Aukšto titro Igg antikūnų prieš daugelį su leukemija susijusių antigenų indukcija cml sergantiems pacientams, kuriems klinikinis atsakas į k562 / gvax imunoterapiją | kraujo vėžio žurnalas

Aukšto titro Igg antikūnų prieš daugelį su leukemija susijusių antigenų indukcija cml sergantiems pacientams, kuriems klinikinis atsakas į k562 / gvax imunoterapiją | kraujo vėžio žurnalas

Anonim

Dalykai

  • Vėžio imunoterapija
  • Lėtinė mieloleukemija

Anotacija

Gebėjimas nukreipti mieloidinę leukemiją naudojant imunoterapiją reikštų didelę terapinę pažangą. Pateikiame pirminės ir antrinės vakcinacijos K562 / GM-CSF imunoterapijos klinikinių tyrimų, atliekamų pacientams, sergantiems lėtinės mieloleukemijos leukemija (CML-CP), esant neoptimaliam atsakui į imatinibo mezilatą, imunologinę analizę. Naudodami K562 rekombinantinių cDNR ekspresijos bibliotekų serologinę analizę su autologiškai vakcinuotu paciento serumu, mes nustatėme 12 naujų su lėtiniu mieloidine leukemija susijusių antigenų (LAA). Mes parodome, kad klinikiniai atsakai po K562 / GM-CSF vakcinacijos yra susiję su aukšto titro antikūnų reakcijų į daugybinius LAA indukcija. Šiems identiškai vakcinuotiems pacientams stebėjome ryškiai skirtingus pradinius modelius ir sukeltus antikūnų atsakus. Nei vienas antigenas nebuvo atpažintas visuose reakcijose į vakcinaciją. Mes parodome, kad tiems, kurių atsakas į pradinę vakcinaciją nėra pakankamas, gali būti skiriamos papildomos „revakcinacijos“ vakcinacijos serijos, ir tai yra siejama su dažnesniu IgG atsakų į antigenus, sukeliančius K562 vakciną, indukcija, palyginti su pirminiu LML-CP. Galiausiai tie, kuriems buvo sukeltas imuninis atsakas į tuos pačius LAA, dažnai turėjo HLA potipius, o pacientai, kuriems po vakcinacijos pasireiškė klinikinis atsakas, pripažino iš dalies bendrą, bet neidentišką antigenų spektrą; abi išvados gali turėti reikšmingos įtakos imunoterapijai nuo vėžio.

Įvadas

Vėžinė imunoterapija, atliekant alogeninę kamieninių ląstelių transplantaciją, sėkmingai naudojama hematologiniams piktybiniams navikams gydyti> 40 metų. 1 Didelis toksiškumas ir logistiniai iššūkiai, susiję su šiuo gydymu, paskatino ieškoti saugesnių ir praktiškesnių imunoterapijos būdų (apžvelgti Hourigan ir Levitsky 2 ). Tikslinė ląstelių terapija nuo vėžio gali būti labai efektyvi, tačiau jai reikia sugebėjimo atlikti ex vivo endogeninių priešnavikinių reakcijų padidinimą 3 arba išankstinių žinių apie optimalius vėžio antigeno tikslus. 4, 5 Šie tikslinio įvaikinimo ląstelių terapijos apribojimai kartu su kitais veiksniais daro vakcinaciją 6 ir (arba) imuninės kontrolės taško slopinimą 7, 8, 9 potencialiai patraukliais būdais imunoterapijai vėžiu; Deja, šiuo metu šios terapijos yra gydomos tik nedaugeliui gydytų pacientų. Mūsų supratimas apie tų nedaugelio stebėtų klinikinių reakcijų imunologinius pagrindus dar yra pradinėje stadijoje. 10

LML per pastarąjį dešimtmetį buvo transformuotas įdiegus racionaliai suprojektuotus tirozinkinazės inhibitorius (TKI) į beveik lėtinę ligą, kurios vidutinis išgyvenamumas po diagnozės yra> 20 metų. 11 Vis dėlto tebėra didelių klinikinių iššūkių, įskaitant sunkumus, susijusius su gydymu, šalutinį poveikį, kontraindikacijas nėštumo metu, atsparumo mutacijų vystymąsi ir dideles sveikatos priežiūros išlaidas teikiant visą gyvenimą trunkančią terapiją, kai liga, kaip prognozuojama, paplitimas JAV iki 2035 m . padidės šešis kartus, palyginti su iki TKI. 12 Prieš pasireiškiant TKI, geriausias CML gydymas buvo susijęs su imunoterapija, 13 arba interferono 14, arba kamieninių ląstelių transplantacija. 15 LML yra žinoma, kad yra ypač jautri imuninei kontrolei. 16, 17, 18, 19 Išsamesnė informacija apie šio imuninio atsako į LML specifiką buvo gauta atliekant serologinį CDNR ekspresijos bibliotekų (SEREX) 20 tikrinimą LML sergantiems pacientams, 21, 22, įskaitant pacientus, sergančius LML po SCT, kurie pasiekė visišką remisija po gydymo donoro limfocitų infuzija. 23 Galiausiai, LML yra kloninių kamieninių ląstelių sutrikimas, turintis būdingą chromosomų translokaciją, leidžiančią labai jautriai nustatyti minimalią likutinę ligą. Visi šie veiksniai daro LML puikiu modeliu, tiriančiu klinikinius atsakus į imunoterapiją esant hematologiniams piktybiniams navikams.

Ne kartą įrodyta, kad peptidų vakcinacija nuo vėžio yra saugi ir galinti sukelti priešvėžinį antigeninį imuninį atsaką; 2, 25, 26, tačiau lieka klausimų dėl leukemijos klonui specifinio antigeno identifikavimo ir paciento HLA specifinio epitopo patvirtinimo klinikinio veiksmingumo ir praktiškumo. 27, 28 Bandant įveikti šiuos apribojimus, buvo ištirta įvairių ląstelių vakcinavimo metodų įvairovė, įskaitant apšvitintų alogeninių vėžio ląstelių linijų, genetiškai modifikuotų panaudoti aukšto imunomoduliacinio citokino GM-CSF („GVAX“) kiekiui ekspresuoti, naudojimą. . 29, 30, 31 klinikiniai tyrimai buvo atlikti naudojant šią vakcinos platformą ūminės mieloidinės leukemijos 32 ir kasos, 33 krūties, 34 prostatos, 35 inkstų ląstelių 36 ir nesmulkialąstelinio plaučių vėžio atvejais. Anksčiau mes pranešėme apie klinikinius atsakus po K562 / GVAX vakcinacijos 19 pacientų, sergančių LML-CP, kurių gydymas TKI nebuvo optimalus. 38 Šiame tyrime pranešama apie naujojo SEREX metodikos varianto (Quan-SEREX), kurį naudojame indukuotų IgG reakcijų į su leukemija susijusius antigenus (LAA), susijusius su klinikiniais atsakais po vakcinacijos K562 / GVAX, nustatyti ir kiekybiškumą laikui bėgant, leukemijos antigenui specifinio imuniteto serumo antikūnų titrų pokyčiai.

Rezultatai

Paciento savybės

Anksčiau pranešėme apie 19 tiriamųjų, dalyvavusių pradiniame K562 / GVAX vakcinos imunoterapijos tyrime (J0345), skirtą CML-CP sergantiems pacientams, sergantiems nuolatine išmatuojama liga, charakteristikas ir klinikinius rezultatus, nepaisant mažiausiai vienerių metų gydymo imatinibu. 38 Vėlesniame klinikiniame protokole (J0625) 11 iš šių tiriamųjų buvo tiriami antruoju K562 / GVAX vakcinacijos „revakcinacijos“ serijos tirpalu, kuriems nebuvo optimalus atsakas į originalias vakcinų serijas. Bendra dviejų tyrimų schema, įskaitant laiko taškus, kurie buvo naudojami atliekant šį tyrimą specifiniam imuninei leukemijai įvertinti, parodyta 1 paveiksle.

Siūlymas „revakcinacinių“ vakcinacijų serijas tiems pacientams, kurie po pirminės vakcinacijos serijos neturėjo molekulinio atsako arba kuriems buvo pradinė molekulinė remisija ir po to išmatuota liga vėl yra pagrįsti prielaida, kad šie pacientai neturi pakankamai antileukeminis imuninis atsakas siekiant išnaikinti jų ligą. Vidutinis pacientų, kuriems atliktas J0625 revakcinacijos tyrimas, amžius buvo 60 metų. Vidutinis laikas tarp paskutinės vakcinacijos J0345 ir pradinės vakcinacijos pagal J0625 protokolą buvo 111 savaičių. Vidutinis imatinibo vartojimo laikas prieš revakcinaciją buvo 279 savaitės. Revakcinuoti pacientai patyrė panašias vietines reakcijas kaip ir gavę pirminį vakcinų rinkinį bandomojo tyrimo metu. 3 ir 4 laipsnio nepageidaujamų reiškinių nepastebėta. Visi pacientai išliko mediciniškai stabilūs ir gerai toleravo revakcinaciją. Svarbu tai, kad 8 iš 11 pasiekė žemiausią užregistruotą BCR – ABL RQ – PCR lygį po revakcinacijos serijos; mediana iki šios vertės buvo 24 savaitės. Po revakcinacijos serijos du pacientai buvo visiškai molekuliškai neigiami dėl BCR – ABL nuorašo (1 lentelė).

Pilno dydžio lentelė

SEREX leukemijos antigeno atradimui

Žmogaus navikų, turinčių autologinį serumą (SEREX), rekombinantinių cDNR ekspresijos bibliotekų serologinė analizė buvo išskirtinai galinga vėžio antigeno atradimo technika. 20, 21, 22, 23 Mes naudojome modifikuotą daugiapakopę šios technikos versiją, kad nustatytume sukeltų antileukemijos reakcijų specifiškumą pacientams, kuriems klinikinis atsakas į vėžio terapiją. K562 cDNR ekspresijos bibliotekos ekranizavimui, kaip aprašyta kitur, buvo naudojamas penkių pacientų, sergančių K562 / GVAX vakcinacijos serijomis (2, 4, 6, 9 ir 18) 38, serumas po vakcinacijos, kuris parodė aiškų klinikinį atsaką (38, 2, 4, 6, 9 ir 18 tiriamieji) ., 39 ). Po trijų nuoseklaus atrankos raundų, išgryninti monokloniniai klonai buvo tirti naudojant prieš- ir 12-osios savaitės povakcinacijos serumą, kad būtų nustatyti po vakcinacijos sukelti arba sustiprėję atsakai (2a paveikslas). Jie buvo pastebėti <20% iš 19 tirtų normalių donoro serumų. Šių klonų cDNR intarpai buvo seka (2 lentelė) ir buvo naudojami paskesniam kiekybiniam vertinimui. Du (RHAMM, DNAJA1) anksčiau buvo nustatyti naudojant SEREX kaip CML antigenus 21, 22, nors mes manome, kad likę 12 yra nauji LAA.

Image

Kiekybinio infraraudonųjų spindulių imuninės patikros tyrimo, „Quan-SEREX“, sukūrimas. a ) Antikūnų iš paciento serumo mėginių prieš kandidatus antigenus buvimas buvo įvertintas paciento serume prieš skiepijant ir 12 savaitę po vakcinacijos, naudojant tradicinę SEREX technologiją. Atsakymas vertinamas kaip „nepakitęs“ (A, viršuje), jei nėra skirtumų tarp mėginių prieš ir po vakcinacijos, „padidėjęs“ (A, viduryje), jei jų yra tiek prieš vakcinaciją, tiek po vakcinos mėginių, tačiau signalo intensyvumas padidėja po mėginio arba yra „sukeltas“ (A, apačia), jei signalas stebimas tik mėginyje po vakcinos. b ) Kiekybinis taškinis blot tyrimas: Kiekvienas iš 14 antigenų, taip pat kontrolinės medžiagos (užkoduotos fagų klono lizate), buvo padalintos trimis egzemplioriais ant bakterinės vejos ir inkubuotos su IPTG pamirkyta nitroceliuliozės membrana. Vėliau ši membrana inkubuojama su paciento serumu santykiu 1: 200. Fagų jungimasis su IgG serumu buvo nustatytas naudojant infraraudonųjų spindulių ryšiu pažymėtą anti-žmogaus IgG, ir kiekvienos dėmės, atitinkančios konkretų fago kloną, intensyvumas buvo nustatytas, kaip aprašyta skyriuje „Medžiagos ir metodai“. c ) Slenksčio nustatymas: normalizuotų antigenų intensyvumo tankis tarp 19 normalių donorų. Varpo formos kreivė juoda vientisa linija parodo normalizuotų intensyvumų empirinį tankį, o apytikslis normalusis pasiskirstymas buvo parodytas raudona brūkšnio linija. Trumpos vertikalios juostos apačioje rodo neapdorotus duomenis apie normalizuotą intensyvumą. Slenkstis buvo nustatytas kaip 85-asis artimojo normaliojo pasiskirstymo procentilis ir nurodytas mėlyna vertikalia brūkšnio linija. d ) Quan-SEREX nustatytas normalizuotas intensyvumas yra antikūnų titro pakaitalas: Normalizuoto intensyvumo kartotinis indeksas, titruojamas santykiu 1: 200 maksimaliai skiedžiant. Fago klono lizato taškai buvo pažymėti ant keturių skirtingų nitroceliuliozės membranų, kurios vėliau buvo apdorotos keturiais skirtingais paciento serumo skiedimais (1: 200, 1: 3000, 1:10 000 ir 1:30 000), rinkiniu. Didžiausias skiedimo lygis buvo apibrėžtas kaip didžiausias titravimas, kai fagas buvo laikomas atpažįstamu. <1: 200 langelyje buvo nurodyti tie fagai, kurių nepavyko atpažinti atliekant titravimą. Normalizuotas intensyvumas titruojant 1: 200 buvo tiriamas didėjant didžiausio skiedimo lygiui (koreliacijos koeficientas = 0, 86, remiantis Spearmano metodu).

Visas dydis

Pilno dydžio lentelė

Quan-SEREX leidžia kiekybiškai įvertinti sukeltą imunitetą

Tiesioginė infraraudonųjų spindulių fluorescencinė vaizdo technologija dabar leidžia kiekybiškai aptikti platų dinaminį diapazoną su mažiau fono, palyginti su įprastiniais matomais chemiliuminescencijos metodais. 41 Infraraudonųjų spindulių vaizdo nuskaitymas (Medžiagos ir metodai, 2b pav.) Buvo naudojamas norint įvertinti serumo reaktyvumo lygį su 14 antigenų, nustatytų naudojant tradicinę SEREX metodiką. Pirmiausia buvo naudojami 19 normalių sveikų donorų serumai, norint nustatyti pradinius šios metodikos veiksmingumo rodiklius. Mes apytiksliai apskaičiavome normalizuoto intensyvumo foninį pasiskirstymą, kai normalus Gauso tankis yra nukreiptas į mėginio medianą, o esant standartiniam nuokrypiui - standartinio nuokrypio, kuris yra 0, 75 karto didesnis už 19 normalių asmenų normalizuotų intensyvumų interkvartilio intervalą (2c paveikslas, raudonas brūkšnys). linija). Eksperimentiškai gautas normalizuotas intensyvumas parodė panašią varpo formos kreivę (2c paveikslas, juoda vientisa linija), iš esmės atitinkančią leukemijos antigeno fago atpažinimo nebuvimą šiems nevakcinuotiems sveikiems donorams. Apytikslio normalizuoto intensyvumo pasiskirstymo (tai yra 0, 083) 85-osios procentilės (2c paveikslas, vertikali punktyrinė linija) aptikimo slenkstis buvo pasirinktas siekiant padidinti jautrumą. Sveikiems nevakcinuotiems donorams, retiems cirkuliuojantiems autoantikūnams, retkarčiais nukrypimas nuo numatomo pasiskirstymo buvo didesnis nei ši riba. Taikant šį metodą antigeno atpažinimo riba buvo nustatyta remiantis bendrais sveiko donoro atsakų į visus antigenus duomenimis; Remiantis mūsų išankstiniais duomenų tyrimais, šis įvertis yra gana patikimas foniniam triukšmui, suteikia privalumų dėl skaičiavimo ir, atrodo, duoda palyginamų rezultatų, palyginti su kiekvieno antigeno atpažinimo individualių slenksčių nustatymu. Tarp vidutinio normalizuoto intensyvumo ir tradicinio serumo antikūnų praskiedimo titro buvo nustatyta gera koreliacija (koreliacijos koeficientas = 0, 86) (2d paveikslas).

Sumažėjęs naviko krūvis po imunoterapijos K562 / GVAX yra susijęs su aukšto titro IgG antikūnų prieš kelis LAA indukcija.

Remiantis jų nedviprasmiškai mažėjančiais BCR / ABL mRNR transkripto lygiais (3a pav.) Po pirminės K562 / GVAX vakcinacijos, penki pacientai buvo atrinkti pradinei atradimų grupei. 38 Po keturių iš šių penkių kliniškai reaguojančių pacientų buvo nustatyta, kad po pirminės vakcinacijos atsirado naujų su leukemija susijusių IgG reakcijų (3b pav.), O dviem iš šių keturių taip pat buvo įrodyta, kad padidėjo priešvakcinavimo leukemijos antigeno IgG antikūnų lygis (pav. 3). 3c). Iš viso prieš skiepijant K562 / GVAX buvo atpažinti tik penki unikalūs mūsų grupės antigenai, o atsakai į tuos pačius antigenus taip pat buvo pastebėti 5–15% iš 19 tirtų sveikų nevakcinuotų donorų (2 lentelė). Tačiau po vakcinacijos visiems keturiems pacientams buvo sukeltas atsakas į vieną antigeną (DNAJA1), dviem pacientams (6, 18) atsirado nauji IgG antikūnai prieš tuos pačius tris antigenus (DNAJA1, RPS23 ir RHOX) ir dviem pacientams (6, 9). pateikė naują atsaką į gerai aprašytą leukemijos antigeną RHAMM. Iš viso 22, 42, 43 atsakai po vakcinacijos buvo nustatyti 12 unikalių LAA keturiems pacientams (13 naujų sukeltų atsakų ir 3 sustiprinti atsakai). Didžiausias titras buvo nustatytas 6–12 savaitę, atsižvelgiant į atsaką į vakcinaciją. Pastebėta, kad didesnę antigenų įvairovę atpažįsta IgG ankstyvajame skiepijime (3b pav.), Nors IgG titrai prieš kai kuriuos antigenus padidėjo daugiau nei metus po vakcinacijos (3c ir 4 paveikslai).

Image

Klinikinis atsakas į K562 / GVAX vakcinaciją sukelia naujus aukšto titro IgG atsakus į daugybę LAA. a ) Likusi LML ligos našta, nustatyta pagal BCR – ABL reikšmes, nustatomas pagal RQ-PGR iš paciento PBMC mRNR prieš ir po vakcinacijos (vertikali punktyrinė linija žymi pirminę J0345 vakcinacijos seriją). b ) IAG, atpažįstamo serume IgG, skaičius kiekvienam pacientui prieš („prieš“) ir po pirminės vakcinacijos (laikas x ašyje dienomis). c ) Kiekybinis LAA specifinio IgG serumo matavimas. Didžiausias sukeltų reakcijų „titras“ buvo stebimas nuo 42 dienos iki 84 laiko taškų (tai yra 6–12 savaičių). Normalizuotas intensyvumas koduojamas spalvomis (apatinė aptikimo riba, 0, 083 tamsiai mėlyna, maksimali raudona) pagal skalę, pateiktą 4a paveiksle.

Visas dydis

Image

Neatitikti indukuotų antikūnų atsakų modeliai identiškai vakcinuotiems pacientams. a ) Normalizuoto intensyvumo šiluminės kortelės spalvų kodas (iter titras) nuo tamsiai mėlynos (mažiausias / aptikimo slenkstis) iki ryškiai raudonos (maksimalus, lygus ar didesnis už lygį, matomą teigiamai kontrolei). Laikai neatpažinti antigenai yra koduojami pilka spalva, trūkstami mėginiai - balta spalva. b ) normalus donoro reaktyvumas prieš kandidatus LAA. Aptikimo riba buvo nustatyta 85% įprasto donoro pasiskirstymo, siekiant apriboti klaidingus teigiamus rezultatus paciento duomenų rinkinyje. Kaip prognozuojama, normalus donoro IgG reagavimas į šiuos 14 aptiktų LAA buvo retas, o kai buvo atsakas, jie buvo mažo titro. c ) Normalizuotas LML paciento LAA specifinių IgG atsakų intensyvumas prieš ir po pirminės, ir po antrinės vakcinacijos. Visi pacientai identiškais laiko momentais vartojo identišką K562 / GVAX visos ląstelės vakcinos produktą, tačiau pastebimai skyrėsi atsakai.

Visas dydis

Labai individualizuoti sukeltų serologinių reakcijų modeliai, stebimi identiškai vakcinuotiems pacientams

Ši analizė buvo taikoma likusiems 14 iš 19 pradinio („pirminio“) vakcinacijos tyrimo pacientų ir vėlesniems 11 pacientų pogrupio mėginių, kuriems buvo pasiūlyta papildoma vakcinacijos („sustiprinimo“) dėl neoptimalus klinikinis atsakas į pradinę vakcinacijos seriją (1 paveikslas). Po pradinės vakcinacijos serijos kiekvienas iš likusių 14 pacientų reagavo nuo 0 iki 3 antigenų (mediana: 1). Tai palyginti su 4 antigenų (0–7 diapazonų) mediana, kuri buvo pripažinta atradimo grupėje, kurią sudarė tie penki pacientai, kurie po vakcinacijos pateikė vienareikšmį klinikinį atsaką (3 ir 4 paveikslai).

Šių 19 identiškai vakcinuotų pacientų sukeltas IgG antikūnų atsakas į vakcinaciją buvo labai nevienalytis (4 pav.). Pastebėti du platūs antigenui specifinio IgG indukcijos modeliai; pagal pirmąjį modelį atsakymai buvo pastebėti keliems pacientams net po pirminės vakcinos serijos, o atsakiusių pacientų skaičius iš esmės nepasikeitė po antrinės „sustiprintos“ vakcinacijos serijos (pvz., DNAJA1). Antrame pavyzdyje atrodė, kad antroji „sustiprinta“ vakcinacija padidino pacientų, gavusių naują IgG atsaką į antigeną (pavyzdžiui, RHOXF2B, HBG2 ir CDC25C), skaičių. Mes iškėlėme hipotezę, kad taip atsitiko dėl buvusios imunologinės atminties prieš buvusią antigenų klasę (iš paciento ankstesnio poveikio autologinei LML) ir kad pastarosios klasės „vėlyvųjų“ antigenų ekspresija K562 ląstelių linijoje bus didesnė, iš kurio buvo gautas vakcinos produktas, nei pirminiame LML-CP. Pažymime, kad RHOXF2B mRNR (4/19 atsakymai pirminiame, palyginti su 7/11 padidinta) išraiška, HBG (atsakymų negauta 12 savaičių po pirminės vakcinacijos serijos, 2 respondentai vėlesniais laiko momentais) ir CDC25C (1 atsakas po pirminis, 3 atsakantieji po stimuliacijos), K562, palyginti su pirminėmis LML-CP ląstelėmis, buvo per daug išreikšta (5–40 kartų) (5 pav.). Galiausiai, stebėtinai, nepaisant vakcinavimo iš ląstelių metodo, kai kuri atsakymų įvairovė gali būti susijusi su HLA apribojimais. Pacientai, skiepiję IgG atsaką į tą patį (-ius) antigeną (-us), dažnai dalijosi keliais HLA aleliais (6 pav.).

Image

Ryšys tarp antigeno mRNR raiškos lygių LML ir K562 ryšyje su IgG antikūnų atsako išsivystymo laiku. Antrinė „revakcinacija“ gali sukelti IgG LAA atsaką pacientams, kurie po pirminės vakcinacijos nepadarė atsakymo į tą antigeną. Paveikslėlyje parodytas pacientų procentas, kuriems atlikta LAA specifinė IgG reakcija prieš ir po pirmosios vakcinacijos serijos ( n = 19 pacientų, ( a ) viršutinė panelė) arba revakcinacijos serijos ( n = 11 pacientų, ( b ) vidurinė panelė). Abiem grupėms parodytas normalių donorų (ND; n = 19), reaguojančių į tą patį antigeną, skaičius. Antigenai, kuriuos dažniau atpažįsta pacientai po antrinės „papildomos“ vakcinacijos serijos (CDC25C, RHOXF2, HBG2 ir RHAMM), turi aukštesnį mRNR ekspresijos lygį K562 (parodyta kaip raiškos raiška, palyginti su vidutine išraiška 8 normalių donorų mėginiuose), palyginti su periferinio kraujo lygis iš aštuonių ND arba aštuonių pacientų, sergančių lėtinės (CP) ar pagreitėjusios (AP) fazės LML ( c ) apatine plokšte).

Visas dydis

Image

Paciento HLA tipo vaidmuo nustatant LAA IgG atsakus į imuninę K562 / GVAX ląstelių vakciną. Molekuliniai HLA tipai buvo gauti iš Johns Hopkins universiteto medicinos mokyklos klinikinės imunogenetikos laboratorijos. Panašu, kad pacientų sukeltas IgG atsakų kitimas po vakcinacijos identiška K562 / GVAX visos ląstelės vakcinos produktu yra ne tik dėl ankstesnės patirties antigeno srityje ir imunologinės atminties, bet ir dėl HLA skirtumų tarp pacientų. Aukščiau pateiktame paveikslėlyje pabrėžiami trys pavyzdžiai; du klinikiniai atsakytojai atsakė į tris tuos pačius antigenus (DNAJA1, RPS23 ir RHOX). Šiems pacientams buvo būdingas I klasės (HLA-A * 0301) ir II klasės alelis (DRB * 1501) pagal jų HLA haplotipą. Be to, 7 iš 19 šio tyrimo pacientų reagavo į RHAMM. Visi turėjo DRB15 ir DQB * 0602 alelių haplotipą; iš tikrųjų 7 iš 8 pacientų, sergančių DRB15, ir 7 iš 7 pacientų, kurių DQB * 0602 šiame tyrime, reagavo į RHAMM. Galiausiai tik du pacientai pateikė pradinį atsaką į antigeną HN1L. Jie turėjo beveik identišką HLA haplotipą (HLA-A * 0101, HLA-C * 04KBG, HLA-B * 035, HLA-DRB * 0301 ir HLA-DRQ * 0201). Joks kitas pacientas tyrime neturėjo šio haplotipo.

Visas dydis

Diskusija

Nors pranešta apie daugybę LAA, 2, 44, 45, 46 mažiau žinoma apie ryšį tarp sukelto imuniteto šiems antigenams ir sėkmingo klinikinio atsako į imunoterapiją. 23, 47 Atsižvelgiant į iššūkius nustatant optimalius LAA, reikalingus sukelti klinikinį atsaką, sunkumus apibrėžiant ir tvirtinant atskirus peptidų epitopus, norą neapsiriboti imunoterapijos galimybėmis asmenims, turintiems tam tikrą HLA tipą, ir didelėms laiko ir išteklių sąnaudoms pacientų individualizuotų autologinių 48 arba suderintų alogeninių 49 ląstelių produktų, mes vietoje to priėmėme visų ląstelių vakcinacijos strategiją, siekdami pateikti universalią LML vakciną. Čia parodyta, kad LML sergantiems mažėjančia leukemijos ligos našta po vakcinacijos šia K562 / GVAX imunoterapija išsivysto naujos leukemijai būdingos aukšto titro imuninės reakcijos, kurių nėra tiems pacientams prieš vakcinaciją ar sveikiems donorams.

Yra keli šio tyrimo apribojimai. Pirmiausia mes ištyrėme tik vieną imuninio atsako dalį - sukeltą ar sustiprintą IgG antikūnų atsaką į LAA; būsimas darbas bus sutelktas į kitas antikūnų klases ir T-ląstelių reakcijas. Antra, šis hipotezę sukuriantis bandomasis tyrimas neleidžia atlikti statistinių koreliacijų tarp klinikinių reakcijų, sukeltų imuninių atsakų ir (arba) paciento savybių. Trečia, šio tyrimo pacientams LML ligos našta buvo tik nedidelė, todėl SEREX cDNR radimo biblioteka atsirado iš vakcinos K562 ląstelių linijos, o ne autologinio naviko, o mūsų genų ekspresijos tyrimuose buvo naudojamas CML-CP, gautas iš trečiųjų šalių. Planuojami mieloidinės leukemijos antigeno atradimo ūminės mieloidinės leukemijos tyrimuose, kai ligos našta studijuojantiems pacientams yra didesnė, metu bus pašalinti šie abu apribojimai. Galiausiai, atsižvelgiant į ankstesnį SEREX darbą, antigeno ekspresijai buvo naudojama bakterinė sistema, galinti sukelti klaidingus neigiamus rezultatus dėl prokariotinių glikozilinimo būdų. Būsimame darbe (LQ, HIL) bus bandoma sukurti SEREX variantą, kuriame būtų naudojama eukariotų išraiškos platforma.

Šiame tyrime pastebėtas labai įvairus sukeltų reakcijų pobūdis gali būti pagrindas būsimoms skiepijimo strategijoms, gydant imuninę vėžį. Pažymėtina, kad nė vienas antigenas nebuvo susijęs su IgG imunine reakcija visiems LML sergantiems pacientams nei pradiniame, nei skiepijant identiška visos ląstelės vakcina. Po pirminės vakcinacijos serijos 13 iš 19 pacientų reagavo į vieną antigeną (DNAJA1), tačiau tai buvo netipiška, nes daugumą antigenų atpažino vidutiniškai 2 iš 19 pacientų (11, 35%).

Iš tų 11 asmenų, kuriems buvo atlikta antroji revakcinacijos serija, du antigenai (DNAJA1 ir RHOX) sukėlė IgG imuninį atsaką 7 iš 11 pacientų, kiekvieną patikrintą antigeną atpažino vidutiniškai 3 arba 4 pacientai (31%). Šie antigenai, kartu su RHAMM, sudarė didžiąją dalį naujų sukeltų IgG reakcijų, pastebėtų po pirminio (22 iš 28 naujų atsakymų, pastebėtų 19 pacientų) ir antrinio (19 iš 28 naujų atsakymų, pastebėtų 11 pacientų) K562 / GVAX vakcinacijos serijos.

DNAJA1 (taip pat žinomas kaip HSJ 2, šilumos smūgio 40 kd baltymo 4 arba dnaJ homologo pošeimio A narys 1) pirmą kartą buvo identifikuotas 1993 m. 50 ir dabar žinomas kaip svarbus ir labai konservuotas vaidmuo baltymų lankstymo molekulinėje chaperone sistemoje., išsiskleidimas ir skilimas, veikiantis kaip pagrindinis konstituciškai išreikšto Hsp70 varianto, Hsc70, bendražmogis. 51 Įdomu tai, kad įrodyta, kad per didelis Hsp70 ekspresija yra LML atsparumas imatinibui. Buvo aprašyti 52 autoantikūnai prieš HSP ir molekulinius chaperonus tiek sveikų, tiek autoimuninių ligų atvejais. 53 anti-DNAJA1 antikūnų atsakai buvo rasti naudojant SEREX pacientų serumų patikrą prieš autologinio naviko cDNR bibliotekas pacientams, sergantiems kepenų ląstelių karcinoma, 54 galvos ir kaklo plazminių ląstelių karcinoma 55 ir nepublikuotuose darbuose, deponuotuose vėžio imunomų duomenų bazėje 56 iš plaučių, prostatos ir storosios žarnos vėžiu sergantiems pacientams. Atsakymai į DNAJA1 (ir kitas chaperono molekules) taip pat anksčiau buvo aprašyti LML sergantiems pacientams Greiner ir kt. 22, naudojant SEREX ir K562 cDNR biblioteką, kurioje buvo tiriami 3 iš 10 LML pacientų, tačiau nė vienam iš 19 negydytų AML pacientų ir nė vienam iš 20 sveikų savanorių nebuvo anti-DNAJA1 IgG atsakų. Palyginimui, mūsų tyrime tik vienam sveikam donorui (iš 19 tirtų) ir nė vienam LML pacientui iki vakcinacijos (iš 18 tirtų) nebuvo aptinkamas IgG atsakas į DNAJA1; tačiau maždaug dviem trečdaliams pacientų išsivystė anti-DNAJA1 IgG atsakai po vakcinacijos K562 / GVAX (5 pav.), įskaitant visus keturis klinikinius atsakytojus, kurie po vakcinacijos sukėlė antikūnų atsaką.

RHOXF2B (dar žinomas kaip „RHOX homeobox“ šeimos narys 2B) yra su X sujungto „RHOX homeobox“ genų klasterio šeimos dalis, kuri yra svarbus epigenetiškai reguliuojamas komponentas transkripcijos reguliavimui, normaliam vystymuisi ir reprodukcijai. Nustatyta, kad RHOXF2B gali būti ekspresuojamas normaliame žmogaus sėklidės audinyje ir storosios žarnos vėžio ląstelių linijoje ir gali būti sukeltas decitabino demetilinimo terapijos būdu žmogaus krūties vėžio ląstelėse. 57 Mūsų tyrime RHOXF2B K562 ląstelių linijoje buvo padidinta ∼ 100 kartų, palyginti su normaliais donorais ar pacientais, sergančiais lėtinės ar pagreitėjusios fazės LML (5 pav.). RHOXF2B neatpažino IgG antikūnai iš normalių donorų arba prieš vakcinaciją sergančių LML serumų, tačiau buvo atpažįstami po pirminės (4 iš 19 pacientų) ir antrinės vakcinacijos (4 paveikslas). Todėl atrodo, kad RHOXF2B yra naujas, imunogeniškas ir tikslinis vėžio sėklidžių antigenas.

Galiausiai RHAMM (taip pat žinomas kaip HMMR, hialuronano tarpinamas judrumo receptorius, CD168; IHABP) yra gerai apibūdinamas su LML susijęs leukemijos antigenas. Ankstesni darbai parodė šio antigeno specifiškumą serume 5 iš 16 tirtų LML pacientų. 21, 22 Šiame tyrime, kuriame dalyvavo 19 LML sergančių pacientų, turinčių minimalią likutinę ligą, nė vienas iš jų nepranešė apie IgG reaktyvumą prieš RHAMM; tačiau iš viso 7 pacientai reagavo po vakcinacijos (5 po pirminės vakcinacijos ir dar 2 po antrinės vakcinacijos).

Iš tų 9 antigenų, kurie atpažįstami tik po vakcinacijos (1 lentelė), tik du yra sujungti su membranomis (RHAMM ir DNAJA1), penki yra daugiausia citoplazminiai (HBG2, EEF1G, RPS23, USP33 ir MTHFD2), o du yra branduolyje (REPIN1 ir RHOXF2B). Kalbant apie funkciją, keturi dalyvauja transkripcijos reguliavime (RPS23, EEF1G ir RHOXF2B) arba replikacijos valdyme (REPIN1), o du yra citozoliniai fermentai (MTHFD2 ir USP33). Nei vienas antigenas sukėlė sukeltą ar sustiprintą IgG atsaką nei visiems pacientams, nei pacientams, kuriems po vakcinacijos buvo klinikinis atsakas.

Anksčiau mes parodėme, kad skiepijimas ląstelėmis, naudojant K562 / GVAX produktą, gali sukelti klinikinį atsaką pacientams, kuriems LML yra likęs po optimalaus atsako į TKI. 38 Šiame tyrime mes parodėme, kad tokia vakcinacija yra susijusi su labai skirtingais sukeltų IgG reakcijų į platų ir sutampančius, bet neidentiškus LAA spektrus, iš kurių 12 aprašyti pirmą kartą, modeliais. Klinikiniai respondentai sugebėjo sukurti didelio titro atsakus į daugelį antigenų, o sukeltas atsakas dažnai buvo ilgalaikis. Papildomai parodėme, kad antrinių K562 / GM-CSF vakcinų serijinė ląstelių vakcinacija, skiriama vidutiniškai per 2 metus po pirminės vakcinacijos, atrodo saugi, gerai toleruojama ir kliniškai buvo susijusi su mažiausiu stebėtu BCR / ABL transkripto lygiu 8 iš 11 pacientų, įskaitant du, kurie tapo molekuliškai neaptinkami. Ši „revakcinavimo“ serija gali ne tik pakartotinai iššaukti ir sustiprinti antigeno specifinius imuninius atsakus ankstesniuose atsakuose, bet ir sukelti antigenui specifinį IgG atsaką tiems pacientams, kurie neatsakė į pirminę vakcinaciją (4 paveikslas), ypač tiems antigenams, kurių didesnis išraiškos lygis vakcinoje nei pirminis navikas (5 paveikslas). Galiausiai pacientai, gavę IgG atsaką į tuos pačius antigenus, dažnai pasidalino kai kuriais ar visais savo HLA halotipais (6 pav.) - stebinantis šio visos ląstelės vakcinos metodas. Manome, kad tai yra pirmasis šio reiškinio aprašymas skiepijant iš ląstelių ir (arba) vėžį. Vis dėlto yra precedentas, kai indukuoti antikūnų atsakai teikiami pirmenybę pacientams, turintiems tam tikrus skirtingus HLA alelius, remiantis tyrimų duomenimis, skiepijant nuo hepatito B, 58 raudonukės 59 ir ŽIV. 60 Jei nuspręsta, kad šis stebimas ryšys yra statistiškai reikšmingas vėlesniame darbe, tada būsimais tyrimais turėtų būti siekiama išsiaiškinti, ar tai rodo tiesioginį pakitusio II klasės MHC pateikimo poveikį ir ar T ląstelės, turinčios trūkumų, padeda sukelti humoralinį imunitetą, netiesioginį poveikį per ryšį. disbalansas su susijusiais genais (tokiais kaip MHC III klasės regionas) ar kitas mechanizmas, kurį dar reikia nustatyti. Apibendrinant, šie atradimai gali turėti įtakos būsimiems imuninės terapijos nuo vėžio skiepams, ypač tiems, kurie bando nusitaikyti į vieną antigeną ar pateikti universalios vakcinos formą.

AUTORIŲ ĮNAŠAI

LQ, NKY, PHN, MM, JF, YLK, MG atlikti tyrimai; HLT ir GLR atlikta statistinė analizė; GTP ir BDS surinkti duomenys; HIL sukūrė tyrimus, išanalizavo ir interpretavo duomenis; CSH atliko tyrimus, analizavo ir interpretavo duomenis, rašė rankraštį.