Galimas organinių katijonų pernešėjų farmakokinetinis vaidmuo keičiant jo substratų prasiskverbimą į smegenų paviršių | akis

Galimas organinių katijonų pernešėjų farmakokinetinis vaidmuo keičiant jo substratų prasiskverbimą į smegenų paviršių | akis

Anonim

Dalykai

  • Farmakokinetika
  • Toksikologija

Anotacija

Tikslas

Mes spėjame, kad organinių katijonų pernešėjai (UŠT) gali turėti reikšmės nustatant vietiškai naudojamų organinių katijonų vaistų farmakokinetiką ir toksiškumą. Taigi šiame in vivo tyrime mes bandėme įvertinti UŠT vaidmenį moduliuojant jo substratų gabenimą po to, kai jie buvo naudojami lokaliai.

Metodai

Buvo naudojami bet kurios lyties Naujosios Zelandijos albinosų triušiai. Po vienkartinio įlašinimo atliktas UŠT substratų prasiskverbimas į smegenų rageną buvo įvertintas, nesant ar nėra UŠT blokatorių (chinidino ir atropino). Vandeninio humoro (AH) mėginiai buvo paimami atliekant vietinę nejautrą, atliekant 70–100 μl paracentezę, įvairiais laiko tarpais. Mėginiai buvo įvertinti tiek substrato, tiek blokatorių koncentracijai, naudojant skysčių chromatografijos masės spektrometriją.

Rezultatai

Preliminarus vietinis UŠT blokatorių apdorojimas (30 min. Prieš substratą) po vienkartinio vietinio vartojimo žymiai sumažino UŠT substratų prasiskverbimą į smegenis. Blokatorių, pasiekiančių AH, kiekis substratuose taip pat buvo keičiamas praėjus 60 minučių po jo vartojimo, palyginti su jo kontrole.

Išvada

OCT yra funkciškai aktyvios savo substratų absorbcijai nuo ašarų iki AH. Todėl UŠT ragenos epitelyje gali būti nuo viršūnės iki bazolateralinės. Vietiniu būdu skiriant jų substratus / blokatorius, abu gali konkuruoti dėl UŠT dėl jų įsisavinimo per rageną ir taip sumažinti ragenos įsiskverbimą. Taigi OCT gali turėti potencialų farmakokinetinį vaidmenį keičiant jų substratų, kurie naudojami kaip akių gydymas, biologinį prieinamumą akims.

Įvadas

Vietinis akių lašų skyrimas yra įprastas ir pacientui tinkamas vaisto skyrimo į akis būdas. 1 Daugumoje vietiškai naudojamų vaistų, skirtų priekinio segmento ligoms gydyti, ragenos naudojamos kaip pagrindinis būdas patekti į akis nuo ašarų iki vandeninio humoro (AH). 2 Tyrimai rodo, kad fiziologinis apsauginis mechanizmas, pavyzdžiui, transporterio baltymai, gali sukelti vaistų įsisavinimą ar pakitusią skverbimąsi per rageną. 3, 4, 5 Dauguma endogeninių aminų, turinčių fiziologiškai svarbų vaidmenį, yra organiniai katijonai (OC) ir turi teigiamą krūvį, todėl jie negali prasiskverbti pro rageną. Todėl pranešta, kad junginės ir ragenos epitelio ląstelėse, dalyvaujančiose reguliuojant įvairių endogeninių aminų, tokių kaip epinefrinas, dopaminas, histaminas ir serotoninas, transportavimą iš ašarų skysčio, vyksta specializuotas transportavimo procesas. 6, 7, 8

Polispecifiniai organinių katijonų pernešėjai (UŠT) tarpininkauja palengvinant daugybės įvairių struktūriškai skirtingų OC, įskaitant daugelį vaistų, toksinų ir endogeninių junginių, gabenimą. Nedaug oftalmologinių vaistų, kuriuos gabena UŠT, yra atropinas, timololis, ofloksacinas ir levofloksacinas. 9, 10, 11, 12 Akyse šie pernešėjai yra eksploatuojami įvairiuose akių audiniuose, tokiuose kaip ragenos, rainelės, ciliarinis kūnas, junginė ir tinklainė. 13 Tikslas šiems nešiotojams bus protingas narkotikų tiekimo būdas, kurio tikslas - optimalus biologinis biologinis prieinamumas akims. 1 UŠT raiška ragenoje ir junginėje yra gerai dokumentuota. Daugelis oftalmologijoje svarbių farmakologiškai svarbių vaistų yra UŠT substratai, todėl jų biologinis prieinamumas keičiasi. 4, 14

Įvairūs tyrimai su žmonėmis ir gyvūnais parodė įvairių OC įsiskverbimo į akis moduliaciją. Papildomas natrio diklofenako vartojimas reikšmingai padidino vidinį akispūdį (LPS) pacientams, kuriems taikoma latanoprosto terapija. Išgėrus indometacino, brimonidino poveikis mažinant akispūdį labai sumažėjo. Net galimas vaisto sukeltas sisteminis toksiškumas sumažėjo, kai kartu buvo skiriami du OC, timololis ir fenilefrinas. 17 Panašiai Lee ir kt. 18 parodė, kad timololio vartojimas kartu su pilokarpinu ar epinefrinu žymiai sumažino absorbciją akyje ir tokiu būdu timololio koncentraciją priekinio segmento audiniuose, galbūt dėl ​​jo pasikeitimo priešširdinio audinio klirenso metu. Visi šie atradimai turi klinikinę reikšmę; tačiau šių reikšmingų OC farmakokinetikos moduliacijos radinių priežastis nėra tiksliai žinoma.

Mes spėjame, kad UŠT gali turėti reikšmės nustatant vietiškai vartojamų vaistų farmakokinetiką ir toksiškumą. Ankstesniuose tyrimuose UŠT sukeliami transportavimo procesai buvo parodyti naudojant eks vivo modelius išpjautose ragenose, 19 in vitro ragenos ląstelių, 19 ir iškirptoje junginėje 20, norint suprasti UŠT funkcinę svarbą. Tačiau iš literatūros taip pat buvo akivaizdu, kad ląstelių linijos tyrimai neparodė (dėl minimalaus transporterių ekspresijos ląstelių linijose) aktyvaus UŠT funkcinio vaidmens pernešant suleistą akių lašą. 19 Ištyrus UŠT funkcinę svarbą in vivo, gali paaiškėti jų vaidmuo organinių katijonų pernešime per rageną, kai jie vartojami vietiškai. Gerai žinoma, kad tetraetilamonio chloridas (TEA) ir metforminas yra UŠT katijonų substratai, o atropinas ir chinidinas gali slopinti katijonų substratų įsisavinimą. 9, 21, 22, 23, 24 Taigi, šiame tyrime mes panaudojome šiuos substratus ir inhibitorius, kad suprastume UŠT vaidmenį keičiant jų substratų pernešimą per rageną po vietinio taikymo.

medžiagos ir metodai

Narkotikai ir chemikalai

TEA, chinidino sulfatas ir atropino sulfatas buvo įsigyti iš „Sigma-Aldrich“ (Sent Luisas, MO, JAV). Metformino kalio chloridas buvo dosni dovana iš „Microlabs“, Bangalore, Indija. Homatropino hidrobromidas buvo pirktas iš Boehringer Ingelheim, Ingelheim, Vokietija. Visos kitos cheminės medžiagos ir tirpikliai, įsigyti iš atitinkamų komercinių šaltinių.

Gyvūnai

Šiame tyrime buvo naudojami Naujosios Zelandijos abiejų lyčių albinosų triušiai, sveriantys 1, 5–2, 0 kg. Gyvūnai buvo tvarkomi vadovaujantis Vizijos tyrimų asociacijos ir Oftalmologijos pareiškimo dėl gyvūnų naudojimo oftalmologiniuose ir regos tyrimuose gairėmis. Visos eksperimentinės procedūros buvo peržiūrėtos ir patvirtintos nuolatiniame Visų Indijos medicinos mokslų instituto gyvūnų etikos komitete (bylos Nr. 479 / IAEC / 09).

Vaistų formų paruošimas ir skyrimas triušiams

Kompozicijos buvo paruoštos, kaip aprašyta anksčiau Nirmal et al. 21 Trumpai tariant, reikiamos UŠT substratų TEA (7, 85 mM) ir metformino (7, 85 mM) bei blokatorių chinidino (6, 13 mM) ir atropino (3, 47 mM) koncentracijos buvo ištirpintos fosfatais buferiniame druskos tirpale ir pH palaikytas 7, 4. Gauti tirpalai buvo filtruojami per 0, 22 μm sterilų Millipore filtrą (Millex GV filtras, Millipore, Billerica, MA, JAV), kad būtų galima sterilizuoti. Kiekvieną kartą prieš eksperimentus buvo ruošiami švieži sterilūs tirpalai. Visos kompozicijos (substratas / blokatoriai), kurių tūris yra 20 μl, buvo įšvirkščiamos į triušio akis, naudojant kalibruotą mikropipetę, ir akys buvo užmerktos minutei po įpylimo. Preparatų blokatoriais, iš anksto gydytais, chinidinas arba atropinas buvo sušvirkšti 30 min. Iki substrato įpylimo pradžios.

Aktualių UŠT blokatorių prasiskverbimas į smegenų rageną

Gyvūnai buvo suskirstyti į dvi grupes (keturios akys kiekvienam laiko taškui). Grupės buvo chinidinas (1 grupė) ir atropinas (2 grupė). Abiejose grupėse AH buvo renkamas skirtingais laiko intervalais (15, 30, 60 ir 120 min.) Ir įvertinta blokatorių AH kinetika. Rinkant AH, ragenos buvo anestezuojamos 4% lidokaino. AH buvo pašalinta su 30 G sterilia poodine adata per 70–100 μl paracentezę ir laikoma –80 ° C temperatūroje iki tolimesnės analizės skysčių chromatografijos masės spektrometrija (LC-MS / MS).

Vietinių UŠT substratų prasiskverbimas per korneralą

Tiriant triušius, buvo tiriama UŠT substratų (TEA ir metformino) AH kinetika, kai nėra ir nėra blokatorių (chinidino ir atropino). Gyvūnai buvo atsitiktinai suskirstyti į aštuonias grupes (4 akys kiekvienam laiko taškui): TEA (3 grupė), metforminas (4 grupė), TEA su chinidinu (5 grupė), TEA su atropinu (6 grupė), metforminas su chinidinu (7 grupė). ir metformino su atropinu (8 grupė). Visose grupėse AH buvo renkama skirtingais laiko intervalais (15, 30, 60 ir 120 min.), Kaip aprašyta aukščiau.

LC-MS / MS analizė

LC-MS / MS prietaisai TEA, kitiems substratams ir blokatoriams, kurie buvo naudojami šiame tyrime, buvo naudojami taip, kaip aprašyta mūsų ankstesniame tyrime. 25 Visoms analitėms buvo naudojama elektroninė purškimo jonizacija, o chromatografiniai eliuentai jonizuojami teigiamo jonų režimu esant 5500 V. TEA buvo kiekybiškai įvertinta, kaip aprašyta Nirmal et al. 25 Metformino analizei naudojamas metodas buvo paimtas iš Mistri ir kt 26, šiek tiek pakeitus, kaip aprašyta ankstesniame mūsų tyrime. 25, 27, 28 Buvo laikomasi metformino, chinidino ir atropino LC sąlygų. Buvo naudojama izokratinė judančioji fazė, turinti 80% acetonitrilo su 0, 1% skruzdžių rūgšties ir 20% vandeninio 5 mM amonio acetato, turinčio 0, 1% skruzdžių rūgšties. Judriosios fazės ilgis buvo 0, 22 μm , ji buvo filtruojama, degazavo tinkle ir siurbiama 0, 5 ml / min greičiu. Mėginiai buvo įpilti į 96 šulinėlių padėkliuką, įpurškiami naudojant automatinį mėginių ėmimo įrenginį ir palaikomi 20 ° C. Dvidešimt mikrolitrų mėginio buvo kiekybiškai įvertinta 5 minutes.

Metformino kiekybinis įvertinimas buvo atliktas naudojant daugialypės reakcijos stebėjimo (MRM) režimą, remiantis pirminio / produkto jonų perėjimais 130/71. Nuo junginių priklausantys parametrai, tokie kaip skilimo potencialas, įėjimo potencialas, susidūrimo energija ir ląstelių išėjimo potencialas, buvo nustatyti atitinkamai 41, 8, 35 ir 5 V. Azoto dujų srautas dėl susidūrimo sukeltos disociacijos ir delsos trukmė buvo laikomos atitinkamai 4 (savavališka reikšmė) ir 100 ms.

Metodas, naudojamas chinidino kiekybiniam įvertinimui, buvo paimtas iš Liu ir kt. 29 su nedideliais pakeitimais. 27, 30 MRM perėjimai buvo 325, 2 / 172, 1 (1 perėjimas) ir 325, 2 / 79, 1 (2 perėjimas). Nuo junginių priklausantys parametrai, tokie kaip skilimo potencialas, įėjimo potencialas, susidūrimo energija ir ląstelių išėjimo potencialas, buvo nustatyti 58, 10, 47 ir 10 V 1 perėjimui, o 57, 10, 61, 64 ir 5, 5 V 2 perėjimui. atitinkamai. Azoto dujų srautas dėl susidūrimo sukeltos disociacijos ir delsos trukmė buvo laikomos atitinkamai 3 (savavališka reikšmė) ir 100 ms.

Atropino kiekybiniam įvertinimui buvo naudojamas metodas, patvirtintas iš Chen et al 31 su nedideliais pakeitimais 27, 30 . MRM perėjimai buvo 290.11 / 124. Nuo junginių priklausantys parametrai, tokie kaip deklinacijos potencialas, įėjimo potencialas, susidūrimo energija ir ląstelių išėjimo potencialas, buvo nustatyti atitinkamai 79, 4, 35 ir 10 V. Azoto dujų srautas dėl susidūrimo sukeltos disociacijos ir delsos trukmė buvo laikomos atitinkamai 3 (savavališka reikšmė) ir 100 ms.

Iš šaltinio priklausantys masės spektrometro parametrai buvo dujos 1 (30 psi); dujos 2 (60 psi); užuolaidų dujos (10 psi); jonų purškimo įtampa (5500 V); ir metformino, chinidino ir atropino temperatūra (350 ° C). Homatropino perėjimai buvo 276, 1 / 142. Homatropinas buvo naudojamas kaip visų vaistų vidinis standartas (IS), o sąlygos buvo laikomasi, kaip aprašyta Nirmal et al. 25

Standartinis ir mėginio paruošimas

Panaudotos TEA, metformino, chinidino ir atropino pradinės koncentracijos buvo 7, 84, 7, 85, 6, 13 ir 3, 468 μm / ml. Pradinis tirpalas praskiedžiamas 50% metanoliu, kuriame yra 0, 1% skruzdžių rūgšties, kad būtų pasiektos reikiamos koncentracijos nuo žemos iki aukštos. Pradinis IS tirpalas (3, 63 μmol / ml) buvo toliau skiedžiamas, kad ekstrahavimo tirpiklyje, kuriame yra 70% acetonitrilo ir 0, 1% skruzdžių rūgšties, būtų 1, 8 nmol / ml. Dvidešimt mikrolitrų AH mėginio buvo ekstrahuota naudojant 200 μl ekstrahavimo tirpiklio, 1 min. Sumaišyta ir centrifuguota. Skaidrus 100 μl supernatantas buvo perkeltas į 96 šulinėlių plokšteles ir kiekybiškai įvertintas.

Farmakokinetika ir statistinė analizė

AH koncentracijos iki 2 h (AUC 0–2 ) plotas po kreive (AUC) buvo apskaičiuotas naudojant tiesinę trapecijos taisyklę, naudojant standartines formules. 32

Rezultatai pateikiami kaip vidurkis ± SEM. Naudojant „SigmaStat“ statistinės programinės įrangos ver.2.0 (Jandel, San Chosė, CA, JAV) reikšmingumą tarp kontrolinės ir blokatoriais iš anksto apdorotų grupių buvo naudojamas studentų t- testas (be poros).

Rezultatai

URT blokatorių prasiskverbimas į smegenų rageną, nesant substratų

Transkorno skverbimasis rodo, kad didžiausia chinidino ir atropino koncentracija, pasiekta per 30 min., Buvo atitinkamai 1, 13 ± 0, 38 ir 0, 54 ± 0, 06 nmol / ml, pavartojus vieną vietiškai (1 paveikslas). Remiantis šiuo pastebėjimu, blokatorių paruošiamojo apdorojimo laikas buvo nustatytas kaip 30 minučių prieš substrato skyrimą.

Image

Chinidino ir atropino prasiskverbimas pro korneralą, jei nėra substrato. Vienkartinis vietinis švirkštimas triušio akyje buvo nustatytas vidutinės chinidino ir atropino koncentracijos laiko metu. Vertės parodytos kaip vidurkis ± SEM.

Visas dydis

UŠT blokados poveikis TEA prasiskverbimui į smegenų rageną

TEA (vadinama kontroline) buvo skiriama atskirai arba kartu su chinidinu ar atropinu (vadinamu iš anksto apdorotu chinidinu arba iš anksto apdorotu atropinu). TEA AH koncentracija kontrolinėje grupėje pasiekė T max per 30 minučių po vienkartinio vietinio įpylimo. TEA koncentracija AH iš anksto apdorotoje chinidino grupėje (0, 14 ± 0, 01 nmol / ml) buvo žymiai sumažinta ( P <0, 05), palyginti su kontroline grupe (0, 73 ± 0, 22 nmol / ml) per 30 min. (2 paveikslas). TEA skverbimasis į smegenų rageną iš anksto apdorotomis blokatoriais parodė, kad blokatorius buvo efektyvus iki 30 min. Po TEA įlašinimo (2 paveikslas). Nustatyta, kad kontrolinės ir chinidinu iš anksto apdorotų grupių įsiskverbimo procentas buvo atitinkamai 0, 47% ir 0, 41%. Kontrolinės ir chinidinu apdorotų grupių AUC buvo atitinkamai 0, 73 ir 0, 64 nmol / ml · h. TEA C max kontrolinėje grupėje buvo 0, 73 ± 0, 22 nmol / ml. Tuo pačiu metu išankstinis gydymas blokatoriais sumažino TEA įsiskverbimą iki 0, 14 ± 0, 016 nmol / ml, kuris buvo 5, 2 karto mažesnis nei kontrolinis (1 lentelė). Atropinas turėjo reikšmingą poveikį TEA įsiskverbimui į smegenų rageną. TEA C max kontrolinėje grupėje (0, 73 ± 0, 22 nmol / ml) reikšmingai ( P <0, 05) sumažėjo iki 0, 076 ± 0, 002 nmol / ml per 30 minučių atropino iš anksto apdorotoje grupėje (2 paveikslas). Procentinio įsiskverbimo atveju atropinu gydyta grupė buvo 2, 5 karto mažesnė nei kontrolinė grupė. Esant atropinui, TEA AUC ir C max sumažėjo iki 2, 4 ir 10, 4 karto (1 lentelė).

Image

TEA skverbimasis į smegenų rageną, kai nėra ir nėra blokatorių. Vienkartinis vietinis švirkštimas triušio akyje buvo matuojamas vidutine TEA koncentracijos ir laiko savybėmis. Pastaba: vien tik TEA (kontrolė); TEA chinidino arba atropino prieš gydymą grupėje (chinidinas arba atropinas iš anksto gydytas). Vertės parodytos kaip vidurkis ± SEM. * P <0, 05.

Visas dydis

Pilno dydžio lentelė

Chinidino ir atropino likimas, esant TEA

Chinidinas / atropinas (vadinami kontrole) buvo skiriami atskirai arba kartu su TEA (vadinami eksperimentiniais). Įvertinus chinidino lygį AH, nustatyta, kad chinidino prasiskverbimas pro korneą buvo didesnis nei TEA kontrolinėje ir chinidino grupėse, kurios buvo iš anksto apdorotos. Esant substratui (TEA), blokatorių prasiskverbimas į AH drastiškai sumažėjo (1a paveikslas, papildomi duomenys). Atropino lygis pasiekė AH tiek kontrolinėje, tiek eksperimentinėje grupėse (1b paveikslas, papildomi duomenys). Tačiau atropino lygis abiejose grupėse buvo mažesnis, palyginti su TEA (kontrolinė) (2 ir 1b paveikslai, papildomi duomenys).

UŠT blokados poveikis metformino prasiskverbimui į smegenų rageną

Metforminas (nurodytas kaip kontrolinis) buvo vartojamas atskirai arba kartu su chinidinu arba atropinu (vadinamu iš anksto apdorotu chinidinu arba prieš tai apdorotu atropinu). Maksimalus kontrolinės grupės metformino ( C max ) vandeninis lygis buvo pasiektas per 30 minučių ir buvo nustatyta, kad jis yra 0, 108 ± 0, 03 nmol / ml. Iš anksto gydytoje chinidino grupėje metformino kiekis reikšmingai sumažėjo iki 0, 02 ± 0, 005 nmol / ml per 30 min. ( P <0, 05). Tai rodo, kad prieš vartojant chinidino grupę metforminas prasiskverbė 5, 4 karto, palyginti su kontroline grupe. Aukščiau pateikti rezultatai rodo, kad blokatorius buvo veiksmingas iki 30 min. Po metformino įpylimo (3 paveikslas). Procentinis metformino įsiskverbimas į chinidino grupę buvo 0, 042%, tuo tarpu kontrolinėje grupėje - 0, 058%. Tai rodo, kad blokatoriais iš anksto gydyta grupė buvo 1, 6 karto mažesnė už kontrolinę grupę. Kontrolinės ir chinidinu apdorotų grupių AUC buvo atitinkamai 0, 091 ir 0, 066 nmol / ml · h (2 lentelė). Preparatai, gydyti atropinu, metformino koncentracija buvo mažesnė pradiniu laiko momentu, o vėliau - palaipsniui. Kaip parodyta 3 paveiksle, metformino koncentracija atropino iš anksto gydytoje grupėje reikšmingai sumažėjo ( P <0, 05), palyginti su kontrole po 30 min. Vandeninė metformino koncentracija 30 min. Buvo 0, 027 ± 0, 008 nmol / ml atropino iš anksto apdorotoje grupėje ir nustatyta, kad ji yra keturis kartus mažesnė nei kontrolinės grupės. Procentinio įsiskverbimo atveju blokatorių iš anksto apdorota grupė buvo 1, 9 karto mažesnė už kontrolinę.

Image

Metformino prasiskverbimas į rageną, kai nėra ir nėra blokatorių. Po vienkartinio vietinio vartojimo triušio akyje buvo išmatuotas vidutinis metformino koncentracijos laikas - AH. Pastaba: vien metforminas (kontrolė); metforminas chinidino arba atropino prieš gydymą grupėje (chinidinas arba atropinas iš anksto gydytas). Vertės parodytos kaip vidurkis ± SEM. * P <0, 05.

Visas dydis

Pilno dydžio lentelė

Chinidino ir atropino likimas, esant metforminui

Chinidinas / atropinas (vadinami kontrole) buvo skiriami atskirai arba kartu su metforminu (vadinamu eksperimentiniu). Vandeninis chinidino lygis kontrolėje buvo šiek tiek mažesnis nei eksperimentinėje grupėje (2a paveikslas, papildomi duomenys). Blokatorių, pasiekiančių AH, lygis buvo didesnis, palyginti su substratu (metforminu). Atropino lygis kontrolinėje ir eksperimentinėje grupėse buvo didesnis nei metformino lygis, o tai rodo didesnį blokatoriaus prasiskverbimą pro vandenis nei substratas (2b paveikslas, papildomi duomenys).

Diskusija

Daugelis kliniškai įdomių oftalmologinių vaistų yra OC, todėl jų pernešimas per ragenos epitelį labai priklauso nuo pernešėjų. Nepaisant ragenos epitelio siūlomo apribojimo, prasiskverbimas į transkornealiją yra pagrindinis narkotikų patekimo būdas nuo ašarų iki AH. Taigi katijoniniai vaistai gali panaudoti kai kuriuos absorbcijos pernešėjus, kad prasiskverbtų pro biologines membranas. 19, 20, 28 Transporterių, tokių kaip UŠT, buvimas junginės ir ragenos epitelio ląstelėse reabsorbuoja įvairius endogeninius aminus ašariniame skystyje. 6, 7, 8 Be to, mūsų ir kitų laboratorijų molekulinės biologijos tyrimų duomenys parodė, kad ragenoje yra įvairių UŠT. Buvo rasta 13, 27, 30 OCTN1 ir OCTN2 ragenos viršūninėje srityje. 33 Vaistų įsisavinimą galima žymiai pagerinti nukreipiant į endogeniniu būdu išreikštas transporto sistemas. Taigi šio tyrimo tikslas buvo ištirti UŠT medijuojamos nešiklio sistemos svarbą in vivo ragenos prasiskverbimui, naudojant tinkamus substratus ir blokatorius kaip farmakologinius įrankius. Tam pasiekti TEA 20, 23, 35, 36, 37 ir metforminas 23, 38, 39, 40, 41, 42 buvo naudojami kaip UŠT substratai. Chinidinas 23, 36, 43, 44, 45 ir atropinas 9, 23 buvo naudojami kaip UŠT blokatoriai. Substratai ir blokatoriai buvo kiekybiškai įvertinti AH, naudojant LC-MS / MS, ir parodytos jų tipiškos smailės (3 paveikslas, papildomi duomenys). Pirmą kartą šiame tyrime parodėme OCT funkcinę svarbą ragenoje, naudojant lokaliai naudojamus ksenobiotikus, naudojant in vivo triušio modelį.

Veiksniai, prisidedantys prie vietiškai vartojamų vaistų ikimokyklinio audinio išnykimo, yra nutekėjimas per pienligės kanalą, absorbcija junginės būdu, ragenos rezorbcija ir nespecifinė absorbcija kituose priešgimdinio audinio audiniuose. Nors yra žinoma, kad UŠT yra aktyvus nuo apikalaus iki bazolateralinio junginės srityje, 20 UŠT vaidmuo ragenoje nėra aiškus. Ragenos epitelyje vyksta tam tikras transportavimo procesas, ir žinoma, kad jis sugeria katijoninius endogeninius aminus iš ašaros. Tyrimas, atliktas mūsų laboratorijoje, siekiant įvertinti UŠT blokados poveikį UŠT substratų ašarų kinetikai, padarytas vietiškai, padarė išvadą, kad UŠT funkciškai dalyvauja vietiniame darbe naudojamų vaistų priešnaktinėse ląstelėse. 27, 30 Ksenobiotikų preornealinis pasiskirstymo būdas ir endogeninių aminų įsisavinimas ragenoje tikriausiai naudoja UŠT, kad per rageną būtų galima pernešti iš ašaros į AH. Panašus stebėjimas buvo nustatytas vartojant timololį kartu su pilokarpinu ar epinefrinu. Tai parodė reikšmingą timololio absorbcijos sumažėjimą akyje, galbūt dėl ​​jo pokyčių ikirninio klirenso metu. Tačiau galimas UŠT vaidmuo ragenoje tuo metu nebuvo žinomas. 18

Taigi tiriant lokaliai naudojamų UŠT substratų prasiskverbimą į smegenų paviršių, galima atskleisti UŠT vaidmenį ragenoje. Norint suprasti UŠT vaidmenį ragenos įsiskverbimui į jo vietiškai naudojamus substratus, triušių AH buvo imamas paracentezės būdu įvairiais laiko tarpais, norint kiekybiškai įvertinti abu substratus, taip pat jų lokaliai naudojamus blokatorius. Norėdami sumažinti ašarų nutekėjimą dėl tūrio, panaudotas substratas arba blokatorius buvo laikomas mažiausiai 20 μl. Dozė buvo nustatyta remiantis TEA, metformino, atropino ir chinidino IC50 verte UŠT sąveikai iš literatūros šaltinių. 23

Norint nustatyti blokatorių paruošiamąjį laiką, blokatorių chinidino ir atropino, pasiekusio AH, T max po kiekvieno vienkartinio vartojimo buvo tiriamas atskirai, kontroliuojamomis sąlygomis. Todėl, norint ištirti substratų prasiskverbimo į smegenis moduliaciją, prieš pradedant vartoti substratus, 30 min. Buvo pasirinktas paruošiamasis blokatorius. Vietiniu būdu užtepta TEA parodė maksimalią vandeninę koncentraciją 30 min. Po jos įpylimo. Šiame eksperimente prieš pradedant gydymą chinidinu (blokatoriumi) TEA koncentracija reikšmingai sumažėjo per 30 minučių ir buvo 5, 2 karto didesnė. Kai atropinas buvo naudojamas kaip blokatorius, TEA koncentracija AH sumažėjo 10, 4 karto (1 lentelė).

Panašiai kaip TEA, metforminas taip pat parodė maksimalią vandeninę koncentraciją ( C max ), kai T max yra 30 min. Išankstinis blokatorių gydymas chinidinu ir atropinu parodė, kad metformino vandeninė koncentracija 30 minučių sumažėjo 5, 4 ir 4 kartus. Chinidino ir atropino slopinamojo poveikio TEA ir metformino įsisavinimui skirtumą gali lemti skirtumai tarp atskirų UŠT indėlio į TEA ir metformino įsisavinimą. Esant TEA arba metforminui, nustatyta, kad blokatorių koncentracija paprastai būna mažesnė, palyginti su jų kontrole. Remiantis tuo, kas buvo aprašyta aukščiau, buvo suprantama, kad išankstinis gydymas vietiniu blokatoriumi reikšmingai paveikė UŠT substratų įsisavinimą iš priešgimdyminės srities į AH. Todėl buvo akivaizdu, kad UŠT ragenoje yra nuo viršūninio iki bazolateralinio ir gali turėti funkcinį vaidmenį patekus jų substratams į rageną, kai jis naudojamas lokaliai, kaip buvo pranešta junginėje. 20

Esant ekvimoliarinei koncentracijai, kontroliniuose eksperimentuose TEA parodė 7 kartus didesnį vandeninį Cmax, palyginti su metforminu. Kontroliniai tyrimai parodė, kad tiek chinidinas, tiek atropinas yra prasiskverbę per 30 minučių po įpylimo. Tai rodo, kad abu greičiausiai neturėjo jokio skirtumo tarp ragenoje esančių UŠT izoformų. Norint išsiaiškinti substrato specifiškumą įvairioms UŠT izoformoms, reikia papildomų tyrimų. UŠT gali atlikti gyvybiškai svarbų vaidmenį vartojant lokaliai vartojamus vaistus, jautrius UŠT. Vietiniu būdu skiriant UŠT substratus / blokatorius, abu gali konkuruoti dėl UŠT dėl jų įsisavinimo per rageną ir taip sumažinti ragenos įsiskverbimą. Pakitę UŠT blokatorių lygiai esant UŠT substratams, palyginti su jų kontroliniais lygiais, dar labiau patvirtina pirmiau pateiktą išvadą (1 ir 2 paveikslai bei papildomi duomenys). Šio tyrimo pastebėjimas turėtų terapinę reikšmę, kai kartu su akių opoziciniu vaistu skiriami du UŠT substratai / blokatoriai. Dėl šios sąveikos vietiniu būdu vartojamų vaistų biologinis prieinamumas gali būti mažas, ypač kai alkaloidai, tokie kaip atropinas ir jų dariniai, yra plačiai naudojami kartu su kitais katijoniniais vaistais, tokiais kaip antiinfekciniai vaistai, antiglaukoma, priešuždegiminiai ir antihistamininiai vaistai, kaip akių vaistai.

Apibendrinant galima pasakyti, kad ragenoje esanti OCT gali būti aktyvi nuo ašarų skysčio iki AH. UŠT gali turėti potencialų farmakokinetinį vaidmenį keičiant jų substratų, kurie naudojami kaip akių gydymas, biologinį prieinamumą akims.

Image

Papildoma informacija

Vaizdo failai

  1. 1.

    1 papildomas paveikslas

  2. 2.

    2 papildomas paveikslas

  3. 3.

    3 papildomas paveikslas

    Prie šio dokumento pridedama papildoma informacija „Eye“ svetainėje (//www.nature.com/eye)