Naujų 11,12-ciklinio karbonato azitromicino 4 ″ -o-karbamato darinių sintezė ir antibakterinis poveikis | žurnalas apie antibiotikus

Naujų 11,12-ciklinio karbonato azitromicino 4 ″ -o-karbamato darinių sintezė ir antibakterinis poveikis | žurnalas apie antibiotikus

Anonim

Anotacija

Buvo suprojektuota, susintetinta ir įvertinta, kaip jų antibakterinis poveikis in vitro, 11, 12 ciklinio karbonato azitromicino 4 ″ - O- karbamato darinių serija. 7b ir 7d junginiai buvo veiksmingiausi (0, 5 ir 0, 5 μg ml −1 ) dviem eritromicinui atsparaus Streptococcus pneumoniae kamienams, kurių atsparumą užkodavo atitinkamai ermo genas ir ermo bei mef genai. 7a, 7e ir 7g junginiai parodė reikšmingai stiprų poveikį eritromicinui jautriems štamams, tokiems kaip Staphylococcus aureus ir S. pyogenes . Šie rezultatai rodo, kad pailgintos arilalkilkarbamoilo grupės įvedimas į C-4 ″ padėtį gali smarkiai sustiprinti aktyvumą prieš eritromicinui atsparias bakterijas, koduojamas erm geno arba erm ir mef genų.

Įvadas

Makrolidai priklauso vienai iš dažniausiai kliniškai svarbių antibiotikų šeimų, gydant gramteigiamų bakterijų, tokių kaip Staphylococcus aureus , Streptococcus pneumoniae ir S. pyogenes, sukeltas infekcijas. Pirmos kartos makrolidai, tokie kaip eritromicinas A (EMA), parodė platų antimikrobinio aktyvumo spektrą ir buvo naudojami pirmiausia kvėpavimo takų, odos ir minkštųjų audinių infekcijoms gydyti. Tačiau dėl skilimo jie lengvai praranda antibakterinį aktyvumą rūgštinėmis sąlygomis. Yra žinoma, kad suskaidyti produktai sukelia nepageidaujamą virškinimo trakto šalutinį poveikį. 1 Dėl rūgščių nestabilumo kylančios vaistų tiekimo problemos paskatino kurti naujesnius makrolidus. Padidėjęs rūgšties stabilumas ir padidėjęs antimikrobinio aktyvumo diapazonas apibūdina antros kartos makrolidus, tokius kaip klaritromicinas (CAM) ir azitromicinas (AZM) (1 paveikslas), kurie buvo plačiai skirti viršutinių ir apatinių kvėpavimo takų infekcijoms. 2 Deja, dėl šių makrolidų terapinio naudingumo greitai padidėjo kliniškai išskirtų bakterijų atsparumas. Du svarbiausius atsparumo makrolidams mechanizmus tarpininkauja atitinkamai ErS koduotas 23S rRNR metilinimas ir mef koduotas ištekėjimas. Ermėms atsparių veiksnių ekspresija bakterijose lemia metiltransferazės, modifikuojančios pagrindinį nukleotidą A2058, susidarymą makrolidų – linkozamido – streptogramino B (MLS B ) jungimosi vietoje, tokiu būdu sukuriant atsparumą makrolidų grupės antibiotikams. 4, 5, 6 Naujausios kartos makrolidai - ketolidai (pavyzdžiui, telitromicinas) pasižymi pagerėjusiu poveikiu kai kuriems atspariems kamienams ir gali pasiūlyti alternatyvų gydymą gramteigiamomis infekcijomis, priskirtomis atspariems patogenams. Buvo pranešta, kad jų veikimo mechanizmas sąveikauja su nukleotidu A752 tiesiogiai 23S rRNR II srityje, be pagrindinės vaistų sąveikos V srityje ir slopina baltymų sintezę blokuodamas pailgėjimą. Tai sąlygoja griežtesnį ribojimąsi su ribosomomis ir kai kurioms rūšims suteikia tam tikro aktyvumo prieš metiliuotas ribosomas. 9, 10

Image

Azitromicino, CP-544372 ir A-60565 struktūros.

Visas dydis

Aukštos skiriamosios gebos rentgeno spindulių bendrojo kristalo struktūrų tyrimas atskleidė, kad makrolidai jungiasi prie įėjimo į peptido tunelį 23S rRNR, o kladinozės grupė jų struktūrose yra prie G2505 suformuotos ertmės ir dera su ja. C2610 ir C2611 V srityje. 11 Remiantis rentgeno spindulių bendrojo kristalų struktūros tyrimo rezultatais, įvairios tyrimų grupės ištyrė daug naujų makrolidų darinių efektyviam atsparumui eritromicinui valdyti. 12 Dėl šių tyrimų buvo atrasti 4 ″ modifikuoti makrolidų dariniai, tokie kaip CP-544372 13 ir A-60565 14 (1 paveikslas). CP-544372 turi ilgą inkarų grupę kladinozės cukraus struktūros C-4 ″ padėtyje, kurios ilgis yra šeši atomai, nutolę nuo 4 ″ deguonies atomo iki aromatinio žiedo. Tai rodo gerą in vitro ir in vivo makrolidams atsparių organizmų, konkuruojančių su chloramfenikoliu, aktyvumą. Tai rodo, kad inkarų grupė gali patekti į peptidiltransferazės centro sritį, chloramfenikolio surišimo vietą. 15 A-60565, turintis ir 4 ″ -O- arilalkilacilo grupę, ir penkių narių ciklinį karbonatą, prijungtą prie 14 narių motinos žiedo C-11, 12, rodo antibakterinį poveikį ne tik eritromicinui jautriam S pyogenes EES61 ir 2707 (0, 12 ir 0, 03 μg ml −1 ), bet taip pat eritromicinui atsparus S. pyogenes 2548 (0, 12 μg ml −1 ). Šie 4 ″ modifikuoti makrolidų dariniai pasižymi didesniu afinitetu formuojant sąveiką su bakterinėmis ribosomomis. Įrodyta, kad padidėjęs afinitetas dėl papildomos sąveikos, kurią sukelia 4 ″ - O- arilalkilo šoninė grandinė. Be to, išsamiai ištirti 14 narių makrolidų darinių struktūros ir aktyvumo santykiai. Daugybė rezultatų parodė, kad arilalkilo grupė, prijungta prie kladinozinio cukraus C-4 ″ padėties, yra būtina norint įveikti MLS B atsparumą, tuo tarpu 11, 12 ciklo karbonato grupė arba 11, 12 ciklo karbamatas yra svarbus įveikiant. atsparumas ištekėjimui. Taigi struktūrinis esamų antibiotikų modifikavimas išlieka vienas iš veiksmingiausių būdų įveikti bakterijų atsparumą.

Azitromicinas yra pirmasis 15-nario eritromicino darinys, susidaręs pridedant metilo pakeisto azoto C-9a padėtyje. Pridedant antrąjį bazinį azoto atomą, kad susidarytų azalidinė struktūra, atrodo, kad ne tik išvengiama vaisto skilimo, bet ir padidinamas antibakterinis poveikis Haemophilus influenzae , kitoms gramneigiamoms bakterijoms ir netipiniams patogenams. Šis struktūrinis pakitimas taip pat lemia puikų audinių įsiskverbimą ir žymiai pailgėjusį pusinės eliminacijos periodą serume. AZM skeletas yra labai panašus į CAM, išskyrus tai, kad laktono žiedas išsiplėtė aplink C-9a padėtį. Tikėdamiesi paveldėti naudingus antibakterinius ir puikius farmakokinetinius profilius, neseniai pranešėme apie AZM 11, 12-ciklinio karbonato-4 ″ - O- karbamato darinių, kurie pagerino aktyvumą prieš eritromicinui atsparią S. pneumoniae, sintezę ( Papildomos medžiagos). 17, 18 Šie rezultatai paskatino mus toliau tyrinėti AZM kladinozės C-4 ″ padėties modifikacijas.

Schlünzen ir kt. pranešė, kad makrolidų, klindamicino ir chloramfenikolio rišamosios vietos skiriasi viena nuo kitos, tačiau jie parodė, kad nukleotidai sutampa. Makrolidų rišamosios struktūros sutapimas su klindamicinu ir chloramfenikoliu yra labai informatyvus kuriant naujus 4 ″ modifikuotus makrolidų darinius, turinčius aktyvumą prieš eritromicinui atsparius štamus. Ypač didelis nukleotidų kiekis peptido tunelyje sukelia daugybę galimų sąveikų, tokių kaip jungimasis vandeniliu, π kaupimas ir elektrostatinė sąveika. Todėl ilga inkarų grupė C-4 ″ padėtyje yra naudinga sąveikai su minėtomis nukleotidų rišimo vietomis peptido tunelyje. Norėdami nustatyti skirtingo ilgio 4 ″ - O- karbamoilo grupių poveikį antibakteriniam poveikiui, mes sukūrėme naujų 11, 12 ciklinių karbonato AZM 4 ″ - O- karbamato darinių su C-4 ″ pailgintomis šoninėmis grandinėmis seriją. įvairių arilpakeistų pirminių aminų kondensacija. Čia parinkti arilpakeisti pirminiai aminai buvo gauti iš 4-aminosviesto rūgšties jungiant su atitinkamais aminais. Kadangi jungimasis prie vandenilio ir π-stacking gali padidinti surišimo afinitetą, šių aminų struktūrose esantys pakeistieji aromatiniai fragmentai turi skirtingą molekulinę dalį ir skirtingą heteroatomų pasiskirstymą.

Rezultatai

Chemija

Arilpakeistų pirminių aminų ( 4 ) sintetinis metodas parodytas 1 schemoje. 4-aminosviesto rūgšties aminorūgšties apsauga nuo di-tret-butilo-dikarbonato (BOC2O), gaunant BOC-aminosviesto rūgštį ( 2 ). Kondensavus 2 su atitinkamu aminu, kurį katalizuoja dicikloheksilkarbodiimidas (DCC), esant 1-hidroksibenzotriazolui (HOBt), gaunamas amido produktas ( 3 ). Pašalinus BOC fragmentą iš 3 sočiųjų druskos rūgšties (HCl) etilo acetatu, buvo gauti norimi pirminiai aminai ( 4a - h ).

Image

Reagentai ir sąlygos: (a) BOC20, 1 M NaOH, THF, kambario temperatūra, 24 val., 76, 0%; (b) HOBt, DCC, THF, 0 ° C, 8 h, R1 NH2, kambario temperatūra, 2 h; c) HCl, AcOEt, kambario temperatūra, 2 val., 78, 1–85, 4% dviem etapais.

Visas dydis

2 schemoje aprašyta 11, 12-ciklinio karbonato AZM 4 ″ - O- karbamato darinių ( 7 ) sintezė, pradedant nuo AZM. Apsaugojant AZM 2′-hidroksilo grupę acto rūgšties anhidridu, esant trietilaminui (Et3N), gauta 2′- O- acetilazitromicinas ( 5 ). Apdorojant 5 1, 1′-karbonildi-imidazoliu (CDI), esant 75 ° C temperatūroje, esant Et3N, toluene, gauta 11, 12-karbonato 4 ″ - O- acilimidazolidas ( 6 ), kaip įprasta tarpinė medžiaga, skirta įvesti įvairias funkcines grupes. C-4 ″ padėtyje. Priešingai, apdorojant 5 CDI tirpalu kambario temperatūroje, gaunamas 4 ″ O- acilimidazolido produktas. Galiausiai, 11, 12-ciklinio karbonato AZM 4 ″ - O- karbamato dariniai ( 7ah ) buvo gauti jungiantis su atitinkamais aminais 4ah, esant 1, 8-diazabiciklo [5.4.0] undec-7- enas (DBU), po kurio selektyviai pašalinamas 2′- O- acetilo grupės apsauginis sluoksnis kaitinant metanoliu.

Image

Reagentai ir sąlygos: (a) acto anhidridas, CH2CI2, Et3N, kambario temperatūra, 12 val., 91, 2%; (b) CDI, Et3N, toluenas, 75 ° C, 24 val., 92, 1%; (c) R1 NH2, DMF, DBU, kambario temperatūra, 10 val .; (d) CH3OH, 55 ° C, 24 val., 68, 5–80, 7% dviem etapais.

Visas dydis

Antibakterinis aktyvumas

11, 12 ciklinio karbonato AZM 4 ″ - O- karbamato dariniai, taip pat EMA, CAM ir AZM kaip etalonai buvo išbandyti in vitro antibakterinio aktyvumo atžvilgiu prieš šešis gramneigiamų padermių fenotipus. Aktyvumai pateikiami 1 lentelėje kaip MIC, nustatyti naudojant sultinio mikroatskiedimo metodą. S. aureus ATCC25923, S. pyogenes ir S. pneumoniae ATCC49619 yra trys eritromicinui jautrūs štamai. S. pneumoniae B1, S. pneumonia e A22072 ir S. pneumoniae AB11 yra trys eritromicinui atsparūs štamai, kurių atsparumą užkoduoja atitinkamai erm genas, mef genas ir erm bei mef genai.

Pilno dydžio lentelė

11, 12-ciklinio karbonato AZM 4 ″ - O- karbamato darinių MIK vertės yra pateiktos 1 lentelėje. Visi ištirti junginiai parodė žymiai padidintą aktyvumą eritromicinui atsparios S. pneumoniae, užkoduotos erm geno arba erm, atžvilgiu. ir mef genai, palyginti su nuorodomis. Tarp jų 7b ir 7d junginiai pasižymėjo stipriausiu ermomicinui atspariu S. pneumoniae B1, kurį užkoduoja erm genas, aktyvumu (0, 5 μg ml −1 ), rodo 256 ir 256 kartus geresnį aktyvumą nei AZM arba EMA. Panašiai, 7b ir 7d junginiai buvo veiksmingiausi (0, 5 μg ml −1 ) prieš eritromicinui atsparų S. pneumoniae AB11, koduojamą ermo ir mef genų. Jų aktyvumas buvo atitinkamai 512 ir 512 kartų didesnis nei AZM ar EMA. Priešingai, visi tirti junginiai neparodė geresnio aktyvumo prieš eritromicinui atsparų S. pneumoniae A22072, koduojamą mef geno, palyginti su AZM ar CAM. Šie aukščiau aprašyti rezultatai aiškiai parodė, kad pailgintos arilalkilkarbamoilo grupės įvedimas į C-4 ″ padėtį ir ciklinio karbonato į 15 narių azalidų 11, 12 padėtį žymiai padidina aktyvumą prieš ermomicinui atsparias bakterijas, kurias užkoduoja erm. genas arba erm ir mef genas. Tačiau tik nedaugelis tirtų junginių turėjo antibakterinį poveikį eritromicinui jautrių padermių atžvilgiu. Tarp jų, 7a, 7e ir 7g junginiai turėjo stiprų poveikį S. aureus , o 7e ir 7g junginiai turėjo stiprų poveikį S. pyogenes , tačiau jie pasižymėjo mažesniu antibakteriniu aktyvumu nei EMA, CAM ar AZM. Šie rezultatai leido manyti, kad cheminė modifikacija, daranti įtaką konformacijai, gali turėti įtakos jų gebėjimui jungtis prie bakterijų ribosomų, todėl gali kisti antibakterinis aktyvumas.

Diskusija

Vykdydami nuolatines sintetines pastangas, susijusias su 4 ″ pakeistų azalidų darinių paruošimu, ankstesniame darbe ištyrėme naujų AZM 4 ″ - O- karbamato darinių AZM su C-4 ″ trumpa arilalkilo šonine grandine sintezę. 17, 18 publikuotame dokumente 18 mes pranešėme, kad visi tirti junginiai pasižymėjo stipriai veikiančiu eritromicinui jautrių bakterijų aktyvumu (0, 03–0, 12 μg ml −1 ), o kai kurie iš jų parodė stiprų aktyvumą (0, 06–0, 25 μg ml - 1 ) prieš eritromicinui atsparų S. pneumoniae A22072, koduojamą mef geno, palyginti su AZM arba CAM. Visų pirma junginiai, turintys 4-fluorbenzilo, feniletilo arba 3, 4-metilendioksifeniletilo grupes C-4 ″ padėtyje, buvo stipriausiai veikiami eritromicinui atsparios S. pneumoniae A22072, koduojamos mef geno (0, 06 μg ml −1 ). Veiksmingiausių junginių atveju arilalkilo šoninės grandinės ilgis buvo trys ar keturi atomai, nutolę nuo deguonies atomo C-4 ″ padėtyje iki aromatinio žiedo.

Modeliavimo tyrimai rodo, kad tarp peptidiltransferazės aktyviosios vietos ir makrolidų blokados gali tilpti šešios – aštuonios aminorūgštys. 11 Taigi, mes tikėjomės, kad prailginta inkarų grupė C-4 ″ padėtyje gali padidinti afinitetą naujoms nukleotidų surišimo vietoms peptido tunelyje, dar labiau sustiprindama antibakterinį aktyvumą atsparių padermių atžvilgiu. Remdamiesi didelės skiriamosios gebos rentgeno spindulių bendrojo kristalų struktūros tyrimo rezultatais 11, 19, kurie parodė makrolidų surišimo struktūros sutapimą su klindamicinu ir chloramfenikoliu, mes sukūrėme naujų 15 narių AZM darinių seriją su C-4 ″ pailgintos šoninės grandinės, kurių ilgis buvo aštuoni ar devyni atomai, nutolę nuo deguonies atomo C-4 ″ padėtyje iki aromatinio žiedo. Šie junginiai su pailgintomis šoninėmis grandinėmis parodė nepaprastai pagerėjusį poveikį štamams, kuriuos užkoduoja erm genas arba erm ir mef genai, palyginti su atitinkamais junginiais, turinčiais C-4 ″ trumpąją arilalkilo šoninę grandinę, apie kurią anksčiau pranešėme anksčiau. 18 Ypač 7b ir 7d junginiai pasižymėjo reikšmingu stipriu poveikiu atitinkamai eritromicinui atspariems štamams, užkoduotiems atitinkamai ermo geno ir ermo bei mef genų. Priešingai, beveik visi junginiai su pailgintomis C-4 ″ šoninėmis grandinėmis buvo mažiau aktyvūs prieš eritromicinui jautrias padermes nei atitinkami junginiai, turintys C-4 ″ trumpąją arilalkilo šoninę grandinę publikuotame darbe. 18 Šie aukščiau aprašyti rezultatai leidžia manyti, kad užsitęsusi šoninė grandinė gali dar labiau sustiprinti ermomicinui atsparių padermių, užkoduotų erm geno arba erm ir mef genų, aktyvumą, tačiau praranda savo aktyvumą prieš eritromicinui jautrias padermes.

Apibendrinant, buvo suprojektuoti, susintetinti ir įvertinti nauji 11, 12 ciklinio karbonato AZM 4 ″ - O- karbamato dariniai, atsižvelgiant į jų antibakterinį poveikį in vitro . Visi ištirti junginiai pastebimai pagerino aktyvumą dviem eritromicinui atsparių S. pneumoniae padermių atžvilgiu, kurių atsparumą užkoduoja erm genas ir erm bei mef genai. Tarp jų, 7b ir 7d junginiai buvo veiksmingiausi prieš eritromicinui atsparią S. pneumoniae, užkoduotą atitinkamai ermo geno ir ermo bei mef genų. Priešingai, tik 7a, 7e ir 7g junginiai pasižymėjo stipriu aktyvumu prieš eritromicinui jautrias padermes, tokias kaip S. aureus ir S. pyogenes . Šie rezultatai rodo, kad pailgintos arilalkilkarbamoilo grupės įvedimas į C-4 ″ padėtį gali smarkiai sustiprinti aktyvumą prieš eritromicinui atsparias bakterijas, koduojamas erm geno arba erm ir mef genų. Verta pastebėti, kad 4 ″ modifikuoti 14-narių makrolidų dariniai nėra vienintelė naujų makrolidų klasė efektyviam makrolidų atsparumo valdymui, o 4-modifikuoti 15-narių azalidų dariniai turi svarbią funkciją naujų makrolidų darinių, įveikiančių MLS B atsparumą, kūrimas.

Metodai

Bendrosios eksperimentinės procedūros

Visi būtini tirpikliai prieš naudojimą buvo išgryninti, nebent būtų nurodyta kitaip. Reakcijos buvo stebimos chromatografijos metodu, naudojant 0, 25 mm iš anksto padengtas silikagelio plokšteles (Qingdong Yumingyuan silikagelio reagento gamykla, Shandong, Kinija, YUYUAN). Flash chromatografija buvo atlikta nurodytais tirpikliais, naudojant silikagelį 60 (dalelių dydis 0, 040–0, 663 mm, Qingdong Yumingyuan silikagelio reagento gamykla). IR spektrai buvo registruojami KBr granulėse naudojant „Nicolet Nexus 470FT-IR“ spektrometrą („Nicolet Nexus“, Madisonas, WI, JAV). 1H NMR spektrai buvo užregistruoti Bruker Avance DRX 600 spektrometru aplinkos temperatūroje (TMS kaip vidinis cheminių poslinkių etalonas) (Bruker, Fällanden, Šveicarija). Masės spektrai buvo registruojami naudojant API 4000 instrumentą (Applied Biosystems, Middletown, CT, JAV). C, H, N analizė buvo atlikta naudojant PE-2400 elementų analizatorių (Perkin-Elmer, Waltham, MA, JAV). Lydymosi taškai yra nepataisyti ir buvo nustatyti naudojant X-6 lydymosi taško aparatą (Beijing Tianchengwode Biotech Co. Ltd, Pekinas, Kinija). AZM buvo naudojama kaip pradinė medžiaga iš Nexchem Pharmaceutical (Zhejiang, Kinija).

BOC-aminosviesto rūgštis (2)

Į 4-aminosviesto rūgšties (2, 0 g, 15, 27 mmol) tirpalą 1 M NaOH (15 ml) buvo lašinamas BOC20 (3, 7 g, 16, 97 mmol) THF (5 ml). Gautas tirpalas buvo maišomas 24 valandas kambario temperatūroje. Koncentruoti vakuume , reakcijos tirpalo pH buvo sureguliuotas iki 2–3 su 1 M citrinos rūgštimi ir ekstrahuotas etilo acetatu (3 x 15 ml). Sujungti organiniai sluoksniai plaunami sūrymu, džiovinami bevandeniu Na2S04, filtruojami ir sukoncentruojami vakuume. Gaunama 2, 98 g (76, 0%) 2 kaip baltos kietos medžiagos: RF = 0, 32 (dichlormetanas – metanolis, 10: 1). .

Bendrieji 4-aminobutirilo arilakilamino hidrochlorido (4a – h) metodai

Į 2 ° C (1, 5 g, 7, 35 mmol) ir HOBt (1, 13 g, 8, 09 mmol) tirpalo THF (10 ml) 0 ° C temperatūroje įlašinta DCC (1, 67 g, 8, 09 mmol) THF (5 ml). Gautas tirpalas maišomas 0 ° C temperatūroje 8 valandas. Pridėjus atitinkamo amino (7, 5 mmol), reakcijos mišinys maišomas 2 valandas toje pačioje temperatūroje ir filtruojamas. Filtratas išgarinamas vakuume iki sausumo. Likutis ištirpinamas etilo acetate (20 ml) ir gautas tirpalas plaunamas prisotintu NaHC03 tirpalu, 1 M citrinos rūgštimi ir sūrymu. Organinis sluoksnis išdžiovinamas bevandeniu Na2S04, filtruojamas ir sukoncentruojamas vakuume , gaunant neapdorotą produktą 3 .

Neapdorotas produktas 3 (6, 0 mmol) buvo ištirpintas prisotintame HCl etilo acetate (10 ml) ir mišinys maišytas 12 valandų kambario temperatūroje. Nuosėdos surinktos filtruojant ir plaunant šaltu etilo acetatu, gaunamas norimas produktas. Derlingumas buvo 78, 1–85, 4%.

2′- O -acetil-4 ″ - O- acilimidazolilo AZM 11, 12-ciklinis karbonatas (6)

6 junginys buvo gautas iš 5 tarpinio junginio, vadovaujantis Ma et al. 17 Neapdorotas 6 buvo išgrynintas greitąja chromatografija (dichlormetanas – metanolis, 20: 1) . Gauta 6 (92, 1%) kaip balta kieta medžiaga: lydymosi temperatūra 117–120 ° C; TLC RF = 0, 62 (dichlormetanas – metanolis, 10: 1); ESI-MS m / z apskaičiuota C45H74N4O15 911, 1; rasta (M + H) + 912, 4.

Bendrieji 11, 12 ciklinio karbonato AZM 4 ″ - O- karbamato darinių (7a – h) metodai

Į 6 (1, 33 g, 1, 50 mmol) tirpalą DMF (15 ml) pridėta DBU (0, 33 ml, 2, 25 mmol) ir atitinkamas aminas (2, 25 mmol). Gautas tirpalas maišomas 10 valandų kambario temperatūroje. Reakcija buvo užšaldyta vandeniu (30 ml) ir vandeninis sluoksnis ekstrahuotas etilo acetatu (3 x 15 ml). Sujungti organiniai sluoksniai plaunami druskos tirpalu (3 x 15 ml), džiovinami bevandeniu Na2S04 ir filtruojami. Filtratas sukoncentruojamas vakuume, kad būtų gautas nevalytas produktas.

Aukščiau pateikto neapdoroto produkto tirpalas metanolyje (15 ml) pašildomas iki 55 ° C ir maišomas 24 valandas toje pačioje temperatūroje. Koncentravęs reakcijos tirpalą vakuume , liekana išgryninama greitosios chromatografijos būdu (dichlormetanas – metanolis, 20: 1), kad gautų 7ah junginius, kurių išeiga būtų nuo 68, 5 iki 80, 7%.

4 ″ - O - (((4-hidroksifenetil) amino) -4-oksobutil) karbamoilazitromicino 11, 12-ciklinis karbonatas (7a)

Balta kieta medžiaga, išeiga 68, 5%, lyd.: 146–150 ° C; TLC RF = 0, 518 (dichlormetano ir metanolio santykis 10: 1); IR (KBr): 3410, 2972, 2936, 1812, 1727, 1652, 1615, 1594, 1515, 1456, 1379, 1238, 1169, 1109, 1074, 1046, 1015 cm- 1 ; ' H NMR (600 MHz, CDCI3) 8 7, 03 (d, J = 8, 4 Hz, 2H), 6, 79 (d, J = 8, 4 Hz, 2H), 5, 06 (d, J = 4, 8 Hz, 1H), 4, 95 (m. 1H), 4, 50 (m, 1H), 4, 45 (m, 1H), 4, 40–4, 35 (m, 2H), 3, 66–3, 62 (m, 2H), 3, 49–3, 47 (m, 1 H), 3, 37–3, 30 (m., 4H), 3, 23–3, 18 (m, 3H), 3, 17–3, 10 (m, 2H), 2, 87–2, 84 (m, 3H), 2, 74 (t, 2H), 2, 44 (m, 1H), 2, 39–2, 37 (m, 9H), 2, 18 (m, 4H), 2, 11 (t, 2H), 1, 91 (m, 2H), 1, 87–1, 81 (m, 2H), 1, 74–1, 69 (m, 2H), 1, 67–1, 57 (m, 3H). ), 1, 44 (m, 4H), 1, 30 (m, 4H), 1, 25–1, 20 (m, 6H), 1, 17–1, 15 (m, 6H), 0, 95–0, 87 (m, 9H); ESI-MS m / z apskaičiuota C 52H 86N 4O 16 1022.6; rasta (M + H) + 1024, 0; analizė apskaičiuota C 52 H 86 N 4 O 16 : C 61, 04, H 8, 47, N 5, 48. Rasta: C 61, 17, H 8, 50, N 5, 46.

4 ″ - O - (((4-metoksibenzil) amino) -4-oksobutil) karbamoilazitromicino 11, 12-ciklinis karbonatas (7b)

Balta kieta medžiaga, išeiga 74, 5%, lydymosi temperatūra: 126–130 ° C, TLC RF = 0, 574 (dichlormetanas – metanolis, 10: 1); IR (KBr): 3426, 2971, 2936, 2835, 1812, 1724, 1655, 1613, 1513, 1457, 1379, 1353, 1301, 1247, 1170, 1110, 1074, 1045, 1015 cm- 1 ; ' H NMR (600 MHz, CDCI3) 8 7, 20 (d, J = 9, 0 Hz, 2H), 6, 87–6, 81 (m, 2H), 5, 10–5, 07 (m, 1H), 4, 88 (dd, J = 9, 0 Hz, J = 3, 6 Hz, 1H), 4, 54–4, 52 (d, J = 9, 6 Hz, 1H), 4, 44–4, 35 (m, 7H), 3, 80–3, 78 (m, 3H), 3, 68–3, 63 (m, 1H), 3, 60. (m, 1H), 3, 33–3, 31 (m, 3H), 3, 28–3, 20 (m, 4H), 2, 96–2, 86 (m, 3H), 2, 43–2, 41 (m, 2H), 2, 37–2, 33 (m, 6H)., 2, 28–2, 22 (m, 3H), 2, 20 (m, 3H), 1, 99 (m, 1H), 1, 92 (m, 1H), 1, 91–1, 80 (m, 4H), 1, 75 (m, 1H), 1, 65–1, 61 (m, 2H), 1, 60–1, 58 (m, 2H), 1, 55–1, 53 (m, 2H), 1, 47–1, 44 (s, 4H), 1, 28–1, 25 (m, 5H), 1, 24–1, 17 (m, 9H)., 1, 17–1, 11 (m, 4H), 1, 07–1, 01 (m, 6H), 0, 98–0, 87 (m, 6H); ESI-MS m / z apskaičiuota C 52H 86N 4O 16 1022.6; rasta (M + H) + 1024, 3; analizė apskaičiuota C 52 H 86 N 4 O 16 : C 61, 04, H 8, 47, N 5, 48. Rasta: C 60, 97, H 8, 44, N 5, 49.

4 ″ - O - (((4-fluorbenzil) amino) -4-oksobutil) karbamoilazitromicino 11, 12-ciklinis karbonatas (7c)

Balta kieta medžiaga, išeiga 72, 0%, lydymosi temperatūra: 126–130 ° C, TLC RF = 0, 56 (dichlormetanas – metanolis, 10: 1); IR (KBr): 3431, 2970, 2932, 1813, 1734, 1647, 1510, 1457, 1379, 1353, 1298, 1222, 1167, 1110, 1074, 1046, 1015 cm- 1 ; ' H NMR (600 MHz, CDCI3) 8 7, 27–7, 25 (m, 2H), 7, 03–7, 00 (m, 2H), 5, 08 (m, 1H), 4, 89 (dd, J = 9, 0 Hz, J = 3, 0 Hz, 1H), 4, 54–4, 52 (m, 1H), 4, 47–4, 44 (m, 1H), 4, 41–4, 35 (m, 2H), 4, 31–4, 28 (m, 1H), 4, 16–4, 13 (m, 1H), 3, 80 ( m, 1H), 3, 66–3, 59 (m, 2H), 3, 37–3, 29 (m, 3H), 3, 27–3, 13 (m, 3H), 2, 89–2, 85 (m, 3H), 2, 66 (m, 1H), 2, 44–2. 2, 42 (m, 1H), 2, 40–2, 35 (m, 6H), 2, 33–2, 29 (m, 3H), 2, 27–2, 24 (m, 1H), 2, 22–2, 20 (m, 1H), 2, 07–2, 00 (m, 3H) ), 1, 92 (m, 2H), 1, 89–1, 80 (m, 2H), 1, 68–1, 53 (m, 4H), 1, 46–1, 44 (m, 4H), 1, 33–1, 29 (m, 4H), 1, 27–1, 23 (m., 3H), 1, 24–1, 19 (m, 7H), 1, 15 (m, 3H), 1, 11–1, 05 (m, 6H), 0, 98–0, 84 (m, 6H); ESI-MS m / z apskaičiuota C 51 H 83 FN 4 O 15 1010, 6; rasta (M + H) + 1011, 9; analizė apskaičiuota C 51 H 83 FN 4 O 15 : C 60, 57, H 8, 27, N 5, 54. Rasta: C 60, 44, H 8, 30, N 5, 50.

4 ″ - O - (((2-chlorfenetil) amino) -4-oksobutil) karbamoilazitromicino 11, 12-ciklinis karbonatas (7d)

Balta kieta medžiaga, išeiga: 77, 5%, lydymosi temperatūra: 145–148 ° C, plonasluoksnė chromatografija RF = 0, 53 (dichlormetanas – metanolis, 10: 1); IR (KBr): 3428, 2972, 2936, 1812, 1723, 1656, 1517, 1456, 1379, 1353, 1335, 1298, 1237, 1167, 1109, 1074, 1046, 1015 cm- 1 ; ' H NMR (600 MHz, CDCI3) 8 7, 36 (m, 1H), 7, 24–7, 16 (m, 3H), 5, 11–5, 08 (m, 2H), 4, 88 (dd, J = 9, 0 Hz, J = 3, 0 Hz, 1H), 4, 54–4, 50 (m, 1H), 4, 45–4, 35 (m, 3H), 3, 66–3, 59 (m, 1H), 3, 56–3, 53 (m, 2H), 3, 31 (m, 3H), 3, 29–3, 26 ( m, 2H), 3, 23–3, 19 (m, 3H), 2, 98–2, 96 (t, 3H), 2, 89–2, 84 (m, 3H), 2, 64 (m, 2H), 2, 43–2, 41 (m, 1H), 2, 38 –2, 31 (m, 6H), 2, 26–2, 20 (m, 3H), 2, 18–2, 16 (m, 2H), 2, 07–2, 00 (m, 2H), 1, 91 (m, 1H), 1, 86–1, 76 (m, 2H)., 1, 65–1, 59 (m, 2H), 1, 45 (m, 4H), 1, 31–1, 29 (m, 4H), 1, 29–1, 25 (m, 2H), 1, 22–1, 19 (m, 7H), 1, 15 (m, 3H). 1, 07 (m, 6H), 0, 93–0, 87 (m, 6H); ESI-MS m / z apskaičiuota C 52 H 85 ClN 4 O 15 1040, 6; rasta (M + H) + 1041, 9; analizė apskaičiuota C 52 H 85 ClN 4 O 15 : C 59, 96, H 8, 22, N 5, 38. Rasta: C 60, 06, H 8, 20, N 5, 40.

4 ″ - O - (((3-chlorbenzil) amino) -4-oksobutil) karbamoilazitromicino 11, 12-ciklinis karbonatas (7e)

Balta kieta medžiaga, išeiga 76, 5%, lydymosi temperatūra: 145–148 ° C, PLC RF = 0, 52 (dichlormetanas – metanolis, 10: 1); IR (KBr): 3427, 2972, 2935, 1812, 1723, 1656, 1599, 1575, 1521, 1459, 1380, 1353, 1238, 1167, 1109, 1076, 1045, 1015 cm- 1 ; ' H NMR (600 MHz, CDCI3) 8 7, 31 (m, 1H), 7, 27–7, 22 (m, 2H), 7, 20–7, 18 (m, 1 H), 5, 04 (d, J = 4, 2 Hz, 1 H), 4, 88 ( dd, J = 9, 0 Hz, J = 3, 0 Hz, 1H), 4, 58–4, 53 (m, 2H), 4, 47–4, 39 (m, 3H), 4, 30 (m, 2H), 4, 07 (t, 1H), 3, 60–3, 59 (d, J = 6, 0 Hz, 1H), 3, 45–3, 42 (m, 2H) 3, 30–3, 28 (m, 3H), 3, 28–3, 18 (m, 2H), 2, 88–2, 78 (m, 3H), 2, 69 (m, 6H), 2, 46–2, 44 (m, 1H), 2, 37–2, 35 (m, 2H), 2, 31–2, 28 (m, 2H), 2, 23–2, 21 (m, 3H), 2, 06–2, 02 (m, 1H), 1, 93–2. 1, 81 (m, 4H), 1, 65–1, 60 (m, 3H), 1, 51 (m, 1H), 1, 45 (m, 3H), 1, 42–1, 34 (m, 3H), 1, 28 (m, 3H), 1, 25–1, 19 ( m, 8H), 1, 17 (m, 3H), 1, 11–1, 07 (m, 3H), 1, 02–0, 87 (m, 9H); ESI-MS m / z apskaičiuota C51H83CIN4O15 1026, 6; rasta (M + H) + 1028, 0; analizė apskaičiuota C 51 H 83 ClN 4 O 15 : C 59, 60, H 8, 14, N 5, 45. Rasta: C 59, 50, H 8, 18, N 5, 41.

4 ″ - O - (((benzil) amino) -4-oksobutil) karbamoilazitromicino 11, 12-ciklinis karbonatas (7f)

Balta kieta medžiaga, išeiga 73, 5%, lydymosi temperatūra: 120–122 ° C, PLC RF = 0, 53 (dichlormetanas – metanolis, 10: 1); IR (KBr): 3423, 2972, 1813, 1725, 1659, 1514, 1455, 1379, 1353, 1299, 1238, 1167, 1110, 1074, 1046, 1015 cm- 1 ; ' H NMR (600 MHz, CDCI3): 8 7, 34–7, 27 (m, 5H), 5, 07 (d, J = 4, 8 Hz, 1H), 4, 88 (dd, J = 4, 0 Hz, J = 4, 8 Hz, 1H), 4, 53 (d, J = 9, 6 Hz, 1H), 4, 45–4, 34 (m, 4H), 3, 61–3, 59 (m, 3H), 3, 32 (m, 3H), 3, 29–3, 16 (m, 3H), 2, 88 (m, 3H), 2, 44 (m, 2H), 2, 44–2, 33 (m, 8H), 2, 20 (m, 4H), 2, 18 (m, 1H), 2, 02 (m, 2H), 1, 98 (m, 2H), 1, 92–1, 77. (m, 4H), 1, 59–1, 56 (m, 1H), 1, 45 (m, 4H), 1, 30–1, 29 (m, 4H), 1, 22–1, 19 (m, 9H), 1, 16–1, 14 (m, 3H), 1, 07. –1, 05 (m, 6H), 0, 93–0, 89 (m, 6H); ESI-MS m / z apskaičiuota C 51H 84 N 4 O 15 992, 6; rasta (M + H) + 994, 0; analizė apskaičiuota C 51H 84 N 4 O 15 : C 61, 67, H 8, 52, N 5, 64. Rasta: C 61, 58, H 8, 57, N 5, 69.

4 ″ - O - (((feniletil) amino) -4-oksobutil) karbamoilazitromicino 11, 12-ciklinis karbonatas (7g)

Balta kieta medžiaga, išeiga 76, 5%, lydymosi temperatūra: 158–164 ° C, plonasluoksnė chromatografija RF = 0, 55 (dichlormetanas – metanolis, 10: 1); IR (KBr): 3411, 3063, 2971, 2933, 1812, 1721, 1653, 1524, 1456, 1379, 1353, 1239, 1167, 1109, 1044, 1014 cm- 1 ; ' H NMR (600 MHz, CDCI3) 8 7, 31–7, 28 (m, 2H), 7, 27–7, 20 (m, 3H), 5, 03 (d, J = 4, 2 Hz, 1 H), 4, 88 (dd, J = 9, 0 Hz, J = 3, 0 Hz, 1H), 4, 58–4, 52 (m, 1H), 4, 40–4, 28 (m, 3H), 3, 76 (m, 2H), 3, 65–3, 53 (m, 4H), 3, 35–3, 30 (m, 3H), 3, 22–3, 19 (m, 3H), 2, 85–2, 83 (m, 3H), 2, 78 (m, 5H), 2, 46–2, 42 (m, 1H), 2, 38–2, 31 (m, 3H), 2, 22–2, 02 ( m, 9H), 1, 92 (m, 3H), 1, 87–1, 73 (m, 3H), 1, 70–1, 56 (m, 3H), 1, 45 (m, 4H), 1, 41–1, 35 (m, 3H), 1, 28 (m, 3H), 1, 23 (m, 4H), 1, 20–1, 18 (m, 3H), 1, 16 (m, 3H), 1, 01–0, 96 (m, 3H), 0, 96–0, 86 (m, 6H); ESI-MS m / z apskaičiuota C 52 H 86 N 4 O 15 1006, 6; rasta (M + H) + 1007, 9; analizė apskaičiuota C 52 H 86 N 4 O 15 : C 62, 01, H 8, 61, N 5, 56. Rasta: C 61, 96, H 8, 57, N 5, 59.

4 ″ - O - (((pentil) amino) -4-oksobutil) karbamoilazitromicino 11, 12-ciklinis karbonatas (7h)

Balta kieta medžiaga, išeiga 80, 7%, lydymosi temperatūra 132–136 ° C, TLC RF = 0, 54 (dichlormetanas – metanolis, 10: 1); IR (KBr): 3419, 2934, 2872, 1814, 1724, 1653, 1518, 1457, 1379, 1238, 1167, 1110, 1074, 1046, 1015 cm- 1 ; ' H NMR (600 MHz, CDCI3): 5 5, 08 (d, J = 4, 2 Hz, 1H), 4, 88 (dd, J = 9, 0 Hz, J = 3, 6 Hz, 1H), 4, 55 (m, 1H), 4, 45 ( d, J = 7, 2 Hz, 1H), 4, 40–4, 35 (m, 2H), 3, 66–3, 64 (m, 1H), 3, 60–3, 59 (m, 1H), 3, 34–3, 29 (m, 4H), 3, 29–3, 20 ( m, 5H), 2, 87–2, 86 (m, 3H), 2, 43–2, 41 (m, 1H), 2, 38–2, 35 (m, 6H), 2, 41–2, 35 (m, 6H), 2, 26 (m, 1H), 2, 22–2 2, 18 (m, 6H), 1, 92 (m, 1H), 1, 87–1, 79 (m, 4H), 1, 66–1, 55 (m, 4H), 1, 53–1, 46 (m, 4H), 1, 48–1, 41 (m, 2H), 1, 36–1, 27 (m, 5H), 1, 22–1, 20 (m, 9H), 1, 16 (m, 3H), 1, 07 (m, 3H), 0, 93–0, 86 (m, 9H); ESI-MS m / z apskaičiuota C 49 H 88 N 4 O 15 972, 6; rasta (M + H) + 974, 0; analizė apskaičiuota C 49 H 88 N 4 O 15 : C 60, 47, H 9, 11, N 5, 76. Rasta: C 60, 57, H 9, 08, N 5, 71.

Papildoma informacija

„Word“ dokumentai

  1. 1.

    Papildomos medžiagos

    Papildoma informacija pridedama prie leidinio „The Journal of Antibiotics“ svetainėje (//www.nature.com/ja).