leu)