Pd-l1 mrna ekspresija plazmos egzosomose siejama su atsakymu į anti-pd-1 antikūnus melanomos ir nsclc atvejais | britų žurnalas apie vėžį

Pd-l1 mrna ekspresija plazmos egzosomose siejama su atsakymu į anti-pd-1 antikūnus melanomos ir nsclc atvejais | britų žurnalas apie vėžį

Anonim

Šis straipsnis buvo atnaujintas

Anotacija

Pagrindiniai faktai:

PD-L1 ekspresija naviko audiniuose plačiai naudojama pacientams atrinkti, norintiems gauti anti-PD-1 / PD-L1 antikūnus, tačiau trūksta duomenų apie PD-L1 lygio plazmoje koreliaciją su gydymo poveikiu.

Metodai:

Norint ištirti ryšį tarp PD-L1 mRNR iš plazmos gautų egzosomų ir atsako į nivolumabą ir pembrolizumabą pacientams, sergantiems melanoma ( n = 18) ir NSCLC ( n = 8), kraujas buvo paimtas 0 momento ir po 2 mėnesių. Egzosominė PD-L1 mRNR buvo išmatuota skaitmeniniu lašeliniu PGR.

Rezultatai:

Vidutinis ± sem PD-L1 lygis pacientams, kuriems nustatytas visiškas ir dalinis atsakas, buvo atitinkamai 830, 4 ± 231, 3 ir 242, 5 ± 82, 5 kopijos / ml, atitinkamai 0 ir 2 mėnesius ( P = 0, 016). Pacientams, sergantiems stabilia liga, vidutinės ± sem vertės buvo 298, 8 ± 97, 2, palyginti su 247, 5 ± 29, 8 kopijomis viename mililitre ( P = 0, 586), tuo tarpu progresuojančios ligos metu PD-L1 mRNR lygis buvo 204, 0 ± 68, 8, palyginti su 416, 0 ± 87, 8 kopijomis mililitre. Atitinkamai 0 ir 2 mėnesiai ( P = 0, 001).

Išvados:

Šis tyrimas rodo, kad egzosominis PD-L1 yra reikšmingai susijęs su atsaku į gydymą.

Pagrindinis

Imunoterapija iš esmės pagerino kelių navikų, įskaitant vėžį, silpnai reaguojantį į chemoterapiją, klinikinę baigtį (Robert et al, 2015; Reck et al, 2016). PD-L1 įvertinimas navikiniame audinyje (ty NSCLC) leidžia nustatyti pacientų populiaciją, kuriai didesnė tikimybė atsirasti chemoterapijai (Reck ir kt., 2016). Tačiau signalo perdavimo takų (pvz., MAPK) aktyvumo pokyčiai (Jiang ir kt., 2013) gali turėti įtakos PD-L1 lygiams, taip pablogindami jo prognozuojamąją vertę, įvertinus vieno audinio biopsiją. Dėl šių priežasčių mokslo bendruomenės susidomėjimas nukreiptas į kitus galimus biomarkerius, tokius kaip mutacinė apkrova ir mikrosatellito nestabilumas (Rizvi et al, 2015; Dudley et al, 2016). Egzosomos yra mikrovezikulės, aktyviai išsiskiriančios iš vėžio ląstelių; jų dydis yra 40–150 nm ir lipidų dvisluoksnė membrana ir jie neša baltymus, RNR ir ląstelių, iš kurių yra kilę, DNR (Kalluri, 2016). Įrodytas jų dalyvavimas imuniniame signalizavime, aplinkinių ląstelių perprogramavime, taip pat jų gebėjimas paveikti naviko mikroaplinką, kad būtų lengviau išsilaisvinti iš imuniteto, atsparumas terapijai, naviko augimas ir metastazės (Kalluri, 2016).

Dėl šių priežasčių šiuo tyrimu buvo siekiama įvertinti PD-L1 mRNR ekspresiją iš plazmos pagamintose egzosomose, kad būtų galima stebėti atsaką į anti-PD-1 agentus nivolumabą ir pembrolizumabą melanomos ir NSCLC metu.

Pacientai ir metodai

Pacientų

Tirti pacientai, kuriems pasireiškė lokaliai išplitusi ar metastazavusi melanoma arba NŠKL, atsižvelgiant į patvirtintą schemą, atsižvelgiant į nivolumabą (240 mg iv kas 2 savaites) arba pembrolizumabą (200 mg iv kas 3 savaites). Eksperimentinę tyrimo dalį sudarė du kiekvieno paciento kraujo mėginiai, skirti išmatuoti PD-L1 egzosominių mRNR lygius 0 (pradinis) ir radiologinio ligos būklės įvertinimo metu, ty po 2 gydymo mėnesių. Visiškas arba dalinis atsakas (CR, PR), ligos stabilizavimas (SD) ir ligos progresavimas (PD) buvo apibrėžti pagal RECIST (1.1 v.) Kriterijus.

Egzosominio PD-L1 matavimas

6 ml kraujo mėginys buvo paimtas į EDTA mėgintuvėlius ir centrifuguotas 10 min., Esant 1900 g, per 2 valandas. Egzosomų išskyrimas iš plazmos ir RNR ekstrahavimas anksčiau buvo aprašytas (Del Re ir kt., 2017) ir atliktas naudojant „exoRNeasy“ rinkinį (Qiagen, Valencia, CA). PD-L1 mRNR analizė buvo atlikta QX100 ddPCR (Bio-Rad, Hercules, CA, JAV), naudojant „One-Step RT-ddPCR“ rinkinį. PD-L1 ekspresijai įvertinti buvo naudojamas „PrimePCR ddPCR“ ekspresijos zondo tyrimas CD274 (žmogui), o žmogaus ß-aktino ddPCR tyrimas buvo naudojamas kaip vidinė kontrolė. Fluorescencinio signalo kiekybinis nustatymas buvo atliekamas lašelių skaitytuvu ir „QuantaSoft“ programine įranga (Bio-Rad). Teigiamų ir neigiamų lašelių santykis buvo naudojamas nustatant mRNR kopijų skaičių tikslinės molekulės mililitre įvesties reakcijoje. Lašai, kurių fluorescencijos intensyvumo riba yra didesnė nei 4000, buvo laikomi teigiamais. Kiekvienas plazmos mėginys buvo ekstrahuotas vieną kartą ir kiekvienam mėginiui buvo atlikti trigubos ddPCR analizės. Žemiau pateiktos vertės (kopijos viename mililitre) rodo trigubo vidurkį.

Statistinė analizė

Inferencinė statistika buvo naudojama skirtumų tarp suporuotų mėginių (PD-L1 lygiai 0 ir 2 mėnesiais; suporuotas t- testas) ir neporuotų grupių (laikas 0 PR + CR vs SD + PD; neporuotas t- testas) reikšmingumui įvertinti; reikšmingumo lygis buvo nustatytas 5%. Statistiniams skaičiavimams buvo naudojama „GraphPad“ programinė įranga („GraphPad Software“, La Jolla, CA, JAV internetinė versija).

Rezultatai

Buvo įtraukta aštuoniolika pacientų, sergančių melanoma (1 lentelė); buvo 2 CR, 8 PR, 2 SD ir 6 PD. MRNR kopijų skaičius viename PD-L1 egzempliorių mililitre mililitre sumažėjo pacientams, sergantiems CR / PR (vidutiniškai 793, 5 vs 231, laikas 0 vs 2 mėnesiai), tuo tarpu padidėjo pacientams, sergantiems PD (vidutiniškai 143, 3 vs 326, 7, laikas atitinkamai 0 ir 2 mėnesiai). Du pacientai mirė: vienas dėl PD (mRNR PD-L1 kopijų viename mililitre padidėjo nuo 90 iki 360), o kitas - dėl ūminio miokardo infarkto, tuo tarpu sergant CR (PD-L1 mRNR sumažėjo nuo 2000 iki 1000 kopijų mililitre). 2 lentelėje pateiktas išsamus PD-L1 pokyčių aprašymas.

Pilno dydžio lentelė

Pilno dydžio lentelė

Gydant pembrolizumabu, 4 ir 9 pacientai pranešė apie PR; galbūt netikėtai PD-L1 nebuvo aptikta plazmoje pakartotinai įvertinant naviką. Tačiau šiems dviem pacientams buvo aptinkama egzosominė ß-aktino mRNR (atitinkamai 8, 1 ir 9, 0 x 10 6 kopijos viename mililitre), taigi buvo atmestas klaidingai neigiamas rezultatas.

Į tyrimą buvo įtraukti aštuoni pacientai, sergantys NŠKL (1 lentelė); buvo 2 PR, 2 SD ir 4 PD. MRNR kopijos viename PD-L1 mililitre buvo koreliuojamos su naviko reakcija. Aiškiai padaugėjo pacientų, sergančių PD (vidutiniškai 295 ir 550 kopijų viename mililitre, laikas 0 ir 2 mėnesiai), ir sumažėjo pacientų, pasiekusių PR ( vidurkis, atitinkamai 1015 ir 300 kopijų mililitre, laikas atitinkamai 0 ir 2 mėnesiai). Pacientams, sergantiems SD, buvo stebimas nedidelis kitimas (atitinkamai atitinkamai 455 ir 285, laikas 0 ir 2 mėnesiai) (2 lentelė). 1 paveiksle pateikti 2 reprezentatyvių pacientų, sergančių NSCLC, duomenys, rodantys PR ir PD; PD-L1 koncentracija plazmoje kinta priklausomai nuo ligos reakcijos ar progresavimo.

Image

Gydymo anti-PD-1 antikūnais poveikis egzosominei PD-L1 raiškai ir klinikiniam atsakui, sergant NSCLC ir melanoma. ( A ) Vidutinės PD-L1 vertės (kopijos viename mililitre), įvertintos pradinėje situacijoje (laikas 0, tamsiai pilka) ir naviko pakartotinio įvertinimo metu po 2 mėnesių gydymo (šviesiai pilkos spalvos) pacientams, sugrupuotiems pagal naviko atsaką (CR + PR, SD ir PD); P vertės nurodomos stulpelių viršuje. ddPCR brėžiniai ( B ir C ), rodantys PD-L1 egzosominių mRNR kitimus stebint 2 nesmulkialąstelinius plaučių vėžiu sergančius pacientus. Mėlyni taškai, pažymėti mėlynai, žymi PD-L1, o žali taškai - ß-aktiną. ( B ) PD-L1 ekspresija paciento priėmimo į tyrimą metu (1700 kopijų / ml) ir sumažėjimas po 2 mėnesių (400 kopijų / ml); pacientas parodė dalinį atsaką. ( C ) PD-L1 ekspresijos nustatymas pradiniame lygmenyje (270 kopijų / ml) ir padidėja po 2 mėnesių (700 kopijų / ml); tiriamajam buvo ligos progresavimas. CR = visiškas atsakymas; PD = ligos progresavimas; PR = dalinis atsakas; SD = stabili liga.

Visas dydis

Bendroje populiacijoje skirtumas tarp PD-L1 mRNR kopijų viename mililitre buvo reikšmingas tiek pacientams, sergantiems CR + PR (830, 4 ± 231, 3 0 metu, palyginti su 242, 5 ± 82, 5 po 2 mėnesių, P = 0, 016), tiek PD (204, 0 ± 68, 8, 8). vs 416, 0 ± 87, 8, laikas 0 palyginti su 2 mėnesiais vėliau, P = 0, 001), bet ne, kaip tikėtasi, pacientams, sergantiems SD (298, 8 ± 97, 2 tuo metu 0, palyginti su 247, 5 ± 29, 8 po 2 mėnesių, P = 0, 586; 2 lentelė). 0 metu tiriamieji, sergantys CR ir PR, parodė žymiai didesnį PD-L1 mRNR kopijų kiekį viename mililitre, palyginti su tiriamaisiais, kurių SD ir PD (830, 4 ± 231, 3, palyginti su 231, 1 ± 55, 7, P = 0, 012; 2 lentelė).

Diskusija

Šis tyrimas pirmiausia parodė egzosominius PD-L1 ekspresijos pokyčius gydymo anti-PD-1 antikūnais metu. Be to, rezultatai rodo, kad pacientų, reaguojančių į gydymą, PD-L1 lygis iš plazmos gautų egzosomų reikšmingai sumažėjo ir padidėjo pacientams, sergantiems ligos progresavimu, o, kaip tikėtasi, reikšmingų pokyčių pacientams, sergantiems SD, nepastebėta.

PD-L1 raiškos kintamumo klausimas atsižvelgiant į jo prognozuojamą vaidmenį buvo nagrinėjamas audinių biopsijose, surinktose tiems patiems pacientams skirtingais laikotarpiais (Cho ir kt., 2017). Prognozuojamas PD-L1 raiškos vaidmuo navikiniame audinyje vis dar yra diskusijų objektas, nes vėžys, kurio PD-L1 ekspresija yra maža, gali reaguoti į nivolumabą, o išgyvenimas yra ilgesnis nei pacientams, gydomiems chemoterapija (Borghaei ir kt., 2015). Be to, nežinoma, kokį poveikį PD-L1 raiškai gali turėti kiti gydymo būdai, įskaitant chemoterapiją ir radioterapiją. Taigi jo įvertinimas pirminio naviko metu diagnozės nustatymo metu gali nepateikti informacijos apie pokyčius, atsirandančius kloninės evoliucijos metu ir selektyvų gydymo slėgį. Cirkuliacinių biomarkerių tyrimų padaugėja, nes jie gali suteikti svarbios informacijos apie dinaminį atsaką į gydymą. Nors jie nėra skirti pacientams parinkti gydytis anti-PD-1 / PD-L1, jie gali suteikti reikiamos informacijos apie klinikinius rezultatus. PD-L1 ekspresijos cirkuliuojančiose navikinėse ląstelėse įvertinimas buvo įvertintas sergant šlapimo pūslės vėžiu ir NSCLC, atsižvelgiant į jo potencialias galimybes parinkti pacientus, kurie turi būti gydomi anti-PD-1 arba PD-L1 antikūnais (Anantharaman ir kt., 2016; Nicolazzo ir kt., 2016). Kiti tyrimai, vertinantys naviko mutacinę naštą ar mikrosatellitų nestabilumą, taip pat gali būti tinkami individualizuoti gydymą, nors jie vadovaujasi skirtinga strategija ir PD-L1 raiška nėra konkrečiai nagrinėjama (Rizvi ir kt., 2015; Dudley ir kt., 2016).

Šiame tyrime egzosomų panaudojimo strategiją pasiūlė jų sugebėjimas išsaugoti nepažeistą mRNR. Egzosomos turi intriguojantį vaidmenį signalizuojant vėžį ir stiprinant imunitetą; jie dalyvauja bendravime tarp ląstelių, atspindi gydymo sukeltus pokyčius ir, svarbiausia, dalyvauja imuniniame pabėgime (Liu ir kt., 2015). Egzosomų gebėjimas perduoti slopinamuosius signalus efektorinėms ląstelėms, įskaitant NK, makrofagus, dendritines ląsteles ir T ląsteles, gali paaiškinti, kodėl PD-L1 sumažėjimas reaguojantiems pacientams yra susijęs su naviko reakcija ir galbūt ląstelių imuniteto atstatymu. Norint patvirtinti šią hipotezę, reikės didesnių pacientų grupių, taip pat palyginti PD-L1 raišką suporuotuose audiniuose ir iš plazmos gautas egzosomas.

Apibendrinant galima pasakyti, kad šis darbas ribotai populiacijai parodo, kad yra įmanoma išmatuoti PD-L1 ekspresiją iš plazmos pagamintose egzosomose, ir tai gali suteikti naudingos informacijos apie atsaką į gydymą anti-PD-1 antikūnais.

Pokyčių istorija

Šis darbas publikuojamas pagal standartinę licenciją skelbti sutartį. Po 12 mėnesių darbas taps laisvai prieinamas, o licencijos sąlygos bus pakeistos į „Creative Commons“ priskyrimo - nekomercinio - bendro naudojimo - nepanaudotą 4.0 licenciją.