Slopinamasis fitocheminių medžiagų poveikis cyp2d6 * 1 ir cyp2d6 * 10 metabolinėms galimybėms, naudojant ląstelių modelius in vitro | acta pharmaologica sinica

Slopinamasis fitocheminių medžiagų poveikis cyp2d6 * 1 ir cyp2d6 * 10 metabolinėms galimybėms, naudojant ląstelių modelius in vitro | acta pharmaologica sinica

Anonim

Anotacija

Tikslas:

Žolelių produktai buvo plačiai naudojami, o žolelių ir vaistų sąveikos sauga sukėlė didelį susirūpinimą. Šiuo tyrimu buvo siekiama ištirti fitochemikalų poveikį žmogaus CYP2D6 * 1 ir CYP2D6 * 10 kataliziniam aktyvumui in vitro .

Metodai:

HepG2 ląstelės buvo stabiliai transfekuotos CYP2D6 * 1 ir CYP2D6 * 10 ekspresijos vektoriais. Fermentų metabolinė kinetika buvo tiriama naudojant HPLC ir fluorimetriją.

Rezultatai:

HepG2-CYP2D6 * 1 ir HepG2-CYP2D6 * 10 ląstelių linijos buvo sėkmingai sukonstruotos. Iš 63 patikrintų fitochemikalų 6 junginiai, įskaitant koptisino sulfatą, bilobalidą, šizandriną B, liuteoliną, šizandriną A ir puerariną, esant 100 μmol / L, slopino kumarino junginio AMMC CYP2D6 * 1- ir CYP2D6 * 10-tarpinį O -demetilinimą. daugiau nei 50%. Be to, slopinimas šiais junginiais priklausė nuo dozės. Eadie-Hofstee grafikai parodė, kad šie junginiai konkurencingai slopina CYP2D6 * 1 ir CYP2D6 * 10. Tačiau jų K i vertės CYP2D6 * 1 ir CYP2D6 * 10 buvo labai artimos, kas rodo, kad priklausomybė nuo genotipo žolelių nuo narkotikų buvo panaši variantai.

Išvada:

Šeši fitocheminiai vaistai slopina CYP2D6 * 1 ir CYP2D6 * 10 katalizuojamą veiklą, atsižvelgiant į dozę in vitro . Taigi augaliniai produktai, kurių sudėtyje yra šių fitochemikalų, gali slopinti kartu vartojamų vaistų, kurių pagrindinis šalinimo būdas yra CYP2D6, metabolizmą in vivo .

Įvadas

Žmogaus citochromas P450 2D6 (CYP2D6) yra plačiai apibūdinamas polimorfinis vaistus metabolizuojantis fermentas, katalizuojantis daugelio ksenobiotikų biologinį virsmą. CYP2D6 metabolizuoja daugiau kaip 25% vaistų, įskaitant antidepresantus, antipsichozinius vaistus, beta receptorių antagonistus, analgetikus, antiaritminius vaistus ir tt 1, 2 . CYP2D6 turi daugiau nei 70 reikšmingų alelių, sukeliančių įvairius katalizinius veiksmus 3 . Palyginti su dviem 188C ir 4268G aleliais, esančiais CYP2D6 * 1 (laukinio tipo), CYP2D6 * 10 turi du vieno nukleotido polimorfizmus (SNP) 188T (rs1065852, Pro34Ser) ir 4268C (rs1135840, Ser486Thr) (//www.cypalleles.ki). .se / cyp2d6.htm), o azijiečių dažnis yra 38–70% 4 . CYP2D6 * 10 sumažėjęs vaistų klirensas in vivo yra sąlygotas silpnos ekspresijos ir padidėjusio K m 5 .

Pasaulyje vis plačiau pradedant derinti augalinius produktus su receptiniais vaistais, žolių ir vaistų sąveika, ypač slopinant P450 tarpininkaujamų vaistų metabolizmą žolelių gaminiuose, sukėlė didelį susirūpinimą 6 . CYP2D6 katalizinis aktyvumas gali sumažėti dėl fermentų slopinimo, vartojant žolelių papildus, įskaitant pipirai nigrumo vaisius, melaleuca leucadendron 7 lapus, aukso žiedyną, valerijoną 8, juodąjį košę 8 ir natūraliai susidarančius junginius, tokius kaip eupatorinas 9, epiberberinas 10, berberinas., ir hidradinas 11 . Pastaraisiais metais žymi pažanga padaryta numatant vaistažolių ir vaistų sąveiką, tačiau polimorfinių P450 variantų buvimas apsunkina prognozę. Nuo CYP2D6 priklausomų nuo genotipo žolelių ir vaistų sąveika buvo retai ištirta.

HepG2 ląstelės yra gaunamos iš žmogaus hepatomos ir turi daug specifinių kepenų funkcijų. Dėl membranų barjerų, transportavimo procesų ir NADPH sistemos HepG2 ląstelės tiksliai atspindi in vivo situaciją ir kai kuriais aspektais yra labiau numatomos nei mikrosomos 12 . Tačiau HepG2 ląstelėms trūksta beveik visų CYP450. Chem2D6 ekspresijos vektoriais laikinai arba stabiliai transfekuotos HepG2 ląstelės buvo naudojamos cheminių medžiagų metabolizmui ir toksiškumui ištirti, taip pat 13, 14, 15 narkotikų kandidatams patikrinti. Fluorogeninis zondas 3- [2- ( N , N -dietil- N -metil-amonio) etil] -7-metoksi-4-metilkumarinas (AMMC) yra naudingas substratas tiriant CYP2D6 aktyvumą transfekuotose HepG2 ląstelėse ir žiurkėse. ir žmogaus CYP2D6 mikrosomos 14, 16 . CYP2D6 O- demetiliuoja AMMC ir sudaro AMHC (3- [2- ( N , N -dietil- N- metilamonio) etil] -7-hidroksi-4-metilkumariną), kurį galima aptikti fluorimetrijos metodu. Taigi mūsų atrankos modelyje buvo naudojamos stabiliai transfekuotos HepG2 ląstelės, ekspresuojančios CYP2D6 * 1 arba * 10, ir kiekybiškai įvertintas CYP2D6 aktyvumas, analizuojant AMMC virsmą AMHC naudojant milometriją.

Šio tyrimo tikslai buvo patikrinti fitochemikalus, siekiant nustatyti, ar jie slopina CYP2D6, ir suprasti šių fitochemikalų poveikį kataliziniam CYP2D6 alelinių variantų CYP2D6 * 1 ir * 10 aktyvumui. Genotipo-fermento kinetikos ir genotipo tyrimai. priklausoma nuo vaistažolių ir vaistų sąveika gali būti svarbi nustatant ir kuriant vaistus, taip pat optimizuojant vaistų dozavimą tarp asmenų, tokiu būdu vadovaujantis individualia terapija.

Rezultatai

mRNR ir baltymų ekspresijos lygis stabiliai transfekuotose ląstelėse

Norint sukonstruoti CYP2D6 ekspresijos vektorių, žmogaus CYP2D6 * 1 cDNR (laukinio tipo) buvo įterptas į pcDNA3.1 (-) ir patikrintas seka. 188T ir 4268C mutacijos buvo įvestos į laukinio tipo cDNR, nukreipiant į vietą nukreiptą mutagenezę, ir patikrintos sekos nustatymu (1A pav.). HepG2 ląstelės buvo transfekuotos naudojant kontrolinį vektorių (pcDNA3.1), laukinio tipo vektorių (CYP2D6 * 1) arba mutacijos vektorių (CYP2D6 * 10). Kaip parodyta 1B ir 1C paveikslėliuose, CYP2D6 * 1 ir * 10 mRNR ir baltymų lygis jų atitinkamose transfekuotose ląstelėse buvo nepaprastai didesnis nei kontrolinėse ląstelėse, perkeltose pcDNA3.1. Atrinkome tas transfekuotas ląsteles, kurios neparodė reikšmingo skirtumo tarp CYP2D6 * 1 ir * 10 raiškos.

Image

(A) C188T ir G4268C mutacijų sekos nustatymo rezultatai. (B) mRNR CYP2D6 lygiai HepG2-CYP2D6 * 1, HepG2-CYP2D6 * 10 ir HepG2-pcDNA3.1. Visa RNR buvo išskirta, o genų ekspresija buvo įvertinta kiekybiniu realaus laiko PGR. (C) CYP2D6 baltymų lygis HepG2-CYP2D6 * 1, HepG2-CYP2D6 * 10 ir HepG2-pcDNA3.1 (-). Bendras baltymas buvo ekstrahuotas ir aptiktas atliekant Western blot analizę. Rezultatai rodo trijų nepriklausomų eksperimentų vidurkį ± SD.

Visas dydis

  • Atsisiųskite „PowerPoint“ skaidrę

CYP2D6 * 1 ir * 10 fermentų kinetika

AMMC katalizuoja CYP2D6 iki AMHC (2A paveikslas), kurį galima aptikti atliekant fluorimetriją. 2B paveiksle metabolitas 1′-OH bufuralolis buvo aptiktas HPLC. Mes nustatėme metabolitų susidarymo tiesiškumą 120 min. Kaip parodyta 2C paveiksle, AMMC- O- demetilinimo ir bufuralolio 1′-hidroksilinimo greitis rodo CYP2D6 * 1 ir * 10 aktyvumą, kurie yra linijiški su inkubacijos laiku. Taigi visuose paskesniuose eksperimentuose buvo naudojamas 90 minučių inkubacijos laikas.

Image

(A) AMMC ir metabolito AMHC struktūra. (B) Etaloninio tirpalo, kuriame yra 10 ng / ml 1′-OH-bufuralolio, AMMC ir metabolito AMHC struktūra, chromatogramos. (C) Nuo laiko priklausantis AMMC metabolizmas CYP2D6 * 1 ir * 10. AMMC (15 μmol / l) buvo inkubuotas su HepG2-CYP2D6 * 1 arba CYP2D6 * 10 96 šulinėlių plokštelėse. Šios vertės yra trigubų nustatymų vidurkiai ± SD. (D) Buvo analizuota AMMC metabolizinė kinetika, katalizuojama CYP2D6 * 1 ir * 10. Didėjant koncentracijai AMMC metabolinis aktyvumas buvo matuojamas naudojant HepG2-CYP2D6 * 1 (uždari apskritimai) arba CYP2D6 * 10 (trikampiai) 96 šulinėlių plokštelėse. Reikšmės (vidurkis ± SD) buvo pritaikytos Michaelio-Menteno lygtyje, naudojant netiesinę regresijos analizę.

Visas dydis

  • Atsisiųskite „PowerPoint“ skaidrę

CYP2D6 * 1 ir * 10, katalizuojančių AMMC ir bufuralolį, kinetikos konstantos ( K m, V max ir CL int ) pateiktos 1 lentelėje. Kaip parodyta 2D paveiksle ir 1 lentelėje, palyginti su CYP2D6 * 1, K m įvertinimai CYP2D6 * 10 ( P <0, 05) buvo atitinkamai 1, 25 ir 1, 32 karto didesnis AMMC ir bufuralolio. C max2D6 * 1 V max reikšmės buvo 3, 12 ir 5, 57 karto didesnės nei CYP2D6 * 10 ( P <0, 05). CYP2D6 * 10 turėjo mažesnį maksimalų greitį, todėl AMMC ir bufuralolio metabolitų CL vidinės vertės buvo atitinkamai 25, 6% ir 13, 6% nuo CYP2D6 * 1. Visuose paskesniuose eksperimentuose buvo naudojama substrato koncentracija (15 μmol / L), apytiksliai atspindinčios AMMC K m vertę.

Pilno dydžio lentelė

CYP2D6 * 1 ir * 10 aktyvumo slopinimas chinidinu

Chinidinas, gerai žinomas CYP2D6 inhibitorius, buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė slopinimo tyrime. Kaip parodyta 3A paveiksle, koncentracijose nuo 1 × 10 −3 iki 100 μmol / L buvo akivaizdus AMMC- O- demetilinimo ir bufuralolio 1′-hidroksilinimo loginis tiesinis sumažėjimas. Remiantis vizualiu Eadie-Hofstee apskaitos pavyzdžių patikrinimu (3B pav.), Chinidinas konkurencingai slopino CYP2D6 * 1- ir * 10 katalizuojamų AMMC- O- demetilinimą, kai K i vertės atitinkamai buvo 0, 012 ir 0, 038 μmol / L, taip pat bufuralolio 1′-hidroksilinimas, kurio K i vertės yra atitinkamai 0, 018 ir 0, 04 μmol / L. Chinidino K i verčių santykis buvo 3, 315 μmol / L AMMC ir 2, 211 μmol / L bufuralolio atžvilgiu. Tai rodo didesnį afinitetą CYP2D6 * 1 nei CYP2D6 * 10. Kaip matyti 2 lentelėje, kitų junginių IC 50 vertės buvo nustatyti ir klasifikuojami kaip stiprūs, vidutinio sunkumo, silpni arba neslopinantys, remiantis ankstesniais rezultatais 17 .

Image

(A) Skirtingų koncentracijų chinidino poveikis CYP2D6 * 1 ir * 10 tarpininkaujamam AMMC- O- demetilinimui ir bufuralolio 1′-hidroksilinimui. Rezultatai išreiškiami kontroline procentine dalimi (tiriama, kai nėra chinidino). (B) Tipiniai Eadie-Hofstee grafikai, skirti chinidino slopinimui CYP2D6 * 1 ir * 10 katalizuojamo AMMC- O- demetilinimo ir bufuralolio 1′-hidroksilinimo srityje. Substratų AMMC koncentracija svyravo nuo 0 iki 80 μmol / L, tuo tarpu naudojamos chinidino koncentracijos buvo 0 μmol / L (•), 0, 5 karto IC50 vertės (○) ir 1 karto IC50 vertės (▾). ).

Visas dydis

  • Atsisiųskite „PowerPoint“ skaidrę

Pilno dydžio lentelė

2 lentelėje mes nustatėme, kad dauguma vidutinio stiprumo inhibitorių IC50 vertės buvo mažesnės nei 100 μmol / L. Didelės fitochemikalų koncentracijos slopino transfekuotų HepG2 ląstelių aktyvumą, o žemos koncentracijos - ne (duomenys nepateikti). Taigi kitame tyrime mes pasirinkome 100 μmol / L kaip fitocheminę koncentraciją.

Galimų fitocheminių inhibitorių atranka

Remiantis 15 μmol / L AMMC inkubacijos sąlygomis 90 min., Naudojant HepG2-CYP2D6 * 1 ir * 10 ląstelių modelius, ištirta 63 fitocheminės medžiagos (100 μmol / l). Kaip parodyta 3 lentelėje, bilobalidas, koptisino sulfatas, šizandrinas B ir liuteolinas slopino stiprų poveikį (slopinimas> 70%), o šizandrinas A ir puerarinas slopino vidutiniškai (70%> slopinimas> 50%).

Pilno dydžio lentelė

Slopinamasis fitochemikalų poveikis CYP2D6 * 1 ir * 10 tarpininkaujamam AMMC-O demetilinimui

Norėdami dar labiau patvirtinti pradinio ekrano atitikmenis, mes ištyrėme nuo fitocheminių medžiagų koncentracijos priklausomą poveikį CYP2D6 * 1 ir * 10 tarpininkaujamam AMMC- O demetilinimui. Kaip parodyta 4 paveiksle, stiprūs inhibitoriai, įskaitant bilobalidą, koptisino sulfatą, šizandriną B, liuteoliną, šizandriną A ir puerariną, nuo dozės priklausomai slopino CYP2D6 * 1 ir * 10 katalizinį aktyvumą. Tačiau šių stiprių inhibitorių slopinamų CYP2D6 * 1 ir * 10 izoformų IC50 vertės nesiskyrė (4 lentelė). Slopinimo tipui nustatyti slopinimo duomenys buvo nubraižyti Eadie-Hofstee grafike. Šie duomenys rodo, kad visos ištirtos fitocheminės medžiagos slopina CYP2D6 * 1 ir * 10 (5 paveikslas). Iš CYP2D6 * 10 ląstelių gautos Ki vertės buvo šiek tiek didesnės nei iš CYP2D6 * 1 ląstelių, tačiau Ki reikšmių santykis ( C i CYP2D6 * 10 / K i CYP2D6 * 1 vertė) svyravo nuo 1, 05 iki 1, 30, kurie yra mažesni už chinidino K i santykį.

Image

Nuo koncentracijos priklausomas fitochemikalų poveikis CYP2D6 * 1 ir * 10 sąlygojamam AMMC- O- demetilinimui. HepG2-CYP2D6 * 1 (trikampiai) ir * 10 (uždari apskritimai) buvo inkubuoti su įvairiomis fitocheminių medžiagų koncentracijomis ir 12 μmol / L AMMC. Metabolitai buvo aptikti fluorimetrija, kaip aprašyta skyriuje Medžiagos ir metodai. Nesant fitocheminių medžiagų (0 μmol / L) buvo naudojamas AMMC, tuščiasis mėginys buvo naudojamas HepG2-pcDNA3.1, duomenys pateikiami kaip kontrolinės medžiagos procentinė dalis pagal šią formulę: (mėginio duomenys - tuščia) / (kontroliniai duomenys - tušti) × 100%. Šios vertės pateikiamos kaip trijų eksperimentų nustatymo vieno eksperimento vidurkis ± SD.

Visas dydis

  • Atsisiųskite „PowerPoint“ skaidrę

Pilno dydžio lentelė

Image

Reprezentatyvūs Eadie-Hofstee plotai, skirti fitocheminiam CYP2D6 * 1 ir * 10 katalizuojamos AMMC- O -demetilinimo slopinimui. Substrato AMMC koncentracija svyravo nuo 0 iki 80 μmol / L, tuo tarpu naudojamos inhibitorių koncentracijos buvo 0 μmol / L (•), 0, 5 karto IC50 vertės (○) ir 1 karto IC50 vertės (▾). .

Visas dydis

  • Atsisiųskite „PowerPoint“ skaidrę

Diskusija

Šiame tyrime mes sukūrėme CYP2D6 * 1 ir * 10 ekspresuojančius ląstelių modelius, o eksperimentinės sąlygos buvo optimizuotos pradiniam fitocheminių inhibitorių patikrinimui. Mes nustatėme santykinį CYP2D6 * 1 ir CYP2D6 * 10 katalizinį aktyvumą metabolizuojant AMMC ir bufuralolį ir gavome supratimą apie inhibitorių poveikį CYP2D6 variantams. Pradiniame atrankos tyrime šeši fitocheminiai preparatai konkurencingai slopino CYP2D6 * 1- ir * 10-tarpininkaujamą AMMC- O- demetilinimą priklausomai nuo dozės, tačiau KYP vertės CYP2D6 * 1 ir * 10 nesiskyrė.

Nors buvo tiriami CYP2D6 metaboliniai skirtumai tarp individų ir ryšys su genotipu 18, nuo CYP2D6 priklausomo vaisto ar vaisto ar vaistažolių sąveikos tebėra mažiau ištirta. CYP2D6 * 10 yra susijęs su padidėjusiomis substratų, tokių kaip bufuralolis, venlafaksinas ir 5, 19, K m reikšmėmis. Šiame tyrime nustatyta, kad CYP2D6 * 10 raiška transfekuotose HepG2 ląstelėse yra skirtinga. Norėdami palyginti su CYP2D6 * 1, atrinkome ląsteles, kurių CYP2D6 * 10 išraiška yra panaši į CYP2D * 1. Taigi galėtume nustatyti CYP2D6 * 1 ir * 10 fitocheminių medžiagų slopinimo skirtumą, kuris pašalina komplikaciją dėl skirtingos CYP2D6 * 1 ir * 10 išraiškos.

Mūsų tyrimų metu buvo nustatyti AMMC ir bufuralolio CYP2D6 * 10 tarpininkavimo biotransformacijos kinetiniai parametrai, kurie nuosekliai parodė mažesnį katalizinį efektyvumą ir mažesnį afinitetą, palyginti su CYP2D6 * 1. Kadangi CYP2D6 * 10 pasižymėjo nedideliais K m pokyčiais, sumažėjo vidinis vidinis CYP2D6 * 10 klirensas AMMC ir bufuralolio atžvilgiu daugiausia buvo dėl reikšmingo V max sumažėjimo. Ankstesniuose tyrimuose CYP2D6 * 1- ir * 10-tarpininkaujamo bufuralolio 1′-hidroksilinimo K m vertės buvo atitinkamai 1, 7–25 μmol / L ir 12–50 μmol / L, atitinkamai 20, panašios į mūsų rezultatus. AMMC CYP2D6 * 1 metabolizmo K m vertė (12, 45 μmol / L) mūsų tyrimuose buvo mažesnė už anksčiau praneštą K m vertę (19, 2 μmol / L), kuri taip pat buvo nustatyta naudojant ląstelių modelius 17, bet didesnė nei naudojant žmogaus kepenų mikrosomas (3 μmol / L) 14 . Šių tyrimų skirtumų priežastis gali būti skirtingi panaudoto fermento šaltiniai ir ekspresijos lygiai, taip pat skirtingos naudojamos inkubacijos sąlygos.

Norint patvirtinti CYP2D6 slopinimo testą naudojant AMMC, nuo koncentracijos priklausantys slopinimai ir reprezentatyvūs Eadie-Hofstee grafikai parodė, kad teigiamas inhibitorius chinidinas konkurencingai slopina CYP2D6 * 1- ir * 10-tarpininkaujamą AMMC- O- demetilinimą ir bufuralolio 1′-hidroksilinimą. Pradiniame atrankos tyrime šeši fitocheminiai vaistai slopino CYP2D6 * 1 ir * 10 priklausomai nuo koncentracijos. Reprezentatyvūs „Eadie-Hofstee“ fitochemikalų apskaitos bareliai parodė, kad slopinimo būdas yra konkurencingas. Fitocheminių medžiagų K i santykis (CYP2D6 * 10 / * 1 vertės) svyravo nuo 1, 05 iki 1, 30, tai rodo, kad fitochemikalų slopinamas CYP2D6 * 10 yra ne toks ryškus kaip CYP2D6 * 1. Nustatyta, kad chinidinas yra daugiau efektyvus CYP2D6 * 1 inhibitorius pagal K i reikšmes yra 2–3 kartus didesnis nei CYP2D6 * 10, o tai yra panašus į ankstesnius rezultatus 22 . Tačiau tiesioginis ekstrapoliavimas, kad kiti CYP2D6 * 1 inhibitoriai turi didesnį afinitetą CYP2D6 * 1 nei kiti variantai, nėra tiesa. Ankstesniais tyrimais nustatyta, kad funkciškai sumažėjusių alelinių variantų (CYP2D6 * 10 ir * 17) fermentų ir substratų arba fermentų inhibitorių afinitetas gali būti mažesnis, didesnis arba panašus į CYP2D6 * 1 22 .

Bilobalidas yra pagrindinė terpenoidų dalis Ginkgo lapuose ir sukelia keletą neuroprotekcinių poveikių 21 . Bilobalidas konkurencingai slopino žmogaus rekombinantinio CYP2D6 (IC50 = 11 μmol / L) katalizinį aktyvumą 22 . Išgėrus vieną dozę skirtingų Ginkgo produktų, tokių kaip Geriaforce tinktūra, Ginkgo šviežių augalų ekstrakto tabletės ir EGb 761 tabletės, didžiausia bilobalido koncentracija kraujo plazmoje buvo atitinkamai 3, 53, 11, 68 ir 26, 85 ng / ml 23, mažesnė už IC. 50 vertybių iš ankstesnių tyrimų ir mūsų rezultatai. Vis dėlto ilgalaikio vartojimo „ Ginkgo“ produktų biologinis prieinamumas ir farmakokinetika turėtų būti toliau tiriami atliekant klinikinius tyrimus.

Koptisinas yra alkaloidas, randamas Kinijos aukso gyslose (Coptis chinensis ) ir vaidina svarbų vaidmenį apsaugant širdies veiklą ir gydant virškinimo sutrikimus 24 . Koptizinas pasižymėjo stipriu nuo koncentracijos priklausomu CYP2D6 slopinimu (IC50 = 4, 4 μmol / l), naudojant žmogaus kepenų mikrosomas (HLM) 10 . Nors mūsų tyrimuose bilobalidas ir koptisinas slopino AMMC- O- demetilinimą, stabiliai transfekuotų ląstelių modelių IC50 vertės buvo didesnės nei rekombinantinio fermento ir HLM. Spėjame, kad didesnė IC50 vertė gali būti dėl fitochemikalų pernešimo per HepG2 ląstelių membranas ir (arba) skirtingų inkubavimo sąlygų.

Šizandrinas A ir šizandrinas B yra pagrindinės šizandrino vaisių ekstrakto dalys, saugančios kepenis nuo toksinių problemų 25, 26 . Buvo pranešta, kad šizandrinas A ir šizandrinas B riboja konkurenciją nuo CYP2D6 priklausomo aktyvumo (IC50 vertės> 10 μmol / L) 27, 28 . Šiame tyrime mes pastebėjome, kad šizandrinas A ir šizandrinas B konkurencingai slopina CYP2D6 * 1 ir * 10 (IC50 = 27, 76 ir 24, 8 μmol / L).

Luteolinas, vienas iš labiausiai paplitusių flavonų, yra laisvųjų radikalų šalintojas, atliekantis antioksidaciją ir imuninės sistemos moduliavimą 29, 30 . Ataskaitose nustatyta, kad CYP2D6 katalizuojamas dekstrometorfano demetilinimas sumažėjo iki maždaug 40% kontrolinio aktyvumo, kai jis veikiamas 50 μmol / l liuteolino 31 . Šiame tyrime buvo stebimi panašūs rezultatai, nes CYP2D6 * 1 katalizuotas AMMC- O- demetilinimas sumažėjo iki 27, 6% 40 μmol / l liuteolino. Buvo pranešta, kad aptinkama liuteolino koncentracija plazmoje buvo ne didesnė kaip 15 μmol / L po tikroviško vartojimo 32 . Tas tyrimas parodė, kad 15 μmol / l liuteolino greičiausiai slopina CYP2D6 aktyvumą, tačiau norint patvirtinti šį rezultatą žmonėms, reikia atlikti klinikinį farmakologinį tyrimą.

Puerarinas yra flavonoidų darinys, esantis Radix puerariae (Ge-gen), yra 5- HT2C receptorių ir benzodiazepino 33 vietos antagonistas. Puerarinas konkurencingai slopino CYP2D6 mūsų ląstelių modelyje. Tarp CYP2D6 * 1 ir * 10 slopinimo puerarinu in vitro nebuvo jokio ryšio, panašiai kaip in vivo eksperimentas, anksčiau atliktas mūsų laboratorijoje 34 .

Apibendrinant, mes parodėme stabilių CYP2D6 ekspresijos ląstelių modelių naudojimą kinetiniam CYP2D6 * 1 ir * 10 tarpininkaujamo bufuralolio 1′-hidroksilinimo ir AMMC- O- demetilinimo vertinimui. Naudodamiesi šiais ląstelių modeliais mes toliau tyrėme nuo CYP2D6 priklausomą žolelių ir vaistų sąveiką. Nuo koncentracijos priklausomas slopinimas ir tipiniai Eadie-Hofstee grafikai rodo, kad šie fitochemikalai, įskaitant bilobalidą, koptisino sulfatą, šizandriną B, liuteoliną, šizandriną A ir puerariną, konkurencingai slopina CYP2D6 * 1 ir * 10 aktyvumą. Nors CYP2D6 * 10 turėjo mažesnį fermento aktyvumą nei CYP2D6 * 1, fitocheminių medžiagų slopinimas buvo panašus tarp šių dviejų variantų. Norint nustatyti, ar šių fitochemikalų poveikis in vitro turi klinikinę reikšmę žmonėms, būtina atlikti papildomus tyrimus.

Autoriaus indėlis

Hong-hao ZHOU, Wei ZHANG ir Qiang QU sukūrė tyrimus; Tyrimus atliko Qiang QU, Lu HAN ir Lan-xiang WU; Yi-wen ZHANG atliko HPLC analizę; Jian QU ir Min ZHAN išanalizavo duomenis; ir Qiang QU parašė darbą.

Santrumpos

AMMC, 3- [2- ( N , N -dietil- N -metil-amonio) etil] -7-metoksi-4-metilkumarinas; P450, žmogaus citochromas P450; CYP2D6, žmogaus citochromas P450 2D6; HPLC, aukšto slėgio / efektyvi skysčių chromatografija; RFU, santykiniai fluorescenciniai vienetai.

Papildoma informacija

„Word“ dokumentai

  1. 1.

    S1 lentelė

    CDNR klono, mutacijos ir RT-PGR pradmenys

    Papildomą informaciją galite rasti „Acta Pharmacologica Sinica“ tinklalapyje.