Perinatalinis stresas turi įtakos limfocitų pogrupio skaičiui naujagimiuose. kartos r tyrimas | vaikų tyrimai

Perinatalinis stresas turi įtakos limfocitų pogrupio skaičiui naujagimiuose. kartos r tyrimas | vaikų tyrimai

Anonim

Anotacija

Bendrai populiacijai nežinoma, ar su stresu susiję perinataliniai veiksniai turi įtakos limfocitų pogrupio skaičiui naujagimiuose. Šio tyrimo tikslas buvo įvertinti perinatalinių veiksnių, susijusių su stresu ir hipoksija (gimdymo būdas, Apgar balai ir virkštelės kraujo pH), ryšius su absoliučiais limfocitų pogrupiais (T, B, NK, pagalbininkas T, citotoksinis T, naivus, atmintis T) 571 naujagimio virkštelės kraujyje. Šis tyrimas buvo įtrauktas į populiacijos perspektyvų kohortos tyrimą nuo vaisiaus gyvenimo pradžios. Visi modeliai buvo pakoreguoti atsižvelgiant į gestacinį amžių, gimimo svorį, lytį, motinos karščiavimą ir visus kitus perinatalinius su stresu susijusius veiksnius. Mūsų rezultatai parodė, kad didėjantis su stresu susijęs gimdymo būdas buvo teigiamai susijęs su NK ir atminties T-limfocitų pogrupių skaičiumi (visi p <0, 01). Apgar balų poveikis limfocitų pogrupiams buvo paaiškintas virkštelės kraujo pH. Mažesnis virkštelės kraujo pH buvo susijęs su didesniu B, NK ir atminties T-limfocitų skaičiumi (visų p <0, 05). Pristatymo būdo ir virkštelės kraujo pH poveikis kitiems limfocitų pogrupiams nepastebėtas. Padarome išvadą, kad bendrojoje populiacijoje limfocitų pogrupis naujagimiuose didėja didėjant su stresu ir hipoksija susijusiems perinataliniams veiksniams.

Pagrindinis

Naujagimio imunologinė būklė dažnai nustatoma įvertinant absoliučią įvairių limfocitų pogrupių skaičių virkštelės kraujyje (1–4). Tačiau tokius duomenis gimus, reikia aiškinti atsargiai, nes limfocitų pogrupio skaičiui gali turėti įtakos augimas, stresas ir hipoksijos reiškiniai, atsirandantys vėlyvame prenataliniame ir ankstyvame postnataliniame gyvenime. Buvo teigiama, kad limfocitų pogrupių pasiskirstymas yra susijęs su nėštumo amžiumi gimimo metu ir gimimo svoriu (5–8). Nežinia, ar kiti perinataliniai veiksniai, susiję su vaisiaus savijauta, stresu ir hipoksija, įskaitant gimdymo būdą, „Apgar“ balus ar virkštelės kraujo pH, daro įtaką įvairių limfocitų pogrupio skaičiui gimus.

Kol kas gimdymo būdo ir limfocitų pogrupių tyrimai vis dar nėra aiškūs. Tai gali būti dėl mažų tiriamųjų populiacijų, tiriamų limfocitų pogrupių kintamumo arba neatsižvelgiant į kitus galimus įtakojančius veiksnius (5, 6, 9–16). Daugelio šių tyrimų rezultatai rodo, kad naujagimiams, gimstantiems iš makšties, padidėja limfocitų pogrupis, palyginti su naujagimiais, gimusiais atliekant cezario operaciją (9–11, 13–16). Endokrininės apykaitos pokyčiai stresinio gimdymo metu, ypač hipoksija ir katecholaminų bei kortizolio padidėjimas, buvo laikomi pagrindine tokio poveikio priežastimi (17–19). Manoma, kad, be šios streso koncepcijos, neigiami „Apgar“ rodikliai ir virkštelės kraujo pH, abu perinatalinės hipoksijos rezultatai, turi įtakos limfocitų pogrupio skaičiui gimus (9, 20–22).

Ištyrėme 571 naujagimio, dalyvaujančio populiacijos perspektyviniame kohortos tyrime, perinatalinių veiksnių, susijusių su stresu ir hipoksija, sąsajas, įskaitant gimdymo būdą, „Apgar“ balus, ir virkštelės kraujo pH su absoliučiu limfocitų (T, B ir NK) ir T-limfocitų pogrupiai (pagalbiniai, citotoksiniai, naivūs ir atminties T) naujagimių virkštelės kraujyje.

METODAI

Dizainas.

Šis tyrimas buvo įtrauktas į „Generation R Study“ - populiacijos perspektyvų kohortos tyrimą nuo vaisiaus gyvenimo iki jauno suaugimo. R kartos tyrimas buvo skirtas ankstyviems aplinkos ir genetiniams augimo, vystymosi ir sveikatos veiksniams nustatyti ir anksčiau buvo išsamiai aprašytas (23, 24). Išsamesni vaisiaus ir pogimdyminio augimo bei vystymosi vertinimai buvo atlikti 1232 Nyderlandų nėščių moterų ir jų vaikų pogrupyje, vadinamame „Generation R Focus Study“ (23, 24). Iš visų nėščių moterų ir jų partnerių 79 proc. Dalyvavo kartos „R“ fokusavimo tyrime. Jų vaikai gimė nuo 2003 m. Vasario mėn. Iki 2005 m. Rugpjūčio mėn. Roterdamo „Erasmus“ medicinos centro medicinos etikos komitetas patvirtino tyrimą. Iš visų dalyvių buvo gautas informuotas rašytinis sutikimas.

Pristatymo būdas, „Apgar“ rodikliai ir virkštelės kraujo pH.

Informacija apie pristatymo būdą, 1- ir 5-minučių Apgar balai (priskiriant 0–2 balus širdies susitraukimų dažniui, kvėpavimo pastangoms, raumenų tonusui, dirglumui refleksui ir spalvai) ir virkštelės kraujo pH buvo gauti iš standartizuotų pristatymo registracijų. akušerių ir akušerių (23–26). Heparinizuoti virkštelės kraujo mėginiai buvo paimti iš iškart užrišto, izoliuoto virkštelės gabalo. Virkštelės kraujo dujos buvo analizuojamos įprastomis automatinėmis dujų tikrinimo mašinomis, siekiant nustatyti pH, Po 2 ir Pco 2, tuo tarpu buvo apskaičiuotas bazės perteklius. Laikas nuo virkštelės kraujo mėginių paėmimo iki nustatymo buvo mažesnis nei 60 min. Kraujo dujų analizatoriai buvo kalibruojami ir standartizuoti etaloninėmis dujomis ir pH tirpalais.

Limfocitų pogrupių imunofenotipų nustatymas.

Iš akušerių ir akušerių iš heparinizuotų mėgintuvėlių paimtas veninis virkštelės kraujas iškart po gimdymo ir per 24 valandas kambario temperatūroje buvo gabenamas į Erasmus medicinos centro imunologijos laboratoriją. Virkštelės kraujo mėginiai, negauti per 24 valandas (savaitgalio dienas), nebuvo įtraukti, nes tų mėginių srauto citometrinė analizė bandomojoje tyrimo fazėje nepatikimų rezultatų parodė. Siekiant nustatyti absoliutų limfocitų (T, B ir NK) ir T-limfocitų pogrupių (pagalbinis, citotoksinis, naivusis ir atminties T) absoliutų skaičių buvo atliktas srauto citometrinis imunofenotipas. Tam MAb CD3, CD19, CD16.CD56, CD4, CD8, CD45RA ir CD45RO buvo konjuguoti su etiketėmis FITC (FITC, Becton Dickinson, Erebodegem, Belgija), peridino chlorofilo baltymu (PerCP, Becton Dickinson, Erebodegem, Belgija). ), peridino chlorofilo baltymo-cichromas 5.5 (PerCP-Cy5.5, Becton Dickinson, Erebodegem, Belgija), alofococianinas (APC, Becton Dickinson, Erebodegem, Belgija), fikoeritrinas (PE, Becton Dickinson, Erebodegem, Belgija; Dako, Glosstr. Danija), fikoeritrin-cianino dažai (PE-cy7, Becton Dickinson, Erebodegem, Belgija), alofikocianino-cianino dažai (APC-cy7, Becton Dickinson, Erebodegem, Belgija) ir rodamiinas (RD1, Beckman Coulter, Nyderlandai, Mijdrecht). (1 lentelė). Absoliutus T, B ir NK limfocitų skaičius buvo nustatytas lizuoto viso kraujo metodu (50 μL viso kraujo viename mėginyje), naudojant įprastą standartizuotą vienos platformos metodą su BD TruCOUNT mėgintuvėliais Becton Dickinson (BD). Tokiu būdu limfocitai buvo ištirti CD45 ir FSC pagrindu, kad būtų išvengta neužsikrėtusių eritrocitų (27–29). Mėginiai buvo išmatuoti „Beckman Coulter“ srauto citometru (BD) ir analizuojami naudojant „BD CellQuest“ programinę įrangą, kaip nurodė gamintojas. T limfocitų pogrupiai buvo nustatyti naudojant 6 spalvų dažymą ir aptikti BD LSR II srauto citometru (Becton Dickinson, San Jose, CA). Šis srauto citometras įprastai naudojamas diagnostikos laboratorijoje ir kiekvieną dieną naudojami etaloniniai kalibravimo rutuliukai. T limfocitų pogrupiai buvo analizuojami BD FacsDIVA. Todėl 1 ml viso kraujo eritrocitai buvo lizuojami naudojant 50 ml amonio chlorido. Po centrifugavimo leukocitai buvo plaunami du kartus ir suspenduojami 900 μL PBS / 1% BSA / 0, 1% NaAz. Iš šios ląstelių suspensijos (5–10 × 106 / ml) 50 µL buvo inkubuota 10 min. Kambario temperatūroje kartu su optimaliai titruotu etikete pažymėtu MAb. Po inkubacijos ląstelės buvo plaunamos ir vėliau identifikuojamos srauto citometrija. Naudojant BD LSR II srauto citometrą, kuris buvo kalibruotas vaivorykštės granulėmis, buvo išmatuota 10 000 limfocitų. Santykinis pagalbinių T limfocitų, citotoksinių T limfocitų, anksčiau negydytų T limfocitų ir atminties T limfocitų skaičius buvo išreikštas procentine viso T limfocitų populiacijos dalimi ir apskaičiuotas vidutiniškai po 2–4 nepriklausomų inkubacijų kiekvienam pogrupiui. T-limfocitų pogrupių absoliutusis skaičius vėliau buvo apskaičiuotas iš absoliučių T limfocitų skaičiaus, gauto lizuoto viso kraujo metodu. Absoliutus visų T limfocitų skaičius, nustatytas naudojant vienos platformos metodą, buvo palygintas su perskaičiuotais visų T limfocitų skaičiumi (% limfocitų leukocitų skaičiuje, nustatytas ląstelių skaitikliu). Tarp šių dviejų metodų reikšmingo skirtumo nebuvo (30).

Pilno dydžio lentelė

Kovariatoriai.

Informacija apie gimimo datą, svorį ir lytį buvo gauta iš akušerių ir ligoninių registrų. Gestacinis amžius buvo nustatytas atlikus pirmąjį vaisiaus ultragarsinį tyrimą po įtraukimo (31). Klausimyne, kurio motinoms siunčiama> 30 nėštumo savaitės („ar per paskutinius du mėnesius karščiavote (> 38 ° C)), buvo prašoma informacijos apie motinos karščiavimą (> 38 ° C), nurodant galimą sisteminę infekciją. ? “) (24).

Statistinė analizė.

Motinos ir naujagimio charakteristikų skirtumai tarp naujagimių su virkštelės kraujo mėginiais ir be jų buvo vertinami atliekant nepriklausomą t tęstinių normaliai pasiskirstančių kintamųjų kintamąjį testą, nenuobodžiaus nenormalaus pasiskirstymo kintamųjų Mann-Whitney testą ir kategorinių kintamųjų kintamąjį χ 2 . Duomenys apie visus limfocitų pogrupius buvo logiškai transformuoti, norint gauti normaliai pasiskirstančius kintamuosius. Pristatymo būdo, nuolat matuojamų Apgar balų ir virkštelės kraujo pH ryšys su absoliučiais limfocitų pogrupių skaičiais buvo analizuojami naudojant kelis tiesinės regresijos modelius. Papildomai buvo pritaikyti regresijos modeliai atsižvelgiant į galimą sąmokslininko nėštumo amžių, gimimo svorį, lytį ir motinos karščiavimą. Galiausiai, siekiant nustatyti nepriklausomą gimdymo būdo, Apgar balų ir virkštelės kraujo pH poveikį, regresijos modeliai buvo papildomai pakoreguoti atsižvelgiant į visus su stresu susijusius perinatalinius veiksnius. Asociacijų matai pateikiami kaip logiškai transformuoti vidutiniai skirtumai ir regresijos koeficientai, kuriuos galima suprasti kaip procentus padauginus iš 100 (32), arba kaip geometrinius vidutinius skirtumus su jų 95% pasikliautinuoju intervalu. Statistinės analizės buvo atliktos naudojant „Socialinių mokslų statistikos paketo 11.0 versiją, skirtą„ Windows “(SPSS Inc., Čikaga, IL).

REZULTATAI

Iš viso į „Generation R Focus Study“ buvo įtrauktos 1232 moterys. Į šią analizę neįtrauktos motinos, gimdančios savaitgaliais ( n = 202), dvynės nėštumo ( n = 24) ir nėščiosios, lemiančios perinatalinę mirtį ( n = 2). Iš likusių 1004 viengimių gyvų gimimų virkštelės kraujas buvo surinktas 889 (88, 5 proc.) Kūdikiams. 318 kūdikių virkštelės kraujyje limfocitų imunofenotipuoti nebuvo įmanoma, daugiausia dėl neheparinizuotų virkštelės kraujo mėginių. 10, 0% ( n = 57) iš likusių 571 kūdikių buvo broliai ir seserys, nes „Generation R Focus“ tyrime motinoms buvo leista dalyvauti antrą ar daugiau nėštumų. Šie kūdikiai buvo įtraukti į šį tyrimą, nes, pašalinus juos iš analizės, rezultatų skirtumai nebuvo.

Trūkstančių imunofenotipinių virkštelės kraujo mėginių ( n = 433) analizė parodė, kad naujagimiai, neturintys imunofenotipinių virkštelės kraujo mėginių, dažniau gimė atliekant cezario operaciją (20, 3% ir 12, 2%, p <0, 05), vidutinis nėštumo amžius buvo mažesnis (40, 1 ir 40, 4 savaitės)., p <0, 01), ir mažesnis vidutinis gimimo svoris (3454 ir 3562 g, p <0, 01) nei naujagimiams su imunofenotipiniais virkštelės kraujo mėginiais.

Motinų ir jų naujagimių charakteristikos pateiktos 2 lentelėje. Iš motinų 72, 6% turėjo makštį, 15, 2% - vakuumą ar pagalbines žnyples ir 12, 2% - cezario operaciją. Vidutinės Apgar 1 ir 5 minutės po naujagimių gimimo buvo atitinkamai 9 (diapazonas, 2–10) ir 10 (intervalas, 5–10). Vidutinis virkštelės kraujo pH buvo 7, 26. Limfocitų pogrupio mediana parodyta 2 lentelėje.

Pilno dydžio lentelė

Naujagimiams, gimusiems per atgabentą ar vakuuminį, buvo 45% didesnis NK limfocitų skaičius ( p <0, 001) nei naujagimiams, gimusiems iš makšties (3 lentelė). T ir B limfocitų kiekiuose skirtumų nerasta. T-limfocitų populiacijoje padidėjo citotoksinių ir atminties T-limfocitų skaičius. Naujagimiai, gimę atliekant cezario operaciją, turėjo 9% mažesnį T ( p = 0, 04) ir 40% mažesnį NK limfocitų skaičių ( p <0, 001) nei naujagimiai, gimę iš makšties. B limfocitų skaičius nesiskyrė. T-limfocitų populiacijoje naujagimiams, gimusiems po cezario operacijos, sumažėjo pagalbininkų ir negydytų T limfocitų skaičius.

Pilno dydžio lentelė

Vieną minutę padidėjus Apgar rodikliui, naujagimiai turėjo 8% mažesnį B limfocitų kiekį ( p = 0, 001) ir 12% mažesnį NK limfocitų skaičių ( p <0, 001). 1 min. Apgar bale reikšmingų T limfocitų ir T limfocitų pogrupio pokyčių nerasta. Apgar rodikliai praėjus 5 minutėms po gimimo, parodė 5%, 11% ir 15% mažesnį T, B ir NK limfocitų skaičių viename taške (visų p <0, 01). Citotoksinių T-limfocitų skaičius sumažėjo 7% ( p = 0, 006). Kitų T limfocitų pogrupio skaičių 5-minutės Apgar rodiklis nematė.

Bambos virkštelės kraujo pH padidėjus 0, 1 taško, atitinkamai 5%, 22% ir 30% mažesni T, B ir NK limfocitai (visi p <0, 05). Virkštelės kraujo pH nebuvo susijęs su absoliučiais T-limfocitų pogrupių skaičiais.

Pakoreguoti įvairių gimdymo būdų T ir B limfocitų skaičiui pakoreguoti poveikio įvertinimai pagerėjo ( p <0, 05), tačiau citotoksinių ir anksčiau negydytų T limfocitų skaičius sumažėjo ( p > 0, 05) (1 pav.). Pristatymo būdų sąsajos su kitais absoliučiais limfocitų pogrupiais reikšmingai nepasikeitė, taip pat nepakito 1 ir 5 minučių Apgar skalės ir virkštelės kraujo pH ryšys su absoliučiaisiais T, B ir NK limfocitų ir T skaičiais. - limfocitų pogrupiai (2 ir 3 pav.).

Image

Absoliutus limfocitų ir T-limfocitų pogrupių skaičius naujagimiams, gimusiems įvairiais gimdymo būdais. Visi modeliai buvo koreguoti atsižvelgiant į nėštumo amžių, gimimo svorį, lytį ir motinos karščiavimą. □ = žnyplės arba vakuuminis gimdymas, ▪ = gimdymas iš makšties ir

Image
= cezario pjūvio pristatymas. Vertės yra geometrinės vidurkiai (95% pasikliautinieji intervalai); etaloninė kategorija yra naujagimiams iš makšties pagimdyti. * p <0, 05, ** p <0, 01.

Visas dydis

Image

( A ) Absoliutus limfocitų pogrupių skaičius naujagimiams su 1 min Apgar balais gimus. Visi modeliai buvo koreguoti atsižvelgiant į nėštumo amžių, gimimo svorį, lytį ir motinos karščiavimą. Įvertintos atgal transformuotos regresijos linijos atspindi limfocitų pogrupių skaičių taške, padidėjusį per 1 min Apgar. ( B ) Absoliutus limfocitų pogrupių skaičius naujagimiams su 5 minučių „Apgar“ balais gimus. Visi modeliai buvo koreguoti atsižvelgiant į nėštumo amžių, gimimo svorį, lytį ir motinos karščiavimą. Įvertintos atgal transformuotos regresijos linijos atspindi limfocitų pogrupių skaičių taške, padidėjusį per 5 minutes Apgar. Abi plokštės (linija, be simbolio) T limfocitai; • B limfocitai; ○ NK limfocitai; ▪ pagalbiniai T limfocitai; □ citotoksiniai T limfocitai; ▴, naivieji T limfocitai; ▵, atminties T limfocitai. * p <0, 05, ** p <0, 01.

Visas dydis

Image

Absoliutus limfocitų pogrupių skaičius naujagimiams su įvairiais virkštelės kraujo pH gimus. Visi modeliai buvo koreguoti atsižvelgiant į nėštumo amžių, gimimo svorį, lytį ir motinos karščiavimą. Įvertintos atgal transformuotos regresijos linijos atspindi limfocitų pogrupių skaičių per 0, 1 taško padidėjusio virkštelės kraujo pH. (Linija, be simbolio), T limfocitai; •, B limfocitai; ○, NK limfocitai; ▪ Helper T limfocitai; □ citotoksiniai T limfocitai; ▴, naivieji T limfocitai; ▵, atminties T limfocitai. * p <0, 05, ** p <0, 01.

Visas dydis

Rastas nepriklausomas gimdymo būdo poveikis NK limfocitų ir atminties T-limfocitų skaičiui ( p <0, 01), tačiau ne kitų limfocitų pogrupių skaičiui (4 lentelė). Apgar balų poveikis visų limfocitų pogrupių skaičiui sumažėjo ( p > 0, 05). Virkštelės kraujo pH rodė nepriklausomą ryšį su B, NK ir atminties T-limfocitų skaičiumi ( p <0, 05), bet ne su kitais T limfocitų pogrupio skaičiais.

Pilno dydžio lentelė

DISKUSIJA

Šis tyrimas parodė, kad, nepriklausomai nuo kitų su perinataliniu stresu susijusių veiksnių, didėjantis su gimdymo būdu susijęs stresas parodė padidėjusį NK ir atminties T-limfocitų skaičių bei mažesnį virkštelės kraujo pH rodymą, tuo aukštesnius NK, B ir atminties T limfocitus. Nepastebėjome nepriklausomo 1- ir 5-minučių Apgar balų poveikio limfocitų pogrupiams.

Ankstesniuose gimdymo būdo tyrimuose nebuvo įvertintas poveikis visų limfocitų ir T-limfocitų pogrupių skaičiui (5, 9–13, 15, 16, 33). Šie tyrimai parodė neabejotinus rezultatus tikriausiai dėl nedidelės tiriamųjų populiacijos (12–126 tiriamieji). Vienas didelis virkštelės kraujo mėginių tyrimas (daugiau nei 8000 virkštelės kraujo vienetų), atliktas atliekant būsimą virkštelės kraujo transplantaciją, parodė sumažėjusį pagalbininkų T, citotoksinių T ir B limfocitų procentą ir padidintą NK limfocitų procentą naujagimių virkštelės kraujyje. atliekant cezario operaciją, palyginti su naujagimiais, gautais iš makšties (6). Nebuvo pateikti skirtumai tarp makšties ir žnyplių ar vakuuminio gimdymo, tikslus limfocitų pogrupių absoliučių skaičių pokyčių dydis ir specifinės motinos ir naujagimio charakteristikos. Mūsų tyrimas parodė gimdymo būdo poveikį daugiausia NK limfocitams. Tikslus šių limfocitų funkcinis vaidmuo gimdant dar turi būti ištirtas. Naujagimiams, kuriems buvo naudojamos žnyplės ir vakuumas, buvo didžiausias limfocitų pogrupis, o cezario pjūvio naujagimiams - mažiausias limfocitų pogrupis. Šis reiškinys rodo nuolatinę limfocitų pogrupių įdarbinimo naujagimių kraujyje tendenciją didėjant su gimdymu susijusiam stresui. Pagrindiniai biologiniai mechanizmai gali būti tai, kad naujagimiai, gimę iš makšties, turi didesnį katecholaminų ir kortizolio kiekį, palyginti su naujagimiais, gimę po cezario operacijos (16–19, 33–35). Iš makšties pagimdytų naujagimių, kurių virkštelėje yra didesnis kortizolio kiekis kraujyje, limfocitų skaičius yra didesnis (16, 19). Buvo teigiama, kad kūdikiai, gimę atliekant cezario operaciją, dėl motinos anestetikų mažiau įdarbina limfocitų pogrupius, kurie kerta placentą ir slopina katecholaminų bei kortizolio išsiskyrimą (33, 36, 37). Mūsų tyrimo apribojimas yra tas, kad mes negalėjome atskirti pirminio cezario operacijos, paprastai planuojamos dėl anksčiau žinomos motinos indikacijos, ir antrinio cezario operacijos dėl ūmaus vaisiaus ar motinos kančios.

Tiek žemas Apgar balas, tiek žemas virkštelės kraujo pH gali būti vertinami kaip naujagimio hipoksijos ir streso matas, reiškiantys, kad šiems parametrams taip pat gali būti taikoma su darbu susijusi streso hipotezė. „Apgar“ balų ir virkštelės kraujo pH poveikis daugiausia buvo nustatytas didžiojo limfocitų pogrupio ir mažesniu mastu T-limfocitų pogrupio skaičiumi. Pastarąjį galima paaiškinti tuo, kad visi T limfocitų pogrupiai prisidėjo prie bendro T limfocitų padidėjimo. „Apgar“ balų ir poveikio limfocitų pogrupių skaičiui tyrimai yra labai riboti ir parodė, kad žemi 1 ir 5 minučių „Apgar“ rodikliai padidina imunoglobuliną išskiriančių ląstelių skaičių ir mononuklearinių ląstelių proliferacinį atsaką in vitro (21, 22). Mes nustatėme didesnius 5 minučių „Apgar“ balų poveikio limfocitų pogrupyje skaičių nei 1 minutės „Apgar“ įvertinimus. Apgaro balai 5 minutes po gimimo tikriausiai geriau atspindi naujagimių būklę. Tai atitinka ankstesnį tyrimą, kuriame buvo stebimos 5 minučių Apgar skalės ir mirtingumo rodikliai (38). „Apgar“ balai praėjus 1 ir 5 minutėms po gimimo yra subjektyvi naujagimio būklės įvertinimo sistema. Mūsų visiškai pakoreguoti regresijos modeliai patvirtina šį „Apgar“ balų subjektyvumą, nes nepriklausomas šių balų poveikis smarkiai sumažėjo, o virkštelės kraujo pH, objektyvaus hipoksijos metodo, poveikis išliko daugelyje pagrindinių limfocitų pogrupių. Ankstesnis tyrimas nustatė atvirkštinį ryšį tarp leukocitų skaičiaus ir virkštelės kraujo pH (9). Šiame tyrime virkštelės kraujo pH poveikis įvairiems leukocitų potipiams nebuvo tirtas. Viename tyrime buvo įvertintas ryšys tarp virkštelės kraujo pH ir pagrindinių limfocitų pogrupių pasiskirstymo, nustatyta mažėjanti T limfocitų procentinė dalis ir didėjantis NK limfocitų procentas mažėjant virkštelės kraujo pH (20). Skirtumai su mūsų tyrimu gali būti paaiškinti tuo, kad skirtingos tiriamųjų populiacijos sudaro tik makštį pagimdžiusius kūdikius su motinomis, kurios dažnai vartoja vaistus skatinančius vaistus, spazmolitikus, neuropleginį ir epidurinį nuskausminimą (7 iš 70 motinų negavo jokių vaistų). Deja, duomenų apie perinatalinius vaistus mūsų tyrime nebuvo. Kitas skirtumas su mūsų tyrimu gali būti tas, kad jie vietoje limfocitų pogrupių absoliučių verčių naudojo limfocitų procentus (T + B + NK = 100%). Mažas T limfocitų procentas automatiškai suteikia aukštą B arba NK limfocitų procentą. Virkštelės kraujo pH gali sukelti priešingą poveikį tiems limfocitams. Mūsų kohortoje procentinių procentų naudojimas vietoj absoliučių pagrindinių limfocitų pogrupių skaičiaus patvirtina šią hipotezę. Bambos virkštelės kraujo pH padidėjimas 0, 1 balo parodė procentinių T limfocitų padidėjimą [regresijos koeficientas (95% pasikliautinasis intervalas: 5 (3–6)]), procentinių B limfocitų sumažėjimą [−1 (−2, - 0, 6)] ir NK limfocitų sumažėjimas] −3 (−4, −2)]. Absoliučiam limfocitų pogrupių skaičiui padidėjus virkštelės kraujo pH sumažėjo visi pagrindiniai limfocitų pogrupiai (3 lentelė). Taigi, norint atspindėti tikruosius limfocitų pogrupių pokyčius dėl įvairių veiksnių, vietoj limfocitų pogrupių procentinių dalių geriau naudoti absoliučius skaičius.

Reikėtų apsvarstyti kai kuriuos metodinius klausimus. Mūsų tyrime pašalinus dalyvius, neturinčius duomenų, atrankos rezultatai bus neobjektyvūs, jei su stresu susijusių perinatalinių veiksnių ir absoliutų limfocitų pogrupių skaičiaus ryšys dalyviams skiriasi ir su išsamiais duomenimis, ir be jų. Informacijos apie gimdymo būdą trūko tik 5, 3 proc. Naujagimiams, turintiems informacijos apie gimdymo būdą, naujagimiai, kuriems trūksta duomenų apie limfocitų pogrupius, dažniau buvo cezario pjūvio operacija nei naujagimiams, turintiems duomenų apie limfocitų pogrupius. Todėl tikėtina, kad dėl šios selektyvios trūkstamų rezultatų grupės stebimo gimdymo būdo ir absoliutų limfocitų pogrupių skaičių poveikis gali būti nepakankamai įvertintas. Tačiau cezario operacija gali būti atliekama pirminiu ar antriniu būdu. Kadangi tikimasi, kad pirminio ir antrinio cezario operacijos su limfocitų pogrupiais bus susijusios priešinga kryptimi, mūsų poveikio įvertinimai gali būti šiek tiek pakreipti link nulio. Mūsų rezultatai tikriausiai parodo skirtumą tarp pirminio cezario operacijos ir gimdymo iš makšties. Mes tikimės, kad naujagimiams, gimusiems po antrinio cezario operacijos, bus palyginti daugiau trūkstamų limfocitų pogrupio dėl logistinių apribojimų ūminėje aplinkoje.

Informacijos apie 1 min Apgar, 5 min Apgar balus ir virkštelės kraujo pH trūko atitinkamai 2, 6%, 1, 9% ir 50, 8% naujagimių. Virkštelės kraujo pH matavimas Nyderlanduose nėra atliekamas reguliariai, nes maždaug trečdalis gimdymų Nyderlanduose atliekami namuose ir jiems yra nedidelė akušerinių komplikacijų rizika (39). Vadovaudamiesi tuo, mes nustatėme, kad naujagimiai, neturintys virkštelės kraujo pH, dažniausiai buvo gimdomi makštyje ir turėjo aukštesnį 1 ir 5 minučių „Apgar“ balus. Naujagimiai be virkštelės kraujo pH dažniau būna nesudėtingo nėštumo metu, kai yra vaisiaus bėdų. Taigi mes tikimės, kad trūkstančios virkštelės kraujo pH vertės reikšmingai nepakeitė įvertinto poveikio, bet sumažino tyrimo galią.

Mūsų kohortiniame tyrime informacija apie motinos karščiavimą, nurodant pagrindinę infekciją, buvo prieinama tik maždaug trečiąjį nėštumo trimestrą. Tai reikšmingai nepakeitė poveikio įverčių su stresu susijusių perinatalinių veiksnių ryšiais su limfocitų pogrupiais. Tačiau dėl motinos karščiavimo nėštumo metu jos triuškinantis poveikis tikriausiai yra nepakankamai įvertintas, nes ūminė besitęsianti motinos infekcija gimdymo metu gali parodyti didesnį poveikį naujagimių limfocitų pogrupiams.

Apibendrinant, šis populiacija paremtas kohortos tyrimas parodė, kad didėjant su gimdymu susijusiam stresui, padidėja limfocitų skaičius (NK, atmintis T). Be to, mažesnis virkštelės kraujo pH yra susijęs su padidėjusiu limfocitų pogrupiu (B, NK, atmintimi T). Todėl, klinikiškai aiškinant absoliutų limfocitų pogrupių skaičių gimus, turėtų būti atsižvelgiama į perinatalinių veiksnių, susijusių su stresu ir hipoksija, poveikį.