Translokacija t (1; 16) (p31; q24), pertvarkant cbfa2t3, būdinga ūminei eritroidinei leukemijai | leukemija

Translokacija t (1; 16) (p31; q24), pertvarkant cbfa2t3, būdinga ūminei eritroidinei leukemijai | leukemija

Anonim

Dalykai

  • Ūminė mieloleukemija
  • Genetinė translokacija

Ūminėms eritroidinėms leukemijoms būdinga kaulų čiulpų ląstelių eritroidinių populiacija. Dauguma autorių sutinka, kad egzistuoja du pagrindiniai potipiai: (1) eritroleukemija (eritroidas / mieloidas) arba ūminė mieloidinė leukemija (AML) M6a, remiantis Prancūzijos, Amerikos ir Britanijos kriterijais, 1, 2, kuriuose> 50% eritroidų pirmtakų yra visame branduolinių ląstelių populiacija ir> 20% mieloblastų ne eritroidinių ląstelių populiacijoje, ir (2) gryna eritroidinė leukemija arba AML M6b pagal prancūzų-amerikiečių-britų klasifikaciją, 1, 2, kurioje eritroblastai sudaro daugiau kaip 80% kaulų čiulpų ląstelių, kuriose nėra reikšmingo mieloblastinio komponento. 1, 2, 3 kadangi eritroleukemija (eritroidas / mieloidas) dažniausiai yra suaugusiųjų liga ir apima 5–6% visų AML atvejų, 4 gryna eritroidinė leukemija yra ypač reta, paprastai siejama su greita klinikine eiga ir gali pasireikšti visų amžiaus grupių. 5 „Mitelman“ duomenų bazėje apie chromosomų aberacijas ir genų susiliejimus sergant vėžiu pateikiama kariotipinė informacija apie 600 ūminės eritroidinės leukemijos atvejų. Dažniausiai pasitaikantys pokyčiai yra struktūriniai ir skaitmeniniai 5 ir 7 chromosomų pokyčiai, po kurių seka trisomija. Šie aberacijos būdingi ir kitiems AML potipiams 7, ir iš tikrųjų atrodo, kad nėra specifinės chromosomų aberacijos ar patogenezinio mechanizmo (pvz., sintezės geno arba genų panaikinimo), dėl kurio atsirado eritroidinė leukemija.

Į vietinę ligoninę paguldytas 15 mėnesių berniukas, kuriam anksčiau nebuvo klestėjęs, užsitęsęs viduriavimas, vėmimas ir didelis karščiavimas. Buvo diagnozuota gryna eritroidinė leukemija (AML M6b; 1 pav.) Ir pradėtas gydymas pagal NOPHO-AML 2004 protokolą (Šiaurės šalių vaikų hematologijos ir onkologijos draugija) 8, tačiau pacientas mirė nuo atsparios ligos po 5 mėnesių.

Image

a ) Kaulų čiulpų tepinėlis (600 x, Wright – Giemsa dėmė). Tepinėlis rodo nenormalius proeritroblastus. Eritroblastai yra vidutinio ar didelio dydžio, su disperguotu chromatinu, iškiliais nukleoliais ir citoplazmos vakuolėmis. b ) Kaulų čiulpų skyrius (400 ×, dėmė HE). Vyraujanti nesubrendusių eritroblastų, turinčių apvalius ar netaisyklingus branduolius ir bazofilinę citoplazmą, populiacija pakeičia įprastą kraujodaros sistemą.

Visas dydis

Trumpalaikių išaugintų kaulų čiulpų ląstelių G juostos analizė parodė nenormalų kariotipą, aiškinamą kaip 46, XY, der (1) t (1; 1) (p31; q21), t (1; 16) (p31; q24). [11] / 46, XY [9]. Fluorescencinė hibridizacija in situ , naudojant CBFB dvigubą spalvų pertraukos pertvarkymo zondą, neparodė CBFB pertvarkymo; taigi rasta translokacija negalėjo būti žinomo su AML susijusio inv (16) ar t (16; 16) variantas. Siekiant nustatyti tikslius t (1; 16) (p31; q24), lūžio taškus buvo atlikta eilė fluorescencinių in situ hibridizacijos eksperimentų su zondais, gautais iš bakterijų dirbtinių chromosomų; jie buvo rasti naudojant klonus RP11-430G17 (atvaizdavimas į 1p31.3) ir RP11-830F9 (atvaizdavimas į 16q24.3; 2 paveikslas). Hibridizacijos radiniai fluorescencijos in situ metu leido iš naujo interpretuoti 1; 16 pertvarkymą kaip nesubalansuotą translokaciją, o kariotipas buvo pataisytas kaip 46, XY, der (1) t (1; 1) (p31; q21), del (1). (p11p31), der (16) t (1; 16) (p31; q24) (3 paveikslas).

Image

Fluorescenciniai metafazinių plokštelių hibridizacijos vaizdai iš AML M6. a ) Ši hibridizacija buvo atlikta naudojant lokusui specifinius zondus, gautus iš bakterijų dirbtinių chromosomų klonų CTD-3010L24 (pažymėto žaliai), RP11-830F9 (pažymėto mėlyna spalva), CTD-2555A7 (pažymėto raudona spalva) ir RP11-1122C1 (pažymėto žyma). geltona spalva), visi vaizduojami į 16q24. Nors mėlynai ir žalia spalva pažymėti klonai hibridizuojasi su įprastu 16 ir der (16) t (1; 16), raudonai ir geltonai pažymėti klonai hibridizuojasi tik su įprastu 16, tai rodo, kad klonų trūksta iš naujo išdėstytų. chromosoma, tai yra, prasideda delecija (lūžio taškas yra) tarp klonų RP11-830F9 (pažymėtų mėlyna spalva) ir CTD-2555A7 (pažymėtų raudona spalva). ( b ) Ši hibridizacija buvo atlikta naudojant dirbtinius bakterijų chromosomų klonus RP11-430G17 (pažymėti raudonai), RP11-446E24 (pažymėti žalia spalva) ir CTD-3251C12 (pažymėtą geltona spalva), nurodant į 1p32.3-1p33 ir hibridizuojant tik der (16) t (1; 16); klonai, artimi RP11-430G17, buvo ištrinti, tai yra, 1-osios chromosomos lūžio taškas yra šalia RP11-430G17 klono arba jo viduje. c ) Ši hibridizacija buvo atlikta naudojant dirbtinius bakterijų chromosomų klonus RP11–230B22 (pažymėti geltonai), RP11–434H24 (pažymėti žalia spalva) ir RP11–746E15 (pažymėtą raudona spalva), visus žymint 1p31.3 ir hibridizuojant tik der (1) t (1; 1), tai yra, paskutiniai klonai, esantys persitvarkyme prieš homozigotinę deleciją.

Visas dydis

Image

Dalinis dermos (1) t (1; 1) (p31; q21), del (1) (p11p31) ir der (16) t (1; 16) kariotipas, nustatytas aprašytu atveju. G-juostos chromosomos pateiktos kairėje pusėje, o pertvarkytų chromosomų ideogramos - dešinėje. Rodyklės nukreiptos į lūžio taško vietas.

Visas dydis

Tiksliam dermos lūžio taškui (16q) nustatyti, chr16 regione buvo parinkti tinkami fosmidiniai klonai: 87 493 639–87 591 195 (16q24), nes lūžio taškas buvo nustatytas remiantis bakterijų dirbtinių chromosomų duomenimis. Šiame regione yra tik vienas genas, šerdį rišantis faktorius, runto domenas, alfa 2 subvienetas, perkeltas į 3 ( CBFA2T3 , anksčiau žinomas kaip MTG16 , mieloidinės translokacijos genas). 16-osios chromosomos lūžio taškas buvo nustatytas CBFA2T3 geno didžiojo introno 1 viduje. CBFA2T3 koduoja baltymą mieloidinių translokacijų genų šeimoje, kurioje yra transkripciniai koreresoriai. CBFA2T3 rekombinacija su RUNX1 genu buvo įrodyta šešiais AML atvejais, esant (16; 21) (q24; q22) 9, o paskui su CBFA2T3 lūžio tašku tarp 1 ir 2 egzonų arba tarp 3 ir 4 egzonų. keturi evoliuciškai išsaugoti motyvai, tai yra, NHR1, NHR2, NHR3 ir cinko piršto domenas NHF4. 9 Mūsų atveju lūžio taškas buvo 1 introne, todėl pertvarkymo produktas buvo panašus į anksčiau aprašytą.

Norėdami sužinoti, kuris genas buvo susijęs su 1 chromosoma, mes pasirinkome tris chromosomų srities viduje esančius fosidinius klonus: 61 917 304–62 051 594 (1p31.3), nes čia buvo nustatyta lūžio taško padėtis, naudojant bakterijų dirbtinius chromosomų klonus. . Čia yra du genai: TM2D1 (beta amiloidą rišančio baltymo pirmtakas) ir INADL (panašus į InaD). Hibridizacijos eksperimentai in situ, naudojant kloną G248P88729H1, parodė specifinį hibridizacijos signalą ant der (1) t (1; 1), tuo tarpu klonai G248P86539D6 ir G248P8780H2 nenormaliose metafazėse nesuteikė jokio signalo, o normaliose 1 byla; todėl darome prielaidą, kad genominės sritys, atitinkančios šiuos fosmidus, buvo išbrauktos nesubalansuoto 1; 16-pertvarkymo metu. Du svarbiausi genai, esantys lokaliai arčiausiai lūžio taško, TM2D1 ir INADL , buvo rasti iš dalies arba visiškai ištrinti. Fosmidinių klonų skiriamoji geba neleidžia tiksliai nustatyti lūžio taško padėties, tačiau INADL genas prarado savo 3 ′ galą, tuo tarpu 5 ′ galas vis dar buvo der (1) t (1; 1). ). Didelė TM2D1 dalis taip pat buvo prarasta dėl pertvarkymų, tačiau įmanoma, kad sekos, esančios šalia šio geno 5 ′ ir 3 ′ galo, vis dar yra der (1) t (1; 1) ir (arba) t (1; 16). INADL koduoja baltymą, turintį kelis PDZ domenus, kurie tarpininkauja baltymų ir baltymų sąveikai, o baltymai, turintys kelis PDZ domenus, dažnai organizuoja multimerinius kompleksus plazmos membranoje. INADL baltymas lokalizuojasi į tam tikras sankryžas ir epitelio ląstelių viršūninę membraną. 10 TM2D1 genas koduoja β-amiloido peptidus surišantį baltymą. 11 Jame yra struktūrinis modulis, susijęs su septynių transmembraninio domeno G baltymų sujungto receptorių superšeima, žinomu kaip svarbiu heterotrimerinio G baltymo aktyvinimui (UCSC genomo naršyklė, //genome.ucsc.edu/cgi-bin/).

Deja, RNR, gauta iš leukeminio kraujo, buvo labai suskaidyta ir negalėjo būti naudojama atvirkštinės transkripcijos PGR ar greito cDNR galų amplifikavimo tyrimams - to reikėjo norint nustatyti kariotipinių pakitimų molekulinius padarinius. Tačiau atsižvelgiant į aukščiau aprašytus duomenis, galima numatyti du pagrindinius numanomus leukemogeninius mechanizmus. Pirmasis yra tas, kad sulietas genas su CBF2T3, kaip jo 3 'fragmentą, galėjo būti sugeneruotas atliekant 1:16 translokaciją. Tai, kad CBFA2T3, kaip žinoma, veikia per sintezės geno mechanizmą kitų tipų AML 9 ir tada parodo panašią lūžio vietą (tarp 1 ir 2 egzonų) kaip ir mūsų atveju, prideda šią hipotezę patrauklesne. Du CBFA2T3 partneriai kandidatai tokioje sintezėje būtų INADL ir TM2D1 . Nei vienas iš jų nedalyvauja leukemogenezėje, nesusijęs su jokiu kitu genų susiliejimu ar, tuo labiau, jokiu kitu būdu. Antrasis mechanizmas, kurį rodo mūsų išvados, galėtų būti veiksmingas šiuo atveju, tai naviko slopintuvo aktyvumo praradimas iš 1p srities, kaip homozigotiškai pašalinta. Šiame regione yra keturi genai: TM2D1 , INADL , L1TD1 (1 eilutės tipo transposazės domenas, kuriame yra 1) ir KANK4 ( ankyrino pakartotinis domenas 38). Nors pirmieji du genai gali būti iš dalies ištrinti ir todėl juos galima sujungti su CBFA2T3 16q, paskutiniai du yra visiškai prarasti. L1TD1 priklauso 22 transposazių šeimai ir vienintelė turima informacija apie ją šiuo metu yra ta, kad LINE-1 hipometilinimas susijęs su padidėjusiu CpG salos metilinimu Helicobacter pylori susijusiame išsiplėtusiame kartyje. 12 KANK4 yra vienas iš genų, koduojančių Kank šeimos baltymus, pasižyminčius jų unikalia struktūra, ritės motyvu N-galo srityje ir ankyrininių pakartojimų C-galo srityje su papildomu motyvu, KN, ties N-galas. 13 Nors žmogaus Kank1 genas ( KANK1 ) buvo rastas kaip kandidatas naviko slopinančiam genui inkstų ląstelių karcinomai susieti su 9p24 chromosomos juosta, kiti nariai buvo rasti remiantis domenų ir filogenetinėmis analizėmis. Gauta pranešimų apie KANK1 lokusų ištrynimą inkstų ląstelių karcinomos, gimdos kaklelio karcinomos, šlapimo pūslės vėžio, kepenų ląstelių karcinomos, kasos karcinomos, plaučių vėžio, ūminės limfoleukemijos ir krūties vėžio atvejais. Mes radome kitą Kankų šeimos narį - KANK4 , mūsų atveju homozigotiškai ištrintą. Ar šis trynimas buvo patogenetiškai svarbus, kol kas nežinoma.

Nepriklausomai nuo to, kurie genai patogenetiškai dalyvauja t (1; 16) (p31; q24), taip pat nepriklausomai nuo to, ar svarbus rezultatas yra leukemogeninio sintezės geno generavimas (hipotezė, kuriai mes pritariame), ar kažkas kita, atrodo, kad ne pagrįstų abejonių, kad 1, 16-translokacija yra būdinga ūminei eritroidinei leukemijai. „Mitelman“ duomenų bazės paieška rodo, kad penkiais atvejais buvo rastas 1; 16 pertvarkymas, 6 - iš dviejų, iš jų dviem - du (1; 16) (p31; q24), tai yra, tas pats perkėlimas, nustatytas mūsų pacientas. Köller ir kt. 14 pranešė apie 10 metų vaiką, sergantį ūmia eritroidine leukemija ir 47, XY, t (1; 16) kariotipu (p31; q2? 2), del (7) (q31), + 19, del (20) ( p11). Castaneda ir kt. 15 pranešė apie 6 metų vaiką, sergantį ūmia nediferencijuota leukemija, tačiau ten, kur leukemijos ląstelės parodė ankstyvą eritroidinės kilmės diferenciaciją. Diagnostikos ir atkryčio metu nustatytas nenormalus kariotipas buvo 51, XY, t (1; 16) (p31; q24), + 6, + 10, + 15, + 19, + 21. Taigi šis atvejis yra trečiasis iš trijų, kurių kariotipas yra (1; 16) (p31; q24), ir atrodo, kad jie visi buvo labai nedažni AML M6. Ar šis ryšys dar labiau išsiskiria su gryna eritroidine leukemija (AML M6b), kaip su mūsų pacientu, ar tik su ūmine eritroidine leukemija apskritai, negali būti įvertintas remiantis mažu iki šiol aprašytu pacientų skaičiumi.